Page 36 - 《中国药房》2025年13期
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          用机制的重要部分 ，但目前关于虎杖入血成分和体内                            固定于4%多聚甲醛溶液中，经脱水、石蜡包埋、切片后，
          代谢过程的研究较少，且对其在 AGA 模型动物体内的                          进行苏木素-伊红染色，采用光学显微镜观察膝关节组
          研究鲜有报道 。基于此，本研究通过超高效液相色谱                            织病理学变化，若造模大鼠膝关节滑膜处理层的边界模
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          串 联 四 极 杆 静 电 场 轨 道 阱 质 谱（UPLC-Q-Exactive-          糊、蜂窝状结构消失，并出现大量炎症细胞浸润和异常
          Orbitrap-MS）法，鉴定虎杖在 AGA 大鼠中的入血成分，                   增生，则表明造模成功。各组大鼠造模与给药同时进
          并研究虎杖在AGA大鼠体内的吸收、代谢过程，以期阐                           行，虎杖给药组大鼠灌胃虎杖提取液 10 g/kg（剂量根据
          明虎杖治疗 AGA 的药效物质基础，为虎杖的临床应用                          预实验结果设置，以生药量计），空白组和模型组大鼠灌
          和进一步开发提供科学依据。                                       胃等体积水，每天1次。造模结束后，各组大鼠又继续灌
          1 材料                                                胃相应药物/水2 d。
          1.1 主要仪器                                            2.3 血清样本的采集
              Ultimate 3000 型超高效液相色谱仪和 Q-Exactive-                末次给药1 h后，各组大鼠腹腔注射乌来糖麻醉，腹
          Orbitrap-MS 仪购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；      主动脉取血。血样于37 ℃促凝1 h、4 ℃收缩30 min；在
          BS 124S型万分之一电子天平购自北京赛多利斯仪器系                         4 ℃条件下以 3 500 r/min 离心 15 min，吸取上清液，置
          统有限公司；ZDHW型调温型电热套购自北京中兴伟业                           于－80 ℃冷冻保存，备测。
          仪器有限公司；WS-10型光学显微镜购自江苏智跃医疗                          2.4 膝关节组织病理学形态观察
          科技有限公司。
                                                                  取血完成后，处死各组大鼠，取其右膝关节组织置
          1.2 主要药品与试剂
                                                              于4%多聚甲醛溶液中固定，按“2.2”项下相应方法处理
              尿酸钠（批号 BCCF5862）购自美国 Sigma 公司；氧
                                                              后，采用光学显微镜观察膝关节组织病理学变化。
          嗪酸钾、乌来糖（批号分别为C14819668、C15887472）均
                                                              2.5 虎杖入血成分及代谢产物分析
          购 自 上 海 麦 克 林 生 化 科 技 有 限 公 司 。 虎 杖（批 号
                                                              2.5.1 色谱条件
          10510201）购自北京三和药业有限公司，经北京中医药                            以 ACQUITY  UPLC  BEH  C18 （2.1  mm×100  mm，
          大学杨瑶珺教授鉴定为蓼科植物虎杖 P. cuspidatum
                                                              1.7 μm）为色谱柱，以 0.1% 甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流
          Sieb. et Zucc.的干燥根茎和根。
                                                              动相进行梯度洗脱（0～5 min，2%B→10%B；5～25 min，
          1.3 实验动物
                                                              10%B→40%B；25～32 min，40%B→60%B；32～37 min，
              本研究所用 SPF 级健康雄性 SD 大鼠共 18 只，体重
                                                              60%B→98%B；37～39 min，98%B；39～40 min，98%B→
         （200±20）g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，
                                                              2%B；40～42 min，2%B）；流速为 0.20 mL/min；柱温为
          动物生产许可证号为SCXK（京）20190008。所有大鼠均
                                                              30 °C；进样体积为2 μL。
          置于北京中医药大学动物房饲养，使其自由饮食饮水，
          环境温度为（23±2）℃，相对湿度为（60±5）%，每日12 h                    2.5.2 质谱条件
                                                                  采用电喷雾离子源（ESI），在正、负离子模式下扫
          光照与 12 h 黑暗模拟昼夜循环。本实验方案经北京
                                                              描，扫描范围为100～1 500 Da；毛细管温度为350 °C；正
          中 医药大学医学与实验动物伦理委员会批准（编号
                                                              离子模式喷雾电压为 3.5 kV，负离子模式喷雾电压为
          BUCM-4-2022040602-2003）。
          2 方法                                                2.5 kV；鞘气流速为35 arb，辅助气流速为15 arb；碰撞能
                                                              量为 30、50、70 V；一级分辨率为 70 000，二级分辨率为
          2.1 虎杖提取液的制备
                                                              17 500；扫描方式为Full MS/dd-MS2模式。
              称取虎杖药材 200 g，加 3 倍量 75% 乙醇浸泡 12 h，
                                                              2.5.3 血清样本的前处理
          加热回流 1 h，提取 3 次，合并滤液，于水浴锅 80 ℃条件
          下浓缩成质量浓度为 2 g/mL 的虎杖提取液（以生药                             将模型组和虎杖给药组大鼠血清分别混合，各取
               [9]
          量计） 。                                               300 μL，加入 3 倍量乙腈，涡旋混匀 2 min，冰水浴超声
          2.2 动物分组、造模与给药                                      10 min，于 4 ℃条件下以 12 000 r/min 离心 15 min；取上
              18只大鼠适应性喂养3 d后，随机分为空白组、模型                       清液，以氮气吹干，残渣加入 200 μL 50% 乙腈，涡旋 2
          组和虎杖给药组，每组 6 只。参考文献[10―11]方法建                       min，再次离心 15 min，取上清液，按“2.5.1”“2.5.2”项下
          立AGA大鼠模型，具体方法如下：模型组和虎杖给药组                           条件进样分析。
          大鼠腹腔注射3%氧嗪酸钾（0.01 mL/g），每天2次，连续                     2.5.4 数据分析
          7 d；第 8 天，两组大鼠腹腔注射乌来糖（0.001 mL/g，下                      将模型组和虎杖给药组大鼠的血清质谱数据以及
          同）麻醉，将右膝关节向后屈曲 95°～100°，充分打开关                       虎杖提取液的质谱数据导入 Xcalibur 3.0 软件进行峰提
          节腔间隙并注入 0.2 mL 尿酸钠混悬液（25 mg/mL）以造                   取和峰匹配，设置质量精度误差小于 10 ppm，原型成分
                                                                                                  [12]
          模；空白组大鼠腹腔及右膝关节腔注入等体积生理盐                             及代谢产物参考前期研究结果及相关文献 ，根据化合
          水。造模后，各组取1只大鼠处死，剖取右膝关节组织，                           物的保留时间、精确分子量、碎片离子信息进行鉴定。


          · 1582 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 13                            中国药房  2025年第36卷第13期
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