Page 37 - 《中国药房》2025年9期

100
90 7 4
80
3
70
60 2
mAU 50 VIP[3+0+1] 1
40
17 0
30 21 23 26
20 2 8 －1
9 12
10 10 19 20 22 －2
0
－10 峰7 峰21 峰26 峰19 峰33 峰13 峰23 峰2 峰17 峰8 峰35 峰12 峰38 峰15 峰29 峰22 峰6 峰30 峰20 峰5 峰18 峰27 峰9 峰25 峰37 峰32 峰3 峰24 峰36 峰11 峰10 峰14 峰16 峰4 峰1 峰31 峰34 峰28
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Var ID（Primary）
t/min
图5 钩苞大丁草药材OPLS-DA的VIP得分图
2：新绿原酸；7：绿原酸；8：隐绿原酸；9：3，8-Dhmcc；10：咖啡酸；
12：3-羟基-4-甲氧基-5-羧基-香豆精；17：木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷； 50～55 min，25%A→35%A；55～65 min，35%A→60%A；
19：异绿原酸B；20：异野漆树苷；21：异绿原酸A；22：芹菜素-7-O-β-D- 65～66 min，60%A→95%A）；柱温为 35 ℃；检测波长为
葡萄糖苷；23：异绿原酸C；26：花椒毒素。
图2 混合对照品溶液的HPLC图 330 nm；流速为1 mL/min；进样量为5 μL。
2.3.2 对照品溶液的制备
平方欧氏距离
0 5 10 15 20 25 分别精密称取绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿
S4
S5 原酸 C、3，8-Dhmcc 对照品适量，以 50% 乙醇定容至 5
S3
S1 mL容量瓶中，制成质量浓度分别为1.952、1.209、2.052、
S7
S2 2.050、0.990 mg/mL 的单一成分对照品储备液；分别精
编号 S6
S8 密称取新绿原酸、咖啡酸、3-羟基-4-甲氧基-5-羧基-香豆
S9
S11 精、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄
S12
S13 糖苷和花椒毒素对照品适量，以50%乙醇定容至10 mL
S10 容量瓶中，制成质量浓度分别为 0.502、0.503、0.496、
图3 钩苞大丁草药材的HCA树状图
1.039、0.561、2.058 mg/mL 的单一成分对照品储备液。

8 分别精密吸取上述11种单一成分对照品储备液适量，置
6
4 于同一10 mL容量瓶中，加50%乙醇定容，得绿原酸、隐
2 绿原酸、异绿原酸 A、异绿原酸 C、3，8-Dhmcc、新绿原
t[2] 0
－2 酸、咖啡酸、3-羟基-4-甲氧基-5-羧基-香豆精、木犀草
－4
－6 素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和花椒
－8
－10 毒素质量浓度分别为 0.173、0.033、0.164、0.092、0.077、
－15 －10 －5 0 5 10
t[1] 0.034、0.011、0.078、0.210、0.033、0.290 mg/mL 的混合对
图4 钩苞大丁草药材的PCA得分图 照品溶液。
2.3.3 供试品溶液的制备
2.2.3 OPLS-DA
取钩苞大丁草药材粉末1 g，置于50 mL具塞锥形瓶
在 PCA 基础上进一步进行 OPLS-DA，采用 SIMCA
中，精密称定，加入 50% 乙醇 25 mL，称定质量；加热回
14.1软件绘制OPLS-DA的变量重要性投影（variable im‐
portance for the projection，VIP）得分图（图 5）。以 VIP 流 30 min，放冷，用 50% 乙醇补足减失的质量，摇匀，过
值＞1 为阈值 ，筛选出了 9 个差异化合物，对应的共有 滤。取续滤液适量，以12 000 r/min离心10 min，取上清
[13]
峰依次为峰7（绿原酸）、峰21（异绿原酸A）、峰26（花椒 液作为供试品溶液 A；再精密吸取上述续滤液 2.5 mL
毒素）、峰19（异绿原酸B）、峰33、峰13、峰23（异绿原酸C）、 至 10 mL 容量瓶中，以 50% 乙醇稀释至刻度，摇匀，以
峰 2（新绿原酸）、峰 17（木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷）。 12 000 r/min离心10 min，取上清液作为供试品溶液B。
由此推测，上述9个共有峰所代表的化学成分可能是导 2.3.4 专属性考察
致13批钩苞大丁草药材之间质量差异的主要标志物。 分别吸取“2.3.2”和“2.3.3”项下混合对照品溶液、供
2.3 含量测定 试品溶液 A 5 μL，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记
2.3.1 色谱条件 录色谱图。结果显示，供试品溶液A与混合对照品溶液
采 用 ACE Excel 5 C18-PFP（4.6 mm×250 mm，5 图谱相同保留时间处有相应的色谱峰，各待测成分与相
μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相进 邻色谱峰间的分离度均大于 1.5，且空白溶液（50% 乙

行梯度洗脱（0～6 min，5%A→10%A；6～25 min，10%A→ 醇）不干扰测定，说明该方法专属性良好（图6，空白溶液
17%A；25～28 min，17%A；28～50 min，17%A→25%A； 色谱图略）。

中国药房 2025年第36卷第9期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 9 · 1055 ·