Page 36 - 《中国药房》2025年9期
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行梯度洗脱（0～6 min，5%A→10%A；6～20 min，10%A→ 2.76%（n＝6），表明该供试品溶液在室温下放置 24 h 内
17%A；20～45 min，17%A；45～55 min，17%A→25%A； 稳定性好。
55～70 min，25%A→35%A；70～80 min，35%A→60%A； 2.1.7 指纹图谱的建立与相似度评价
80～90 min，60%A→70%A；90～105 min，70%A→85%A）； 取 13 批钩苞大丁草药材粉末各 1 g，分别按“2.1.3”
柱温为 35 ℃；检测波长为 330 nm；流速为 1.0 mL/min； 项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样
进样量为5 μL。 测定，记录色谱图。将所得图谱导入《中药色谱指纹图
2.1.2 对照品溶液的制备 谱相似度评价系统（2012版）》，以样品S1的色谱图为参
分别精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3，8- 照图谱，设置时间窗宽度为 0.1 min，经多点校正后进行
Dhmcc、咖啡酸、3-羟基-4-甲氧基-5-羧基-香豆精、木犀 Mark 峰匹配，生成 13 批钩苞大丁草药材的叠加指纹图
草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿 谱，并采用中位数法生成对照指纹图谱R，详见图1。结
果显示，13 批样品共标定了 38 个共有峰。经与混合对
原酸C、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、异野漆树苷、花椒毒
照品溶液图谱（图 2）比对，指认了其中 13 个共有峰，分
素对照品适量，置于不同容量瓶中，以 70% 甲醇溶解并
别为新绿原酸（峰2）、绿原酸（峰7）、隐绿原酸（峰8）、3，
稀释，制成质量浓度分别为 0.502、1.004、0.496、1.151、
8-Dhmcc（峰 9）、咖啡酸（峰 10）、3-羟基-4-甲氧基-5-羧
0.503、0.491、1.000、1.017、0.986、0.988、0.962、0.580、
基-香豆精（峰12）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（峰17）、
0.972 mg/mL 的对照品储备液。分别精密吸取上述 13
异绿原酸B（峰19）、异野漆树苷（峰20）、异绿原酸A（峰
种对照品储备液适量，置于同一 10 mL 容量瓶中，加入
21）、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷（峰 22）、异绿原酸 C（峰
70%甲醇稀释并定容，摇匀，制得上述成分质量浓度分别
23）、花椒毒素（峰26）。采用《中药色谱指纹图谱相似度
为9.79、57.80、9.97、21.68、3.47、20.23、68.97、13.61、50.35、
评价系统（2012 版）》对 13 批样品进行相似度评价，得
29.34、9.62、5.80、86.91 μg/mL的混合对照品溶液。
S1～S13 的 相 似 度 分 别 为 0.834、0.801、0.942、0.852、
2.1.3 供试品溶液的制备
0.934、0.985、0.956、0.855、0.994、0.988、0.967、0.957、
取钩苞大丁草药材样品，粉碎。取粉末（过三号筛， 0.966，说明13批钩苞大丁草药材的相似度良好，整体化
下同）1 g，置于 50 mL 具塞锥形瓶中，精密称定，加入 学成分基本一致。
70% 甲醇 25 mL，称质量；超声（功率 200 W，频率 40
1 300
kHz）提取60 min，放冷，再次称质量；用70%甲醇补足减 1 200
失的质量，摇匀，过滤，取续滤液适量，以12 000 r/min离 1 100 7
1 000
心10 min，取上清液，即得。 900
800
2.1.4 精密度试验 mAU 700 2
4 5 8 10
13
取钩苞大丁草药材粉末（S1）1 g，按“2.1.3”项下方 600 1 3 6 9 1112 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 2930 31 33 34 35 36 3738 R
32
500 S13
S12
法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样测 400 S11
S10
300 S9
S8
定6次，记录色谱图。以21号峰（分离度较好，保留时间 200 S7
S6
S5
100 S4
S3
稳定且适中）为参照，计算得各共有峰相对保留时间的 0 S2
S1
RSD 为 0.01%～0.69%（n＝6）、相对峰面积的 RSD 为 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80 84 88 92 96 100 104
t/min
0.26%～2.89%（n＝6），表明该方法精密度良好。 图1 13批钩苞大丁草药材的HPLC叠加指纹图谱及其
2.1.5 重复性试验 对照指纹图谱R
取钩苞大丁草药材粉末（S1）1 g，共 6 份，分别按
2.2 化学模式识别分析
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条
2.2.1 HCA
件进样测定，记录色谱图。以21号峰为参照，计算得各
将13批钩苞大丁草药材中38个共有峰的峰面积导
共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.02%～0.42%（n＝6）、
入SPSS 25.0软件，采用组间连接法进行HCA。结果（图
相对峰面积的 RSD 为 0.78%～2.94%（n＝6），表明该方 3）显示，当平方欧氏距离为10时，13批钩苞大丁草药材
法重复性良好。 可被分为5类：S1～S5、S7聚为一类，S6聚为一类，S8聚
2.1.6 稳定性试验 为一类，S9、S11聚为一类，S10、S12～S13聚为一类。这
取钩苞大丁草药材粉末（S1）1 g，按“2.1.3”项下方 表明不同批次的药材质量具有一定差异。
法制备供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 2.2.2 PCA
h 时按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以 将13批钩苞大丁草药材中38个共有峰的峰面积导
21 号峰为参照，计算得各共有峰相对保留时间的 RSD 入 SIMCA 14.1 软件，建立 PCA 模型。结果（图 4）显示，
为0.01%～0.69%（n＝6）、相对峰面积的RSD为0.57%～ 13批钩苞大丁草药材可被分为5类，与HCA结果一致。
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