Page 73 - 《中国药房》2025年12期
P. 73

NFKB1  -4.4  -6.5  -6.5  -5.0  -7.0  -6.4      表1 各组大鼠体征量化评分比较(x±s,n=8,分)
                                                  -5
               NF-κB p65  -4.8  -6.8  -6.6  -5.2  -6.7  -7.8  组别       第0周       第4周        第8周       第12周
                 IL-1β  -5.2  -5.9  -4.9  -4.9  -6.4  -4.8    CON组     2.0±0.6   4.1±1.7   7.5±1.8    8.8±2.1
                  IL-6  -4.9  -5.5  -5.8  -5.0  -7.0  -6.1  -6  MOD组   1.7±0.8   4.8±1.8   9.6±1.5 a  14.2±1.9 a
                 TLR4  -4.8  -6.0  -6.3  -4.9  -6.8  -5.5     KXS组     2.1±0.5   5.0±1.3   8.3±1.7 b  11.3±2.0 c
                  TNF  -5.3  -6.3  -6.0  -5.0  -6.9  -6.3  -7  DON组    1.8±0.8   4.6±1.1   8.2±2.2 b  10.4±2.3 c
                NLRP3  -5.9  -7.5  -7.8  -6.1  -8.1  -6.6       a:与CON组比较,P<0.01;b:与MOD组比较,P<0.05;c:与MOD
                CASP1  -5.1  -6.4  -6.9  -5.1  -7.0  -6.7
                                                  -8         组比较,P<0.01。
                                                结合能/
                     人参炔 五味子 五味子 人参环 vulgarin enhydrin  (kcal/mol)  间探索实验。首日为适应性训练,即每只大鼠游泳 1
                     三醇   酯甲  酯乙 氧炔醇
         图2 KXS 核心抗炎成分与炎症通路核心靶点的结合                           min 以适应圆柱形水池(直径 150 cm、深 50 cm)环境并
               能热图                                           认识逃生平台(高出水面1.5 cm)。第2至5天为定位航
                                                             行训练,即让大鼠每天从水池4个象限入水,记录其找到
          2.3 动物实验验证
                                              [16]
              基于上述网络药理学结果和相关文献 ,本研究拟                         平台(低于水面 1.5 cm)的逃避潜伏期(若大鼠 60 s 内找
                                                             到平台,则记录实际所用时间;若未找到,则记为60 s,并
          从NF-κB信号通路出发进行验证。
                                                             将大鼠引导至平台停留10 s)。第6天为空间探索实验,
          2.3.1 药液的配制
                                                             即移除平台,将大鼠置于水池固定象限(第3象限)的特
              分别取远志、人参、茯苓、石菖蒲饮片 90、90、180、
          90 g,混合,加12倍量水浸泡0.5 h后,加热回流1.5 h,过                 定位置,记录其 60 s 内的游泳活动路线,分析其逃避潜
          滤;药渣加8倍量水,加热回流1 h,过滤;合并2次滤液,                       伏期、穿越平台次数、平台象限路程及时间,作为大鼠学
          减压浓缩,得质量浓度为 1 g/mL(以生药量计)的药液,                      习记忆能力的评估指标。
          于-20 ℃下保存,备用。                                          结果(表2、图3)显示,与CON组比较,MOD组大鼠
          2.3.2 分组、造模与给药                                     的游泳活动路线复杂,其逃避潜伏期显著延长,穿越平
              将大鼠随机分为对照组(CON 组)、模型组(MOD                      台次数、平台象限路程及时间均显著减少或缩短(P<
          组)、KXS 组[1.35 g/(kg·d),以水为溶剂,按成人临床剂                0.05 或 P<0.01);与 MOD 组比较,KXS 组和 DON 组大
          量换算而得]、多奈哌齐组[DON 组,1.35 mg/(kg·d),以                鼠的游泳活动路线有不同程度简化,其逃避潜伏期均显
                                                [18]
          水为溶剂,按成人临床剂量的1.5倍换算而得 ],每组8                        著缩短,KXS 组大鼠的穿越平台次数、平台象限路程及
          只。除对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射 250 mg/kg                      时间和DON组大鼠的穿越平台次数均显著增加或延长
          的D-gal(以生理盐水为溶剂),每天1次;与此同时,KXS                    (P<0.05或P<0.01)。
          组和DON组大鼠灌胃相应药液,每天1次。造模及给药                          表2 各组大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数、平台象限路
          均持续12周。其间,每2周检测各组大鼠体重1次,根据                              程及时间比较(n=8)
          其体征量化评分、Morris水迷宫实验及脑组织切片结果                               逃避潜伏期   穿越平台次数[M(P 25,P 75)  平台象限路程  平台象限时间
                                   [19]
          来判断AD模型是否复制成功 。                                     组别    (x±s)/s     或(x±s)]    (x±s)/cm   (x±s)/s
          2.3.3 大鼠体征量化评分                                      CON组  25.00±14.99    1.5(1.0,2.0)  368.44±77.73  13.80±3.01
                                                              MOD组  54.75±7.55 a  0(0,1.0) a  270.66±78.42 b  10.52±2.21 b
              实验期间,由 2 位实验人员对大鼠体征(包括毛发、
                                                              KXS组  29.38±23.02 c  1.50±0.93 c  376.56±71.00 d  15.63±4.09 c
          皮肤、神情、活动、抓取时抵抗力、扎堆情况)进行量化评                          DON组  33.50±19.03 d  1.25±0.71 d  309.99±77.63  12.96±2.57
                                                 [20]
          分,每 4 周评估 1 次。具体标准参考相关文献 。采用                          a:与CON组比较,P<0.01;b:与CON组比较,P<0.05;c:与MOD
          SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。服从正态分布的                       组比较,P<0.01;d:与MOD组比较,P<0.05。
          数据以 x±s 表示,采用单因素方差分析进行多组间比
          较,采用 LSD-t 检验(方差齐时)或 Games-Howell 检验
         (方差不齐时)进行进一步两两比较;不服从正态分布的
          数据以M(P25,P75 )表示,采用Kruskal-Wallis H检验进行
          多组间比较,采用Wilcoxon秩和检验进行进一步两两比
                                                                A. CON组     B. MOD组     C. KXS组     D. DON组
          较。检验水准α=0.05(统计方法后同)。                                  图3 各组大鼠空间探索实验的游泳活动路线
              结果(表1)显示,实验第8、12周时,与CON组比较,
          MOD 组大鼠的体征量化评分均显著升高(P<0.01);与                      2.3.5 标本采集与脏器指数检测
          MOD组比较,KXS组和DON组大鼠的体征量化评分均                             Morris 水迷宫实验后,称定各组大鼠体重,将其麻
          显著降低(P<0.05或P<0.01)。                               醉后处死,取其大脑。随机选取每组3只大鼠的大脑,用
          2.3.4 大鼠学习记忆能力评估                                   4%多聚甲醇溶液固定,用于后续HE、尼氏染色观察;取
              采用 Morris 水迷宫实验于实验第 12 周评估大鼠学                  每组剩余大鼠的大脑,分离海马组织并冻存,用于后续
          习记忆能力(其间维持正常给药),具体操作参考相关文                          Western blot实验。同时,收集各组大鼠的心脏、肝脏、脾
            [21]
          献 :实验为期6 d,包括适应性训练、定位航行训练及空                        脏、胸腺,称重后计算相应脏器指数并进行组间比较。

          中国药房  2025年第36卷第12期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 12    · 1479 ·
   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78