Page 49 - 《中国药房》2025年16期
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标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗、兔抗 β-肌动蛋白                        min，取上清液，备测。
         （β-actin）多克隆抗体（批号分别为 GB23303、GB11001）               2.1.4 方法学考察
          均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；qRT-PCR所用引                           （1）专属性：取空白血浆样品、1 000 ng/mL的模拟血
          物由上海伟寰生物科技有限公司设计、合成。                               浆样品、未造模大鼠给予TP化疗+NEPA后1 h的血浆样
          1.3 实验动物                                           品各适量，按“2.1.3”项下方法处理（空白血浆样品不加
              SPF 级雄性 SD 大鼠，体重（200±20）g，购自北京华                内标），再按“2.1.1”项下条件进样，记录色谱图。结果
          阜康生物科技股份有限公司，动物生产许可证号为                            （图略）显示，紫杉醇和内标的保留时间分别为 2.7、1.3
          SCXK（京）2019-0008。所有动物均饲养于无特定病原                     min，色谱峰峰形良好，血浆中的内源性物质及联用药物
          体、温度（22±2）℃、相对湿度（55±10）%、昼夜光照周                     不干扰紫杉醇的定量分析。
          期变化（12 h光照、12 h黑暗）的环境中，自由摄食、饮水。                       （2）标准曲线绘制与定量下限考察：取“2.1.2”项下
          本实验方案经河北医科大学第二医院科研伦理委员会                            系列模拟血浆样品，按“2.1.3”项下方法处理，再按
          批准（审查决议编号2024-AE385）。                             “2.1.1”项下条件进样分析，记录峰面积。以紫杉醇与内
          2 方法与结果                                            标的峰面积比值为纵坐标（Y）、紫杉醇质量浓度为横坐
                                                                                                      2
          2.1 血浆中紫杉醇浓度的检测                                    标（X），使用加权最小二乘法（加权系数为 1/X ）进行线
                                                                                                           2
              以阿奇霉素为内标，采用液相色谱-串联质谱（LC-                       性 回 归 ，得 回 归 方 程 为 Y＝0.001  01X+0.003  02（R ＝
          MS/MS）法检测血浆中紫杉醇的质量浓度。                              0.999 2），紫杉醇检测质量浓度的线性范围为20～5 000
          2.1.1 色谱与质谱条件                                      ng/mL，定量下限为20 ng/mL。
              色 谱 柱 为 Symmetry  C18（4.6  mm×150  mm，3.5         （3）精密度、准确度与提取回收率试验：取“2.1.2”项
          μm）；流动相为 0.2% 甲酸溶液-甲醇（15∶85，V/V）；流速                下定量下限及低、中、高质量浓度质控模拟血浆样品，按
          为0.7 mL/min；柱温为40 ℃；进样量为10 μL。                    “2.1.3”项下方法处理，再按“2.1.1”项下条件进样分析，
              采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子                         记录峰面积 A 并代入随行标准曲线计算血浆中紫杉醇
          扫描；离子源温度为550 ℃；喷射电压为5 500 V；用于紫                    的质量浓度，每样品平行测定5次，考察日内精密度（以
          杉醇及内标定量分析的离子对分别为m/z 876.2→308.1、                   RSD 表示）和准确度（以实测质量浓度与理论质量浓度
          m/z 591.8→158.1，去簇电压分别为 100、91 V，碰撞电压              的相对误差，即 RE 表示）；连续测定 3 d，考察日间精密
          分别为45、44 V。                                        度和准确度。取空白血浆，加入含 0.1% 甲酸的乙腈沉
          2.1.2 溶液的配制                                        淀蛋白，取上清液90 μL，分别加入“2.1.2”项下低、中、高
              精密称取紫杉醇对照品适量，加甲醇溶解并稀释，                         质量浓度质控样品溶液 10 μL 和内标工作液 10 μL，混
          制成质量浓度分别为 0.2、0.5、1、2、5、10、20、50 μg/mL             匀，按“2.1.1”项下条件进样分析，记录峰面积 B，每样品
          的系列工作液以及 0.2、0.5、5、40 μg/mL 的定量下限、                 平行测定 5 次，以“A/B×100%”计算提取回收率。结果
          低、中、高质量浓度质控样品溶液。精密称取内标对照                           见表1。
          品适量，加甲醇溶解并稀释，制成质量浓度为 25 μg/mL                         （4）基质效应试验：取空白血浆，加入含 0.1% 甲酸
          的内标工作液。                                            的乙腈沉淀，取上清液 90 μL，分别加入“2.1.2”项下低、
              取空白血浆（来源于未经任何处理的健康SD大鼠，                        中、高质量浓度质控样品溶液 10 μL 和内标工作液 10
          下同）90 μL，加入上述紫杉醇系列工作液10 μL，制成质                     μL，混匀，按“2.1.1”项下条件进样分析，记录峰面积 B；
          量浓度为20、50、100、200、500、1 000、2 000、5 000 ng/mL      将空白血浆替换为等体积的甲醇，重复上述操作，按
          的系列模拟血浆样品以及20、50、500、4 000 ng/mL的定                “2.1.1”项下条件进样分析，记录峰面积 C。每质量浓度
          量下限、低、中、高质量浓度的质控模拟血浆样品。                            平行 5 份，以“B/C×100%”计算紫杉醇和内标的基质因
          2.1.3 血浆样品处理                                       子（matrix factor，MF），再以“紫杉醇的MF值/内标的MF
              取血浆样品 100 μL，置于 1.5 mL 离心管中，加入内                值×100%”计算内标归一化 MF 值。结果显示，低、中、
          标工作液10 μL，涡旋混匀1 min；再加入含0.1%甲酸的                    高质量浓度样品中紫杉醇的内标归一化 MF 值分别为
                                             4
          乙腈 400 μL，涡旋混匀 2 min，以 1.09×10  r/min 离心 10       （160.65±14.81）%、（166.02±7.52）%、（165.52±7.30）%，
                                表1 紫杉醇定量分析的精密度、准确度与提取回收率试验结果
                                  日内精密度（n＝5）                       日间精密度（n＝3）                 提取回收率（n＝5）
          理论质量浓度/（ng/mL）
                       实测质量浓度（x±s）/（ng/mL）  RSD/%  RE/%  实测质量浓度（x±s）/（ng/mL）  RSD/%  RE/%  实测质量浓度（x±s）/（ng/mL）  RSD/%
           20              19.67±1.05     5.34    －1.65      19.56±1.20   6.13    －2.20
           50              52.40±2.41     4.60     4.80      50.07±3.86   7.71     0.14    97.80±5.19   5.31
           500             487.00±22.45   4.61    －2.60     493.13±29.46  5.97    －1.37    103.32±2.83  2.74
          4 000           3 808.60±103.20  2.71   －4.78    3 865.07±214.21  5.54  －3.37    108.22±1.82  1.68


          中国药房  2025年第36卷第16期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 16    · 1995 ·
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