Page 73 - 《中国药房》2025年12期
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NFKB1 -4.4 -6.5 -6.5 -5.0 -7.0 -6.4 表1 各组大鼠体征量化评分比较(x±s,n=8,分)
-5
NF-κB p65 -4.8 -6.8 -6.6 -5.2 -6.7 -7.8 组别 第0周 第4周 第8周 第12周
IL-1β -5.2 -5.9 -4.9 -4.9 -6.4 -4.8 CON组 2.0±0.6 4.1±1.7 7.5±1.8 8.8±2.1
IL-6 -4.9 -5.5 -5.8 -5.0 -7.0 -6.1 -6 MOD组 1.7±0.8 4.8±1.8 9.6±1.5 a 14.2±1.9 a
TLR4 -4.8 -6.0 -6.3 -4.9 -6.8 -5.5 KXS组 2.1±0.5 5.0±1.3 8.3±1.7 b 11.3±2.0 c
TNF -5.3 -6.3 -6.0 -5.0 -6.9 -6.3 -7 DON组 1.8±0.8 4.6±1.1 8.2±2.2 b 10.4±2.3 c
NLRP3 -5.9 -7.5 -7.8 -6.1 -8.1 -6.6 a:与CON组比较,P<0.01;b:与MOD组比较,P<0.05;c:与MOD
CASP1 -5.1 -6.4 -6.9 -5.1 -7.0 -6.7
-8 组比较,P<0.01。
结合能/
人参炔 五味子 五味子 人参环 vulgarin enhydrin (kcal/mol) 间探索实验。首日为适应性训练,即每只大鼠游泳 1
三醇 酯甲 酯乙 氧炔醇
图2 KXS 核心抗炎成分与炎症通路核心靶点的结合 min 以适应圆柱形水池(直径 150 cm、深 50 cm)环境并
能热图 认识逃生平台(高出水面1.5 cm)。第2至5天为定位航
行训练,即让大鼠每天从水池4个象限入水,记录其找到
2.3 动物实验验证
[16]
基于上述网络药理学结果和相关文献 ,本研究拟 平台(低于水面 1.5 cm)的逃避潜伏期(若大鼠 60 s 内找
到平台,则记录实际所用时间;若未找到,则记为60 s,并
从NF-κB信号通路出发进行验证。
将大鼠引导至平台停留10 s)。第6天为空间探索实验,
2.3.1 药液的配制
即移除平台,将大鼠置于水池固定象限(第3象限)的特
分别取远志、人参、茯苓、石菖蒲饮片 90、90、180、
90 g,混合,加12倍量水浸泡0.5 h后,加热回流1.5 h,过 定位置,记录其 60 s 内的游泳活动路线,分析其逃避潜
滤;药渣加8倍量水,加热回流1 h,过滤;合并2次滤液, 伏期、穿越平台次数、平台象限路程及时间,作为大鼠学
减压浓缩,得质量浓度为 1 g/mL(以生药量计)的药液, 习记忆能力的评估指标。
于-20 ℃下保存,备用。 结果(表2、图3)显示,与CON组比较,MOD组大鼠
2.3.2 分组、造模与给药 的游泳活动路线复杂,其逃避潜伏期显著延长,穿越平
将大鼠随机分为对照组(CON 组)、模型组(MOD 台次数、平台象限路程及时间均显著减少或缩短(P<
组)、KXS 组[1.35 g/(kg·d),以水为溶剂,按成人临床剂 0.05 或 P<0.01);与 MOD 组比较,KXS 组和 DON 组大
量换算而得]、多奈哌齐组[DON 组,1.35 mg/(kg·d),以 鼠的游泳活动路线有不同程度简化,其逃避潜伏期均显
[18]
水为溶剂,按成人临床剂量的1.5倍换算而得 ],每组8 著缩短,KXS 组大鼠的穿越平台次数、平台象限路程及
只。除对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射 250 mg/kg 时间和DON组大鼠的穿越平台次数均显著增加或延长
的D-gal(以生理盐水为溶剂),每天1次;与此同时,KXS (P<0.05或P<0.01)。
组和DON组大鼠灌胃相应药液,每天1次。造模及给药 表2 各组大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数、平台象限路
均持续12周。其间,每2周检测各组大鼠体重1次,根据 程及时间比较(n=8)
其体征量化评分、Morris水迷宫实验及脑组织切片结果 逃避潜伏期 穿越平台次数[M(P 25,P 75) 平台象限路程 平台象限时间
[19]
来判断AD模型是否复制成功 。 组别 (x±s)/s 或(x±s)] (x±s)/cm (x±s)/s
2.3.3 大鼠体征量化评分 CON组 25.00±14.99 1.5(1.0,2.0) 368.44±77.73 13.80±3.01
MOD组 54.75±7.55 a 0(0,1.0) a 270.66±78.42 b 10.52±2.21 b
实验期间,由 2 位实验人员对大鼠体征(包括毛发、
KXS组 29.38±23.02 c 1.50±0.93 c 376.56±71.00 d 15.63±4.09 c
皮肤、神情、活动、抓取时抵抗力、扎堆情况)进行量化评 DON组 33.50±19.03 d 1.25±0.71 d 309.99±77.63 12.96±2.57
[20]
分,每 4 周评估 1 次。具体标准参考相关文献 。采用 a:与CON组比较,P<0.01;b:与CON组比较,P<0.05;c:与MOD
SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。服从正态分布的 组比较,P<0.01;d:与MOD组比较,P<0.05。
数据以 x±s 表示,采用单因素方差分析进行多组间比
较,采用 LSD-t 检验(方差齐时)或 Games-Howell 检验
(方差不齐时)进行进一步两两比较;不服从正态分布的
数据以M(P25,P75 )表示,采用Kruskal-Wallis H检验进行
多组间比较,采用Wilcoxon秩和检验进行进一步两两比
A. CON组 B. MOD组 C. KXS组 D. DON组
较。检验水准α=0.05(统计方法后同)。 图3 各组大鼠空间探索实验的游泳活动路线
结果(表1)显示,实验第8、12周时,与CON组比较,
MOD 组大鼠的体征量化评分均显著升高(P<0.01);与 2.3.5 标本采集与脏器指数检测
MOD组比较,KXS组和DON组大鼠的体征量化评分均 Morris 水迷宫实验后,称定各组大鼠体重,将其麻
显著降低(P<0.05或P<0.01)。 醉后处死,取其大脑。随机选取每组3只大鼠的大脑,用
2.3.4 大鼠学习记忆能力评估 4%多聚甲醇溶液固定,用于后续HE、尼氏染色观察;取
采用 Morris 水迷宫实验于实验第 12 周评估大鼠学 每组剩余大鼠的大脑,分离海马组织并冻存,用于后续
习记忆能力(其间维持正常给药),具体操作参考相关文 Western blot实验。同时,收集各组大鼠的心脏、肝脏、脾
[21]
献 :实验为期6 d,包括适应性训练、定位航行训练及空 脏、胸腺,称重后计算相应脏器指数并进行组间比较。
中国药房 2025年第36卷第12期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 12 · 1479 ·