Page 31 - 《中国药房》2025年11期
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光照/12 h黑暗交替的动物房内，正常摄食饮水。本研究                        黏膜组织，以甲醛固定后，浸蜡包埋制备胃黏膜组织石
          已通过湖北贝恩特生物科技有限公司动物中心动物伦                            蜡切片，常规处理后取部分切片进行HE染色，采用显微
          理委员会审批（批号为BNT-202403028）。                          镜观察胃黏膜组织病理损伤。
          2 方法                                               2.6 胃黏膜细胞凋亡检测
          2.1 药液制备                                               取“2.5”项下各组大鼠剩余胃黏膜组织石蜡切片，脱
              按香砂益胃汤处方称取相应饮片，加入 8 倍量水浸                       蜡至水后参照试剂盒说明书方法进行 TUNEL 染色及
          泡 30～60 min，然后用大火煮开，以中低火保持沸腾                       DAPI 染色，采用显微镜观察胃黏膜组织细胞的凋亡情
          20～30 min；再加适量水浸过药面，用大火煮开，以中低                      况（其中凋亡细胞呈绿色，细胞核呈蓝色），并计算细胞
          火保持沸腾 15～25 min；过滤药液，然后浓缩成质量浓                      凋亡率（凋亡率＝凋亡细胞数/总细胞数×100%）。
          度为3.6 g/mL的药液（以生药量计），待用。                           2.7 胃黏膜组织中 TGF-β1/PI3K/Akt 信号通路相关蛋
          2.2 分组、造模与给药                                       白和凋亡相关蛋白表达检测
              所有大鼠适应性喂养 1 周后，随机分为正常对照组                           取各组剩余 6 只大鼠，颈椎脱臼处死后取胃黏膜组
         （n＝18）和造模组（n＝93）。造模组大鼠自由饮用 0.04                     织，然后用蛋白裂解液充分裂解，提取总蛋白并定量。
          g/mL MNNG 溶液，每天灌胃 0.03 g/kg 雷尼替丁 1 次，并             蛋白经变性处理后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝
          结合饥饱失常饮食（饱 2 d、饥 1 d，循环），连续 20 周，以                 胶电泳，转膜后以血清封闭，加入TGF-β1、p-PI3K、PI3K、
                      [6]
          复制CAG模型 。任选3只造模大鼠取胃黏膜组织进行                          p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2、β -actin 一 抗（稀 释 度 分 别 为
          病理观察，若胃黏膜腺体萎缩、数量减少且出现炎症细                           1∶500、1∶1 000、1∶1 000、1∶2 000、1∶500、1∶1 000、1∶1 000、
                               [7]
          胞浸润，则表示造模成功 。将造模成功的大鼠随机分                           1∶2 000）孵育过夜；加入相应二抗（稀释度 1∶10 000）室
          为模型组，香砂益胃汤低、中、高剂量组（6、12、18 g/kg，                   温反应，然后经 ECL 显色处理后，采用凝胶成像系统成
          剂量根据本课题组前期实验结果设置，以生药量计），香                          像，采用Image软件分析蛋白灰度值，以目的蛋白与内参
          砂益胃汤高剂量+740 Y-P组（高剂量香砂益胃汤18 g/kg+                  蛋白（β-actin）的灰度值比值表示目的蛋白的表达水平，
                        [8]
          740 Y-P 10 mg/kg ），每组 18 只。香砂益胃汤低、中、高              以 p-PI3K 与 PI3K、p-Akt 与 Akt 蛋白的表达水平比值表
          剂量组大鼠分别灌胃相应药液并尾静脉注射 10 mL/kg                       示PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平。
          的生理盐水；香砂益胃汤高剂量+740 Y-P组大鼠灌胃18                      2.8 统计学方法
          g/kg的香砂益胃汤并尾静脉注射10 mg/kg的740 Y-P；正                     采用SPSS 25.0软件进行统计分析。符合正态分布
          常对照组与模型组大鼠灌胃等体积水并尾静脉注射等                            的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分
                                                             析，组间两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
          体积生理盐水；每天1次，连续4周。
          2.3 胃黏膜血流量检测                                       3 结果
              给药结束后，各组任选 6 只大鼠，禁食不禁水 24 h，                   3.1 香砂益胃汤对CAG大鼠胃黏膜血流量的影响
          麻醉大鼠；沿右腹股沟行切口分离股静脉与股动脉，然                               与正常对照组比较，模型组大鼠胃黏膜血流量显著
          后经十二指肠将软管插入胃内，收集 0.5 mL 胃液，再沿                      降低（P＜0.05）；与模型组比较，香砂益胃汤各剂量大鼠
          右股静脉注射 2 mL 中性红溶液，注射完用微量注射泵                        胃黏膜血流量均显著升高，且呈剂量依赖性（P＜0.05）；
          恒速输注 4 mL 中性红溶液，使中性红浓度维持在 4                        与香砂益胃汤高剂量组比较，香砂益胃汤高剂量+740 Y-
          mg/（kg·h）；持续收集胃液 2 h（15 min/次），结束后再取               P 组 大 鼠 胃 黏 膜 血 流 量 显 著 降 低（P＜0.05）。 结 果
                                                             见表1。
          血4 mL，测定胃液和血液样本中的中性红浓度，再计算
                                                             表1 各组大鼠胃黏膜血流量和血清中 MTL、GAS、PP
          胃黏膜血流量（胃液中性红浓度/血液中性红浓度×单位
                                                                  水平比较（x±s，n＝6）
                           [9]
          时间内胃液分泌量） 。
                                                                            胃黏膜血流量/
          2.4 血清中胃激素及炎症因子水平检测                                 组别                     MTL/（pg/mL）  GAS/（pg/mL）  PP/（U/mL）
                                                                             [mg/（kg·h）]
              给药结束后，各组任选另6只大鼠，以戊巴比妥钠麻                         正常对照组          29.71±3.06  412.63±41.79  148.62±15.17  19.86±1.81
          醉，取腹主动脉血；血样以 3 000 r/min 离心 5 min，取血                模型组            8.55±0.94 a  239.78±24.21 a  62.17±6.58 a  7.05±0.86 a
                                                              香砂益胃汤低剂量组      14.14±1.50 b  290.54±30.54 b  83.96±8.74 b  10.32±1.09 b
          清；按 ELISA 试剂盒说明书方法操作，采用酶标仪检测                        香砂益胃汤中剂量组      20.06±2.16 bc  342.22±35.06 bc  108.34±11.75 bc  14.13±1.45 bc
          大鼠血清中胃激素（MTL、GAS、PP）及炎症因子（TNF-                      香砂益胃汤高剂量组      27.83±2.89 bcd  398.43±40.83 bcd  137.51±14.21 bcd  19.52±2.02 bcd
                                                              香砂益胃汤高剂量+740 Y-P组  16.72±1.75 e  312.57±31.95 e  88.23±8.97 e  12.35±1.28 e
          α、IL-1β、IL-6）水平。
                                                                a：与正常对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与香
          2.5 胃黏膜组织病理形态观察
                                                             砂益胃汤低剂量组比较，P＜0.05；d：与香砂益胃汤中剂量组比较，P＜
             “2.4”项下实验结束后，颈椎脱臼处死大鼠，剖取胃                       0.05；e：与香砂益胃汤高剂量组比较，P＜0.05。


          中国药房  2025年第36卷第11期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 11    · 1313 ·
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