Page 36 - 《中国药房》2025年10期

试剂分离总RNA，经浓度、纯度检测后，根据相应试剂盒 500 对照组 500 对照组
1 nmol/L DEX组
10 nmol/L DEX组 400 1 nmol/L DEX组
10 nmol/L DEX组
400
说明书将其逆转录为 cDNA。随后，以此 cDNA 为模板 100 nmol/L DEX组 100 nmol/L DEX组
进行 PCR 扩增。反应体系包括 cDNA 模板 1.6 μL，正、 细胞活力/% 300 细胞活力/% 300
200
200
反向引物各 1 μL，SYBR Green mix 10 μL，ddH2O 6.4 100 100
μL。PCR反应条件为95 ℃预变性10 min；95 ℃变性15 0 0
0 24 48 72 0 24 48 72
s，60 ℃退火 1 min，72 ℃延伸 15 s，共循环 40 次。以 时间/h 时间/h
A. KTC-1细胞 B. TPC-1细胞
β-actin 作为内参，使用 2 －ΔΔCt 法计算核心靶点 mRNA 的
a：与对照组比较，P＜0.05。
表达水平。 图1 不同浓度 DEX 对 THCA 细胞增殖能力的影响
采用 Western blot 法检测核心靶点蛋白的表达。取 （x±s，n＝3）
6
对数生长期的KTC-1、TPC-1细胞，分别以每孔1×10 个
THCA 细胞的克隆形成率[KTC-1细胞：（14.00±0.53）%、
接种于 96 孔板中，按“2.2.1”项下方法分组（勿需设置空
（17.73±1.04）% 、（24.07±1.10）%；TPC-1 细胞：（16.97±
白组）、处理、培养 24 h。收集细胞，其余按“2.3.4”项下
0.93）%、（22.27±0.90）%、（28.10±2.25）%]均显著升高，
方法操作。
且呈浓度依赖性（P＜0.05）。结果见图2（限于篇幅，仅展
2.4.2 DEX对核心靶点蛋白分泌的影响检测
示KTC-1细胞结果，TPC-1细胞结果可扫描本文首页二
为进一步阐明核心靶点表达上调的机制，本研究采
维码链接页面中“增强出版”板块查看附图1）。
用Western blot法评估经DEX处理后的THCA细胞能否
分泌核心靶点蛋白。取对数生长期的 KTC-1、TPC-1 细
6
胞，以每孔1×10 个接种于6孔板中，按“2.2.1”项下方法
分组（勿需设置空白组）、处理、培养。待细胞融合至
80%左右时，再继续培养24 h，然后移除培养基，加入不
含FBS的条件培养基（conditioned medium，CM），培养6 h A.对照组 B. 1 nmol/L C. 10 nmol/L D. 100 nmol/L
DEX组 DEX组 DEX组
后，回收CM并在4 ℃下离心10 min，按“2.4.1”项下实验 图2 不同浓度 DEX 对 KTC-1 细胞克隆形成能力的影
操作检测各组细胞CM中核心靶点蛋白的表达水平。 响（结晶紫染色，培养皿直径3.5 cm）
2.4.3 敲减核心靶点对DEX作用的影响检测
3.1.3 细胞迁移能力
取对数生长期的 KTC-1、TPC-1 细胞，分别以每孔
与对照组[KTC-1 细胞：（16.93±4.06）%；TPC-1 细
6
3×10 个接种于12孔板中，并分为si-SERPINE1组和si-
胞：（7.03±1.52）%]比较，10、100 nmol/L DEX 组 2 种
NC 组，每组设置 3 个复孔。使用 Lipofectamine 2000 转
THCA 细 胞 的 迁 移 率 [KTC-1 细 胞 ：（36.34±1.89）% 、
染试剂分别转染si-SERPINE1或其阴性对照。转染24 h
（43.98±1.73）%；TPC-1细胞：（32.76±2.81）%、（45.08±
后 ，通 过“2.4.1”项 下 RT-qPCR 法 检 测 其 SERPINE1
1.36）%]均显著升高，且呈浓度依赖性（P＜0.05），而
mRNA的表达水平来验证转染效果，再按“2.2”项下方法
检测各组细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力。 1 nmol/L DEX组2种THCA细胞的迁移率[KTC-1细胞：
2.5 统计学方法 （15.97±4.31）%；TPC-1 细胞：（4.71±1.64）%]无明显变
采用 SPSS 22.0、GraphPad Prism 9.5 软件对数据进 化，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见图 3（限于
行统计分析并作图。计数资料以率表示，组间比较采用 篇幅，仅展示 KTC-1 细胞结果，TPC-1 细胞结果可扫描
2
χ 检验；计量资料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素 本文首页二维码链接页面中“增强出版”板块查看
方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。检验水准 附图2）。
α＝0.05。 3.1.4 细胞侵袭能力
3 结果 与对照组[KTC-1细胞：（75.33±17.39）个；TPC-1细
3.1 DEX对THCA细胞恶性生物学行为的影响 胞：（27.67±6.03）个]比较，1、10、100 nmol/L DEX组2种
3.1.1 增殖能力 THCA 细胞的侵袭数[KTC-1 细胞：（151.00±13.89）、
与对照组比较，1、10、100 nmol/L DEX组2种THCA （209.00±12.12）、（280.67±10.97）个 ；TPC-1 细 胞 ：
细胞 24、48、72 h 时的细胞活力均显著升高（P＜0.05）， （68.33±13.43）、（164.00±11.53）、（228.67±19.22）个]
且有随DEX浓度增加而升高的趋势。结果见图1。 均显著升高，且呈浓度依赖性（P＜0.05）。结果见图 4
3.1.2 细胞克隆形成能力 （限于篇幅，仅展示KTC-1细胞结果，TPC-1细胞结果可
与对照组[KTC-1细胞：（8.67±1.06）%；TPC-1细胞： 扫描本文首页二维码链接页面中“增强出版”板块查看
（10.60±1.01）% ] 比 较 ，1、10、100 nmol/L DEX 组 2 种 附图3）。

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