Page 54 - 《中国药房》2025年15期
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膀胱癌是全球常见的泌尿系统恶性肿瘤，尽管手术                          纯度≥98%）购自上海源叶生物科技有限公司；1640 完
          联合放化疗可改善早期患者预后，但晚期膀胱癌易发生                            全培养基（货号 6124164）、胰蛋白酶-乙二胺四乙酸
          转移与耐药，导致治疗失败 。肿瘤转移是一个多步骤                           （0.25%，货号 25200072）均购自美国 Thermo Fisher Sci‐
                                  [1]
          的复杂过程，涉及细胞迁移、侵袭、血管生成及微环境重                           entific公司；胎牛血清（货号2346447）购自上海逍鹏生物
                                                    [2]
          塑，而这一过程高度依赖肿瘤细胞的代谢重编程 。其                            科技有限公司；100×青链霉素混合液（货号 G4003）购
          中，Warburg 效应（即“有氧糖酵解”）是肿瘤代谢最显著                      自武汉赛维尔生物科技有限公司；CCK-8 试剂盒（货号
          的特征之一，通过有氧糖酵解可增强葡萄糖摄取和乳酸                            CK001）购自北京兰博利德生物科技有限公司；无血清
          生成，不仅为肿瘤细胞提供了快速的能量供应，还可酸                            培养液（货号 C40100）购自苏州新赛美生物科技有限公
                                     [3]
          化微环境以促进细胞侵袭、迁移 。                                    司；乳酸比色法试剂盒（货号E-BC-K044-M）购自武汉伊
              Warburg 效应的调控与缺氧诱导因子 1α（hypoxia-                莱瑞特生物科技股份有限公司；增强型腺苷三磷酸（ad‐
          inducible factor-1α，HIF-1α）激活密切相关 。HIF-1α 通         enosine  triphosphate，ATP） 分 析 试 剂 盒 （ 批 号
                                              [4]
          过上调葡萄糖转运蛋白1（glucose transporter 1，GLUT1）            A192250418）、增强型线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检
          及 有 氧 糖 酵 解 关 键 酶 [ 如 己 糖 激 酶 2（hexokinase  2，      测试剂盒（货号C2003S）购自上海碧云天生物技术有限
          HK2）、丙 酮 酸 激 酶 M2（pyruvate  kinase  isozyme  type   公司；鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、兔源血管内
                                             [5]
          M2，PKM2）]，驱动代谢并加速肿瘤进展 。因此，靶向                        皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、
          代谢重编程的关键节点来调控 Warburg 效应，可能成为
                                                              兔 源 基 质 金 属 蛋 白 酶 2（matrix  metalloproteinase  2，
          抑制膀胱癌转移的新策略。核因子 κB（nuclear factor
                                                              MMP2）、兔 源 MMP9、兔 源 GLUT1、兔 源 HK2、兔 源
          κB，NF-κB）是调控肿瘤微环境的关键转录因子，其可通                        PKM2、兔源 NF-κB 抗体，辣根过氧化物酶（horseradish
          过调控促炎因子分泌维持肿瘤微环境稳态 。最新研究                            peroxidase，HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白G，HRP标
                                              [6]
          表明，NF-κB/HIF-1α 的异常激活与肿瘤的转移密切相                      记的山羊抗小鼠免疫球蛋白 G（批号分别为10029187、
          关 。在膀胱癌中，NF-κB/HIF-1α 信号通路异常激活，                     00113773、00121180、00140728、21829-1-AP、00126838、
            [6]
          并通过调控缺氧应答和下游靶标共同加剧膀胱癌的化                             00132394、00024810、0100021451、0101102031）均购自武
                            [7]
          疗耐药性与肿瘤进展 。
                                                              汉三鹰生物技术有限公司；兔源 HIF-1α 抗体（批号
              丹皮酚是从中药牡丹皮中提取的天然酚类化合物，                          14179S）购自美国CST公司。
                                                [8]
          具有抗炎、抗氧化及抗肿瘤等多种药理活性 。有研究
                                                              2 方法
          表明，丹皮酚可抑制 NF-κB p65 核转位及 DNA 结合活
            [9]
          性 ，并通过抑制HIF-1α及其下游信号进而抑制细胞的                         2.1 丹皮酚及顺铂药液的制备
          迁移和侵袭 。然而，丹皮酚对肿瘤细胞中NF-κB/HIF-                           精密称取丹皮酚标准品20 mg，加入208 μL二甲基
                    [10]
          1α信号通路的作用机制尚不明确，尤其是在膀胱癌T24                          亚砜，充分混匀，配制成质量浓度为 96.154 mg/mL 的丹
          细胞中，丹皮酚是否可以通过调控 NF-κB/HIF-1α 信号                     皮酚母液；将母液分装并于－20 ℃保存，使用时用不含
                                                              血清的培养基将其稀释至400 μg/mL。
          通路介导有氧糖酵解，进而抑制细胞迁移和侵袭，有待
          深入探索。本研究以膀胱癌 T24 细胞为模型，基于 NF-                           精密称取 3 mg 顺铂标准品粉末于 1.5 mL 离心管
          κB/HIF-1α 信号通路，探究丹皮酚对有氧糖酵解及细胞                       中，加入磷酸盐缓冲液使其终质量浓度为 1 800.600
          迁移的调控机制，以期为克服膀胱癌转移及耐药提供                             μg/mL，超声溶解，即得；分装后于－20 ℃保存，使用时
         “多通路协同干预”的新治疗策略。                                     用不含血清的培养基将其稀释至3.001 μg/mL。
          1 材料                                                2.2 细胞培养
          1.1 细胞株                                                 人膀胱癌T24细胞用1640完全培养基（含有10%胎
              人膀胱癌T24细胞（货号CL-0227）购自武汉普诺赛                     牛血清）常规培养于 37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中，细
          生物科技有限公司。                                           胞贴壁生长至 80% 后，弃上清液，磷酸盐缓冲液洗 2 遍
          1.2 主要仪器                                            后加入胰酶消化 2 min，加入培养基终止消化并重悬细
                    ®
              Infinite  200 Pro 型酶标仪购自瑞士 Tecan 公司；            胞，收集细胞至离心管，以 1 200 r/min 离心 3 min，进行
          DM4000B 型光学显微镜购自德国 Leica 公司；Heracell                传代培养。取对数生长期细胞进行后续实验。
          VIOS 160i 型 CO2培养箱购自美国 Thermo Fisher Scien‐         2.3 细胞分组与给药
          tific 公司；Mini-PROTEAN Tetra Cell 小型垂直电泳槽、               取“2.2”项下对数生长期的 T24 细胞，按照 5×10              3
          PowerPac  HC 型电泳仪、ChemiDoc XRS+型化学发光                个/孔的密度接种于96孔板中，待细胞贴壁后，将细胞分
                  TM
          系统均购自美国Bio-Rad公司。                                   为对照组（不含药物，只含细胞）、顺铂组（阳性对照，
          1.3 主要药品与试剂                                         3.001 μg/mL，剂量参考文献[11]设置）和丹皮酚低、中、
              丹 皮 酚 标 准 品（纯 度 ≥98%，规 格 20  mg，批 号             高剂量组（100、200、400 μg/mL，给药浓度根据预实验结
          24230817001）、细胞培养级二甲基亚砜（货号 D8371）均                  果设置），各给药组加入含相应药物的基础培养基，培养
          购自北京索莱宝科技有限公司；顺铂（货号 15663-27-1，                     24 h后，进行后续实验。上述实验重复3次。


          · 1872 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 15                            中国药房  2025年第36卷第15期
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