Page 27 - 《中国药房》2025年12期
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抑郁、学习记忆障碍、社交退缩、情感淡漠等，其中认知                          2 方法
          障碍是其最常见且最核心的不良反应                 [5―7] 。目前，氯胺      2.1 动物分组与给药
          酮致认知障碍的神经机制仍不明确。研究表明，前额叶                               参照本课题组前期实验结果 ，将24只小鼠随机分
                                                                                         [11]
          皮质（prefrontal cortex，PFC）中由小清蛋白阳性的γ氨基              为两组，分别为对照组（生理盐水）和氯胺酮组（氯胺酮

          丁酸（γ aminobutyric acid，GABA）能中间神经元构成的
                                                             单次剂量 25 mg/kg），每组 12 只。各组小鼠按每 10 g
                                                  [8]
          微环路在神经可塑性调控中发挥着关键作用 ；此外，
                                                             体重腹腔注射生理盐水或相应药液 0.1 mL，每天 4 次
          PFC 是大脑的重要边缘系统之一，对认知过程（如执行
                                                            （8：30－20：30），连续10 d。
          控制、注意力和工作记忆）和情绪调节至关重要 。代谢
                                                  [9]
                                                             2.2 行为学测试
          组学可通过识别生物体内源性代谢物的改变及特定代
                                                                 所有小鼠从给药最后 2 d 开始进行 Y 迷宫实验和
          谢途径进而追溯生物体内源性生理、病理状态，已被广
                                                             NOR 实验。所有测试均在 50～100 lux 光照条件下进
                                        [10]
          泛应用于药物滥用毒理学研究领域 。基于此，本研究
                                                             行，测试时间与小鼠的生物节律保持一致，其间保持实
          以超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术为手
                                                             验环境安静、温度稳定。测试前1 d，将小鼠放置在测试
          段，采用代谢组学方法探讨氯胺酮致认知障碍小鼠PFC
                                                             室中适应测试环境，以减少其对新环境的应激反应。
          内源性代谢物的变化，通过模式识别和多元统计分析，
                                                             2.2.1 Y迷宫实验
          筛选差异代谢物并富集相关代谢通路，以期为揭示氯胺
          酮致认知障碍的关键代谢调控机制及其神经生物学基                                每组取小鼠10只进行Y迷宫实验，评价其空间记忆
          础提供实验依据。                                           能力：Y迷宫由3条相同的支臂（长28 cm、宽5 cm、高10
          1 材料                                               cm）组成，各支臂之间的夹角为120 °。将小鼠放置于Y

          1.1 主要仪器                                           迷宫同一支臂的末端，让其自由探索 5 min；随后，使用
              Y 迷宫装置、新物体识别（novel object recognition，         高端动物行为分析系统记录小鼠进入支臂的总数和交
          NOR）系统、VisuTrack高端动物行为分析系统均购自上                     替数（即连续3次进入不同支臂的次数），并按下式计算
                                        TM
          海欣软信息科技有限公司；Vanquish  Flex型 UPLC仪、                 交替率：交替率（%）＝交替数/（进入各支臂的总数－
          Q Exactive  HF-X 型质谱仪、Thermo Micro 17R 型台式         2）×100%。
                   TM
          低温高速离心机均购自美国 Thermo Fisher Scientific 公            2.2.2 NOR实验
          司；CX22型光学显微镜购自日本Olympus公司。                             Y 迷宫实验后，每组取小鼠 7 只进行 NOR 实验，评
          1.2 主要药品与试剂                                        价其记忆能力：NOR 实验包括 T1（熟悉期）和 T2（测试
              氯胺酮（纯度≥99%）来源于四川省公安厅；2-氯苯                      期）2个实验（每个实验5 min，间隔1 h）。在T1实验中，
          丙氨酸（纯度≥98.5%，批号A2215290）、甲酸铵（纯度≥
                                                             将 2 个相同的物体（A 和 B）放在一侧壁的左右两端，距
          99.9%，批号 KP3VL-PL）和甲酸（质谱级）均购自美国
                                                             离两侧壁约 10 cm；T1 实验结束后 1 h，将 A 或 B 用新物
          Sigma-Aldrich公司；甲醇、乙腈和苏木精、伊红染液均购
                                                             体C取代，进行T2实验。使用高端动物行为分析系统记
          自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；尼氏染色液（甲苯
                                                             录小鼠在 T1 和 T2 实验中对物体的探索行为（前爪搭在
          胺蓝法）购自阿拉丁控股集团有限公司；无水乙醇、二甲
                                                             物体上、鼻子嗅物体、舔物体等）和探索物体的时间，并
          苯、多聚甲醛均为分析纯，购自成都市科隆化学品有限
                                                             根据 T2 实验结果按下式计算辨别指数（discrimination
          公司；水为自制超纯水。
                                                             index，DI）：DI＝探索新物体时间/（探索新物体时间+探
          1.3 实验动物
                                                             索熟悉物体时间）×100%。
              SPF 级雄性 C57BL/6 小鼠 24 只，5 周龄，体重 20～
                                                             2.3 样品的采集
          25 g，购自川北医学院动物中心，动物生产许可证号为
                                                                 行为学测试后12 h，将所有小鼠麻醉并快速灌注生
          SCXK（川）2023-0018。所有小鼠均饲养于室温（25±
          1）℃、相对湿度 40%～60%、每 12 h 光暗交替的动物房                   理盐水，以去除脑血管中的血液。每组随机取小鼠3只，
          中，自由摄食、饮水，适应性喂养1周后开始实验。所有                          灌注4%多聚甲醛溶液后断头取脑，将其整脑用4%多聚
          动物实验均遵照《实验动物管理和使用指导》相关规定                           甲醛溶液固定，用于组织病理学观察；取各组剩余小
          进行，并经川北医学院伦理委员会审批通过，批准文号                           鼠，断头取脑，于冰上剥离其 PFC 组织，经液氮速冻
          为CBY23-QDA03。                                      后，于－80 ℃下冻存，用于代谢组学检测。


          中国药房  2025年第36卷第12期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 12    · 1437 ·
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