Page 38 - 《中国药房》2025年20期
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morphogenetic  protein  2 （BMP2）  in  rabbit  femoral  tissues  were  determined.  The  expressions  of  RIPK1/RIPK3/MLKL  signaling
          pathway-related proteins in femoral tissues were detected. RESULTS Compared with the Control group， serum contents of TNF-α
          and  IL-6，  Tb.Sp，  empty  bone  cavity  rate，  cell  apoptosis  rate，  phosphorylation  levels  of  RIPK1，  RIPK3  and  MLKL  in  femoral
          tissue were significantly increased in the Model group （P＜0.05）. BMD， Tb.Th， Tb.N， as well as the mRNA expression of VEGF
          and BMP2， along with protein expression of caspase-8， in the femoral tissues were all decreased （P＜0.05）. The bone cells in the
          femoral  tissue  were  unevenly  distributed，  and  the  trabeculae  were  arranged  sparsely.  Compared  with  the  Model  group，  the
          aforementioned  quantitative  indicators （P＜0.05）  and  pathological  changes  in  all  dosage  groups  of  PACs  showed  significant
          improvements. Compared with the PACs-H group， the aforementioned quantitative indicators （P＜0.05） and pathological changes in
          the  PACs-H+rRIPK1  group  showed  significant  reversal.  CONCLUSIONS  PACs  can  ameliorate  SONFH  in  rabbits，  and  its
          mechanism of action may be related to the inhibition of the activation of the RIPK1/RIPK3/MLKL signaling pathway， suppression
          of apoptosis in femoral tissue cells， and promotion of angiogenesis.
          KEYWORDS     proanthocyanidins；  steroid-induced  osteonecrosis  of  the  femoral  head；  RIPK1/RIPK3/MLKL  signaling  pathway；
          angiogenesis



              股骨头坏死是一种难治性骨科疾病，其中由激素                           型荧光显微镜（日本 Olympus 公司）、AlphaImager HP 型
         （如类固醇）诱导的股骨头坏死[即激素性股骨头坏死                             凝胶成像系统（美国 ProteinSimple 公司）、QuantStudio 5
         （steroid-induced  osteonecrosis  of  the  femoral  head，  型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国ABI公
          SONFH）]是非创伤性股骨头坏死最常见的类型，以骨细                         司）等。
          胞缺血、坏死，骨小梁骨折，股骨头塌陷和关节功能障碍                           1.2 主要药品与试剂
          为主要特征     [1―2] 。目前，针对SONFH 的治疗药物存在一                    PACs 原料药（批号 P413229）购自上海阿拉丁生化
          定副作用，如双膦酸盐可能导致颌骨坏死、抗凝药物可                            科技股份有限公司；RIPK1 激活剂[RIPK1 重组蛋白（简
                      [2]
          增加出血风险 。因此，寻找新的SONFH治疗药物具有                          称“rRIPK1”）；批号 HY-I2479，纯度≥98%]购自美国
          重要意义。                                               MedChemExpress公司；大肠杆菌内毒素（批号8000P）购
              原花青素（proanthocyanidins，PACs）是一大类多酚              自 上 海 雅 吉 生 物 科 技 有 限 公 司 ；甲 泼 尼 龙（批 号
                                                  [3]
          类化合物的总称，具有抗炎、抗凋亡等药理活性 。相关                           A35511）购自上海维亦特生物科技有限公司；青霉素钠
                                                             （批号A2638）购自北京康瑞纳生物科技有限公司；反转
          体外研究显示，PACs 可抑制地塞米松诱导的成骨细胞
                                                              录试剂盒（批号AK3495）购自浙江麦飞生物科技有限公
          凋亡，具有改善股骨头坏死的潜力，但具体作用机制有
                                                              司；肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白
                      [4]
          待进一步完善 。坏死是一种细胞程序性死亡方式，由
                                                              细 胞 介 素 6（interleukin-6，IL-6）酶 联 免 疫 吸 附 测 定
          受体相互作用蛋白激酶 1（receptor-interacting protein ki‐
                                                             （ELISA）试剂盒（批号分别为10268、20187）均购自上海
          nase  1，RIPK1）/RIPK3/混 合 谱 系 激 酶 结 构 域 样 蛋 白
                                                              江莱生物科技有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒
         （mixed lineage kinase domain-like protein，MLKL）信号通
                                                             （批号 20087CR）购自上海碧云天生物技术有限公司；
          路介导 。研究表明，糖皮质激素可通过促进 RIPK1、
                [5]
                                                              TUNEL试剂盒（批号0003）购自武汉伊莱瑞特生物科技
          RIPK3表达而激活细胞程序性死亡途径，从而加剧大鼠
                                                              股 份 有 限 公 司 ；兔 抗 磷 酸 化 RIPK1（phosphorylated
          股骨头坏死 。然而，PACs 是否可通过调控 RIPK1/
                     [6]
                                                              RIPK1，p-RIPK1）、RIPK1、磷 酸 化 RIPK3（phosphory‐
          RIPK3/MLKL信号通路来改善SONFH尚不明确。基于
                                                              lated  RIPK3，p-RIPK3） 、RIPK3、磷 酸 化 MLKL
          此，本研究拟基于 RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路，通过
                                                             （phosphorylated-MLKL，p-MLKL）、MLKL、胱天蛋白酶
          构建SONFH模型兔来探究PACs对SONFH的改善作用
                                                              8（caspase-8）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体（批
          及机制，以期为临床治疗SONFH提供参考。                               号 分 别 为 ab316924、ab300617、ab284393、ab316957、
          1 材料                                                ab196436、ab184718、ab247233、ab181602）均购自英国
          1.1 主要仪器                                            Abcam公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免
              本研究所用主要仪器包括 Quantum GX 型小动物                     疫球蛋白G（IgG）二抗（货号FNSA-0004）购自武汉菲恩
          Micro-CT 影像系统（德国 PerkinElmer 公司）、800 TS 型           生物科技有限公司；血管内皮生长因子（vascular endo‐
          酶标仪（广州仪新生物科技有限公司）、Leica 型光学显                        thelial growth factor，VEGF）、骨形态发生蛋白 2（bone
          微镜[徕卡显微系统（上海）贸易有限公司]、CX41-32RFL                     morphogenetic protein 2，BMP2）、β-肌动蛋白（β-actin）的


          · 2520 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 20                            中国药房  2025年第36卷第20期
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