Page 56 - 《中国药房》2025年14期

cells increased significantly， and the typical paving stone-like characteristics were restored. The levels of ET-1， mitochondrial
reactive oxygen species， and the relative expression levels of Parkin and LC3 proteins in the autophagy agonist group were
increased or up-regulated significantly （P＜0.05 or P＜0.01）， while cell viability rate was decreased significantly （P＜0.05）， the
damage of RAECs was aggravated. Compared with the autophagy agonist group， the cell viability rate and the relative expression
level of p62 protein in TCM combined autophagy agonist group were increased or up-regulated significantly （P＜0.05 or P＜0.01），
while the levels of ET-1， the relative expression levels of PINK1， Parkin， and LC3 proteins were down-regulated significantly （P＜
0.01）， the damage of RAECs was reversed to a certain extent. CONCLUSIONS Tianma xiongling zhixuan tablet protects vascular
endothelial function by regulating mitochondrial autophagy， the mechanism of which may be associated with the regulation of
PINK1/Parkin signaling pathway and the inhibition of mitochondrial autophagy.
KEYWORDS Tianma xiongling zhixuan tablet； vascular endothelial cell injury； mitochondrial autophagy； PINK1/Parkin
signaling pathway

高血压是临床常见的心血管疾病，全世界范围内有 1.2 主要药品与试剂
13 亿高血压患者，每年有 1 000 万人因收缩压过高导致 天 麻 芎 苓 止 眩 片（湘 药 制 字 Z20150970，批 号
死亡；我国30～79岁成年人高血压患病人数约2.567亿， 20220312，规格0.5 g/片）由我院制剂中心提供。RAECs
[1]
患病率达27% 。血管内皮功能障碍是高血压患者血管 专用培养基、磷酸盐缓冲液（PBS）（批号分别为CMR075、
表型的标志，常表现为血管舒缩因子分泌失衡，加速血 WH0022K510）均购自武汉普诺赛生命科技有限公司；
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压升高进程，并加重靶器官的损害 。自噬是维持血管 胰蛋白酶消化液（批号J202303）购自美国Hyclone公司；
内皮细胞内环境稳定和存活的重要机制，自噬失衡被认 LPS（批号L4391-1）购自美国Sigma公司；CCK-8检测试
[3]
为是血管内皮功能改变的主要表现之一 。 剂盒（批号BA08918147）购自北京博奥森生物技术有限
天麻芎苓止眩片主要由天麻、钩藤、川芎、茯苓、陈 公司；一氧化氮（NO）、内皮素1（endothelin-1，ET-1）酶联
皮等中药组成，为湖南中医药大学第一附属医院（以下 免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（批号分别为 FY9044-B-
简称“我院”）的院内制剂，具有平肝熄风、化痰逐瘀的功 2308R02、FY3435-B-2308R03）均购自江苏菲亚生物科
[4]
效，临床主要用于治疗高血压，降压效果明显、安全 。 技 有 限 公 司 ；线 粒 体 超 氧 化 物 检 测 试 剂 盒（批 号
本研究前期动物实验证实，天麻芎苓止眩片能减轻血管 M36008）购自美国Invitrogen公司；线粒体膜电位检测试
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内皮自噬，逆转血管内皮损伤 ，但其分子机制尚未完全 剂盒、自噬阻断剂 PD98059、自噬激活剂 Honokiol（批号
阐 明 。 PTEN 诱 导 激 酶 1（PTEN-induced kinase 1， 分 别 为 HY-15534、HY-12028-41867、HY-N0003-25245）
PINK1）/Parkin（一种E3泛素连接酶）通路是研究线粒体 均购自美国MCE公司；兔抗大鼠微管相关蛋白1轻链3
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自噬相关疾病的经典通路 。有研究显示，调控 PINK1/ （microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）、Par‐
Parkin 介导的线粒体自噬，可有效减轻血管内皮细胞损 kin、PINK1、选择性自噬接头蛋白 62（ubiquitin-binding
[7]
伤 。本研究利用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导 protein 62，p62）抗体（货号分别为 27H8816、T127090、
构建高血压状态下大鼠主动脉内皮细胞（rat aortic endo‐ 85H3726、43Z8688）均购自江苏亲科生物研究中心；辣
thelial cells，RAECs）炎症损伤模型，观察 PINK1/Parkin 根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的山羊
信号通路在线粒体自噬中的变化，探讨天麻芎苓止眩片对 抗兔二抗（货号 T127090）购自武汉三鹰生物技术有限
该通路表达的影响，以期揭示天麻芎苓止眩片对血管内皮 公司。
细胞损伤的作用机制。 1.3 实验大鼠与细胞
1 材料 SPF 级雄性 SD 大鼠 12 只，6～8 周龄，体重 220～
1.1 主要仪器 250 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物
本研究所用主要仪器包括 SW-CJ-2FD 型洁净工作 生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004。大鼠饲养于我院
台（苏州苏净仪器自控设备有限公司），L530R型台式低 实验动物中心SPF级动物房，饲养温度20～26 ℃，相对
速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）， 湿度 40%～70%，所有大鼠自由进食、饮用蒸馏水，隔日
Galaxy 170 R 型 CO2 培 养 箱（德 国 Eppendorf 公 司）， 更换一次垫料。本研究经我院实验动物伦理委员会批
MSX-2型细胞成像分析系统（广州市明美光电技术有限 准 ，批 件 号 ：ZYFY20200518-02。 RAECs（批 号 CP-
公司），AX223ZH型电子分析天平（美国OHAUS公司）， R075）购自武汉普诺赛生命科技有限公司。
PURELOAB Classic UVF 型超纯水仪（英国 ELGA 公 2 方法
司），Z32HK 型高速冷冻离心机（德国 HAIMER 公司）， 2.1 药液和含药血清的制备
Enspire 型 多 功 能 酶 标 仪（美 国 PerkinElmer 公 司）， 取天麻芎苓止眩片，粉碎，精密称取粉末 9 g，置于
LSM880 型 激 光 共 聚 焦 显 微 镜（德 国 Carl Zeiss AG 50 mL具塞锥形瓶中，加入30 mL甲醇，称量后超声提取
公司）。 30 min，放置室温，补足失重；取上清液，以8 000 r/min离

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