Page 75 - 《中国药房》2025年12期

表4 各组大鼠海马组织中尼氏染色阳性细胞数量比较 表5 各组大鼠海马组织中NF-κB信号通路及其上下游
（x±s，n＝3，个） 蛋白表达水平比较（x±s，n＝5）
组别 CA1区 CA3区 DG区 组别 TLR4 NF-κB p65 p-NF-κB p65 NLRP3 CASP1 IL-1β
CON组 66.67±5.31 49.17±5.97 328.75±24.50 CON组 1.00±0.47 1.00±0.21 1.00±0.33 1.00±0.23 1.00±0.22 1.00±0.23
MOD组 35.67±11.32 a 26.33±9.29 a 122.42±44.08 a MOD组 2.21±0.78 a 2.32±0.37 a 1.50±0.47 b 1.42±0.36 b 1.78±0.35 a 4.71±1.29 b
KXS组 59.42±5.28 b 44.00±8.53 b 286.17±17.27 b KXS组 1.18±0.41 c 0.87±0.22 c 0.89±0.25 d 0.76±0.21 c 0.98±0.08 c 1.92±0.29 d
DON组 62.25±6.77 b 37.58±9.59 b 300.83±43.76 b DON组 1.52±0.37 1.82±0.28 0.89±0.28 d 0.93±0.25 d 0.71±0.18 c 2.94±0.92
a：与CON组比较，P＜0.01；b：与MOD组比较，P＜0.01。 a：与CON组比较，P＜0.01；b：与CON组比较，P＜0.05；c：与MOD
剂），经匀浆、超声、离心后分离上清液，用 BCA 法测定 组比较，P＜0.01；d：与MOD组比较，P＜0.05。
蛋白浓度，加入loading buffer，于100 ℃下加热变性。取 含 NF-κB 这一重要炎症通路；最后，通过分子对接进一
变性蛋白适量，进行10%～15%的十二烷基硫酸钠-聚丙 步证实了 KXS 潜在核心抗炎成分与核心炎症靶点之间
烯酰胺凝胶电泳，并转移至聚偏二氟乙烯膜上，用5%脱 具有较高的亲和力。由此本课题组推测，KXS可能主要
脂奶粉室温封闭 2 h；洗膜后，加入 TLR4、NF-κB p65、p- 作用于NF-κB信号通路，并通过影响其上下游相关蛋白
NF-κB p65、NLRP3、CASP1、IL-1β、β-actin 一抗（稀释比 的表达来缓解神经炎症，从而发挥改善AD的作用。
例分别为1∶6 000、1∶6 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶6 000、1∶ 为验证这一推测，本研究进行了相关动物实验。首
2 000、1∶6 000），4 ℃下孵育过夜；洗膜后，加入相应的二 先，本研究使用D-gal诱导建立AD大鼠模型，结果显示，
抗（稀释比例均为1∶6 000），室温下孵育1 h；洗膜后，用 与CON组比较，MOD组大鼠实验第8、12周时的体征量
ECL超敏发光液显色，并置于全自动化学发光图像分析 化评分均显著升高，提示其具有明显的衰老症状（如毛
系统下成像。以 β-actin 为内参，使用 Image J 软件计算 发干枯发黄、活动减少、神情呆滞等）；心脏、肝脏、脾脏、
目的蛋白与内参蛋白的灰度值比值，以表征目的蛋白的 胸腺指数均显著降低，逃避潜伏期、穿越平台次数、平台
表达水平。结果以 CON 组为标准进行归一化处理 象限路程及时间等学习记忆能力评估指标均显著恶化，
（NFKB1与NF-κB p65同为NF-κB蛋白家族的成员，IL- 海马组织出现神经元皱缩、细胞核与细胞质分界不清
6、TNF与IL-1β同为炎症因子，故未作重复验证）。 晰、尼氏体减少等病理改变，表明大鼠上述脏器明显萎
结果（图6、表5）显示，与CON组比较，MOD组大鼠 缩、学习记忆能力明显减退、海马组织受损严重，AD 大
海马组织中 TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NLRP3、 鼠模型复制成功。经KXS干预后，AD大鼠的体征量化
CASP1、IL-1β 蛋白的表达均显著上调（P＜0.05 或 P＜ 评分显著降低，上述脏器指数（肝脏指数除外）均显著升
0.01）。与 MOD 组比较，KXS 组、DON 组大鼠海马组织 高，各学习记忆能力评估指标和海马组织病理改变均有
中上述蛋白（DON 组的 TLR4、NF-κB p65、IL-1β 蛋白除 所改善，提示 KXS 可明显改善 AD 大鼠的相关症状，与
外）的表达均显著下调（P＜0.05或P＜0.01）。 既往研究基本一致 。
[22]
NF-κB信号通路是重要的炎症通路，可介导大脑中
NLRP3 100 kDa
的神经病变。转录因子NF-κB是炎症的中心介质，可直
TLR4 96 kDa 接参与调控多种炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）的表
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达 。在静息状态下，NF-κB 二聚体（如 p65）与 NF-κB
NF-κB p65 65 kDa
抑制蛋白（inhibitor of NF-κB，IκB；如 IκBα）结合，形成
p-NF-κB p65 61 kDa NF-κB/IκB复合物，并停留在细胞质中；当细胞受到胞内
外细胞因子、应激信号、病原体等刺激时，IκB 会被磷酸
CASP1 35 kDa
化，使得 NF-κB 二聚体被释放，并引发进一步的磷酸化
IL-1β 31 kDa （如 NF-κB p65 转化成 p-NF-κB p65），进而启动下游炎
[24]
症因子的释放，加剧 AD 的神经炎症 。本研究结果显
β-actin 42 kDa
示，MOD组大鼠海马中NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白
CON组 MOD组 DON组 KXS组 的表达均较 CON 组显著上调，提示 NF-κB 信号通路被
图6 各组大鼠海马组织中NF-κB信号通路及其上下游
异常激活；经KXS干预后，上述蛋白的表达被显著逆转，
蛋白表达的电泳图
提示KXS可有效抑制NF-κB信号通路所诱导的炎症过
3 讨论 表达。
本研究首先通过网络药理学分析获得了AD相关核 本研究进一步对 NF-κB 信号通路上下游相关蛋白
心炎症靶点（NFKB1、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、TLR4、 的表达情况进行了分析。其中，TLR4 是该通路常见的
TNF、NLRP3、CASP1）和 KXS 用于 AD 的潜在核心抗炎 上游因子，可激活细胞内髓样分化因子 88，进而磷酸化
成分（五味子酯乙、人参炔三醇、五味子酯甲、enhydrin、 IκB；磷酸化的NF-κB二聚体（如p-NF-κB p65）会进入细
vulgarin、人参环氧炔醇）；随后，通过富集分析获知，GO 胞核，从而启动促炎因子（如NLRP3炎症小体）的转录，
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功能富集涉及磷酸化、炎症反应等，KEGG 富集通路包 最终形成经典的 TLR4/NF-κB/NLRP3 炎症通路 。此

中国药房 2025年第36卷第12期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 12 · 1481 ·