Page 59 - 《中国药房》2025年10期
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预。酶标仪测各组细胞485 nm波长处的吸光度值，以反                       （degree＝13，BC＝0.05，CC＝0.50，NC＝8.93），其次为
          映给予药物后是否有药效。共选取5批次药材进行实验。                          泽泻醇 C（alisol C）、一亚油酸甘油酯（1-monolinolein）、
          1.2.9 统计学分析                                        泽泻醇 B 单乙酸酯（alisol B monoacetate）；MDM2 为泽
              采用 GraphPad Prism 10.1.2 软件绘图，采用 SPSS          泻 汤 治 疗 NAFLD 的 最 主 要 靶 点（degree＝14，BC＝
          27.0软件进行统计分析，计量资料满足正态分布以x±s                        0.15，CC＝0.56，NC＝9.71），其次为 MAPK1、PIK3CB、
          表示，多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用                           PRKCQ、MAPK14。
          LSD-t检验。检验水准α＝0.05。                                2.1.5 “泽泻汤-NAFLD靶点”富集分析
          2 结果                                                   通过Metascape平台对27个候选靶点进行GO功能
          2.1 网络药理学分析结果                                      和 KEGG 通路富集分析。GO 功能富集分析结果显示，
          2.1.1 泽泻汤活性成分及靶点的获取                                共有317个GO术语显示富集，其中分子功能75个、生物
              初步检索获得泽泻活性成分 46 种、白术活性成分                       过程655个、细胞组成33个。KEGG通路富集分析结果
          55 种。根据口服生物利用度≥30%、类药性≥0.18 筛选
                                                             显示，有146条信号通路，主要涉及内分泌抵抗、胰岛素
          获得泽泻 10 种、白术 7 种主要活性成分，获得泽泻活性
                                                             抵抗、辅助性T细胞17（T helper cell 17，Th17）细胞分化
          成分作用靶点 940 个、白术活性成分作用靶点 332 个。
                                                             等。对获取的条目进行聚类并绘制气泡图，见图3。
          合并后删除重复值，最终得到泽泻汤活性成分作用靶点
                                                             2.2 细胞实验验证结果
          388个。
                                                             2.2.1 不同给药浓度对HepG2细胞相对活力的影响
          2.1.2 NAFLD相关靶点的获取
                                                                 最佳药物浓度筛选实验结果显示，随着给药浓度的
              检索 GeneCards、OMIM、TTD、DisGeNET 数据库分
                                                             升高，不同组别细胞相对活力均降低，尤其从0.2 mg/mL
          别获得 2 672、509、8、15 个靶点，汇总并删除重复值，最
                                                             开始，与空白对照组比较，各给药组的细胞相对活力降
          终得到NAFLD相关靶点3 162个。
                                                             低差异有统计学意义（P＜0.05）。这表明各给药组浓
          2.1.3 “泽泻汤-NAFLD靶点”PPI网络构建
                                                             度≤0.2 mg/mL 时，对细胞没有毒性，因此，以浓度 0.2
              将筛选的泽泻汤活性成分作用靶点与NAFLD相关
                                                             mg/mL进行后续实验。结果见图4。
          靶点取交集，并绘制韦恩图，得到138个共同靶点。将靶
                                                             2.2.2 油酸诱导HepG2细胞脂质堆积模型的建立
          点提交至String数据库，得到“泽泻汤-NAFLD靶点”PPI
          网络图。根据degree≥2、BC≥0.000 37、CC≥0.29、NC≥                 细胞活力测定结果显示，与空白对照比较，油酸钠
          6进一步筛选核心靶点，最终得到泽泻汤调节NAFLD的                         在600 μmol/L以下时无细胞毒性（P＞0.05），见图5。油
          核心靶点共27个，见图1。                                      红 O 染色显示，给予油酸钠 300 μmol/L，细胞吸光度值
          2.1.4 “泽泻汤-NAFLD靶点-通路”网络图的构建                       显著高于空白对照（0.188±0.001 vs. 0.111±0.001，P＜
              运用CytoScape 3.7.2构建“泽泻汤-NAFLD 靶点-通             0.05）。显微镜下观察结果（图 6）显示，空白对照组
          路”网络图（图2），包括46个节点、173条边，其中核心靶                      HepG2细胞边缘无明显脂质着色，油酸钠组细胞着色明
          点 27 个、活性成分节点 12 个（泽泻 9 个、白术 3 个）。泽                显，可见脂滴环绕细胞核周围，表明脂质堆积模型诱导
          泻醇B（alisol B）为泽泻汤治疗NAFLD的主要活性成分                    成功。






                                                  degree≥2
                                                  BC≥0.000 37
                                                  CC≥0.29
                                                  NC≥6










                        A.138个共同靶点                                                   B.27个核心靶点
                                          图1 “泽泻汤-NAFLD靶点”PPI网络图


          中国药房  2025年第36卷第10期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 10    · 1205 ·
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