Page 33 - 《中国药房》2025年20期
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2.8 肠道菌群检测                                         组大鼠第 14、16 周的 24 h UTP 含量均显著降低（P＜
              取“2.3”项下各组6只大鼠的粪便样本，按照试剂盒                      0.05）。结果见表1。
          说明书，通过吸附柱法纯化提取 DNA，并扩增其 16S                        表1 补气通窍方对 IgAN 大鼠 24 h UTP 含量的影响
          rRNA V3+V4 可变区（341F、805R 的引物序列分别为                       （x±s，n＝6，mg）
          5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′、5′-GACTACHVGG-              组别      第8周     第10周     第12周    第14周    第16周
          GTATCTAATCC-3′）。取所得 PCR 产物，构建微生物多                   Normal组  101.59±9.69  116.76±26.50  115.44±25.60  112.77±20.84  109.57±18.33
                                                              Model组  357.65±78.35 a  456.73±125.02 a  472.42±149.30 a  500.64±59.77 a  533.73±49.19 a
          样性测序文库，采用Illumina平台进行高通量测序，读取                       BZP组  340.99±92.88  387.01±67.07  329.35±47.62 b  336.11±48.32 b  344.10±38.02 b
          测序结果，并进行 Alpha 多样性分析、Beta 多样性分析、                    BQTQ-L组  356.02±58.57  410.07±66.67  379.54±48.74  368.63±47.95 b  354.35±71.86 b
                                                              BQTQ-H组 346.55±77.57  390.95±97.21  311.78±54.80 b  326.37±70.74 b  313.54±36.17 b
          物种组成分析和差异微生物分析。上述测序分析由杭
                                                                a：与Normal组相比，P＜0.05；b：与Model组相比，P＜0.05。
          州联川生物医药科技有限公司完成。
                                                             3.2 补气通窍方对IgAN大鼠血清Scr、BUN含量的影响
              其中，Alpha 多样性包括 Chao1 指数、Observed spe‐
                                                                 与Normal组相比，Model组大鼠血清Scr、BUN含量
          cies指数、Shannon指数、Simpson指数，可反映样本肠道
                                                             均显著升高（P＜0.05）；与 Model 组相比，各药物组大鼠
          菌群的物种丰富度信息；Beta多样性分析包括主成分分
                                                             血 清 Scr、BUN 含 量 均 显 著 降 低（P＜0.05）。 结 果
          析（principal  component  analysis，PCA）、主 坐 标 分 析    见表2。
         （principal coordinate analysis，PCoA），可反映群落间物        表2 补气通窍方对IgAN大鼠血清Scr、BUN含量的影
          种组成的差异；物种组成以相对丰度为检测指标，以                                 响（x±s，n＝6）
          相对丰度排前 3 位的为优势菌群；通过组间群落差异                           组别               Scr/（μmol/L）        BUN/（mmol/L）
         （linear discriminant analysis effect size，LEfSe）分析，以  Normal组         62.50±13.14          8.15±1.88
                                                              Model组           89.83±10.91 a       12.70±2.15 a
          线性判别分析（linear discriminant analysis，LDA）效应值         BZP组             73.83±8.23 b         8.33±1.53 b
         （LDA 阈值为 3，P＜0.05）筛选各组大鼠的肠道差异微                       BQTQ-L组          72.33±9.65 b         9.65±1.49 b
              [11]
          生物 。                                                BQTQ-H组          76.67±10.60 b        9.41±1.68 b
                                                                a：与Normal组相比，P＜0.05；b：与Model组相比，P＜0.05。
          2.9 外周血免疫平衡指标检测
                                                             3.3 补气通窍方对IgAN大鼠肾组织病理损伤及IgA免
              取“2.3”项下各组 3 只大鼠的血样，进行抗凝处理。
                                                             疫复合物沉积的影响
          取抗凝全血样本 200 μL，裂解红细胞；收集细胞，于
                                                                 HE染色结果显示，Normal组大鼠肾小球结构正常，
          37 ℃、5%CO2下培养刺激 4 h；收集细胞，加入含 CD4、
                                                             细胞及基质均匀分布，未见明显异常；肾小管上皮细胞
          CD25抗体的混合液（三者体积分别为2.5、0.5、2.0 μL），
                                                             圆润、饱满，结构完整，未见萎缩或扩张；肾间质未见明
          于 4 ℃下避光孵育 20 min，进行细胞表面标记；待破膜                     显增生或炎症细胞浸润。与Normal组相比，Model组大
          后，加入含 FOXP3、IL-17A 抗体的混合液（体积均为 2.5                 鼠的肾小球系膜区出现明显的系膜细胞增生和基质增
          μL）进行胞内染色；采用流式细胞仪检测，FlowJo V10软                    多；肾间质中可见大量炎症细胞浸润，伴肾小管萎缩、管
          件分析各组大鼠全血 Th17、Treg 比例（Th17 以 CD4、IL-              腔狭窄闭缩。与Model组相比，各药物组大鼠肾小球系
          17A 标记，Treg 以 CD4、CD25、FOXP3 标记），并计算               膜细胞增生和基质增生均有所减轻，肾小球形态基本正
          Th17/Treg。                                         常；肾小管扩张程度减轻，炎症细胞浸润有不同程度减
          2.10 统计学方法                                         少，未见明显肾小管萎缩或坏死。免疫荧光染色结果显
              采用 SPSS 26.0 和 GraphPad Prism 9.5 软件对数据        示，与 Normal 组（13.84±2.34）组相比，Model 组大鼠肾
          进行统计分析。符合正态分布的计量资料以x±s表示，                          小球系膜区、毛细血管壁 IgA 阳性区域的荧光强度
                                                            （55.31±6.68）显著升高（P＜0.05）。与 Model 组相比，
          多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用
                                                             BZP组、BQTQ-L组、BQTQ-H组大鼠肾小球内IgA阳性
          LSD-t检验；不符合正态分布的计量资料以M（P25，P75 ）表
                                                             区域有所缩小，其荧光强度（30.73±3.70、44.30±3.55、
          示，多组间比较采用 Kruskal-Wallis 检验，进一步两两比
                                                             36.94±4.83）均显著降低（P＜0.05）。结果见图1。
          较采用Dunn检验。检验水准α＝0.05。
                                                             3.4 补气通窍方对IgAN大鼠肠道菌群的影响
          3 结果
                                                             3.4.1 补气通窍方对肠道菌群Alpha多样性的影响
          3.1 补气通窍方对IgAN大鼠24 h UTP含量的影响                          与 Normal 组相比，Model 组大鼠的 Chao1 指数显著
              与 Normal 组相比，Model 组大鼠第 8、10、12、14、16          降低（P＜0.05）。与 Model 组相比，各药物组大鼠的
          周的 24 h UTP 含量均显著升高（P＜0.05）。与 Model 组              Chao1 指数、Observed species 指数、Shannon 指数（BZP
          相比，各药物组大鼠 24 h UTP 含量均有所降低，其中                      组除外）、Simpson 指数（BZP 组、BQTQ-H 组除外）均显
          BZP 组和 BQTQ-H 组大鼠第 12、14、16 周以及 BQTQ-L             著升高（P＜0.05）。结果见表3。


          中国药房  2025年第36卷第20期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 20    · 2515 ·
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