Page 59 - 《中国药房》2025年5期
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omim.org/）数据库，以关键词“breast cancer”进行检索；             3 结果
          在 GeneCards 数据库中，设置疾病靶点的筛选条件为相                     3.1 单羰基姜黄素类似物结构表征
          关性得分值≥2 倍中位数，去除重复项后得到乳腺癌相                              F1 产率为 12.2%，分子式为 C23H24O3，C23H24O3[M+
          关靶点信息。将各化合物的靶点与乳腺癌靶点进行比                            H] -MS 实验值为 349.176 7，计算值为 349.179 8；H-
                                                                                                          1
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          对，取交集靶点，然后将交集靶点分别导入 STRING 数                       NMR（400 MHz，DMSO）δ 8.90（s，2H），7.27（s，2H），7.27
          据库，采用 Cytoscape 软件进行蛋白质-蛋白质相互作用                   （s，4H），3.02（t，4H），2.22（s，12H），推测其为 2，5-双
         （protein-protein interaction，PPI）分析，并以节点度值大        （（E）-4-羟基-3，5-二甲基亚苄基）环戊-1-酮。
          于2倍中位数、中介中心性和接近中心性均大于中位数                               F2 产率为 25%，分子式为 C23H24O3S，C23H24O3 S[M+
          筛选各化合物的核心靶点。在 PDB 数据库（https：//                     H] -MS 实验值为 381.149 9，计算值为 381.151 9；H-
                                                                                                          1
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          www.rcsb.org/）中下载度排名第 1 位的核心蛋白（简称
                                                             NMR（400 MHz，DMSO）δ 8.83（s，2H），7.48（s，2H），7.14
         “第一核心蛋白”）的3D结构PDB格式文件，与F1、F2和
                                                            （s，4H），3.36（s，4H），2.20（s，12H），推测其为 3，5-双
          F3 分别进行分子对接，经能量最小化处理后，进行虚拟
                                                            （（Z）-4-羟基-3，5-二甲基亚苄基）四氢-4H-硫吡喃-4-酮。
          复合蛋白相互作用成像，并计算亲和力指数，当亲和力
                                                                 F3产率为15%，分子式为C23H24O4，C23H24O4  [M+H] -
                                                                                                           +
          指数大于7.00时，表明化合物与蛋白的结合活性较强。
                                                             MS 实验值为 365.171 9，计算值为 365.174 7；H-NMR
                                                                                                      1
          2.4 细胞实验验证
                                                            （400 MHz，DMSO）δ 8.94（s，2H），7.52（s，2H），7.04（s，
              采用高、中、低浓度（16、8、4 μmol/L，浓度根据预实
                                                             4H），4.87（s，4H），2.20（s，12H），推测其为3，5-双（（E）-4-
          验结果设置）的 F1、F2 和 F3 处理 MCF-7 细胞（密度为
               3
                      3
          3×10 ～4×10 个/mL）24 h，另设不加药物处理的对照                   羟基-3，5-二甲基亚苄基）四氢-4H-吡喃-4-酮。
                                                             3.2 单羰基姜黄素类似物抗肿瘤活性测定结果
          组，每个浓度平行3个复孔。采用RIPA裂解液对MCF-7
                                                                 作用 24、48 h 后，与姜黄素相比，F1、F2 和 F3 对
          细胞进行裂解，离心后收集总蛋白，蛋白变性处理后进
                                                             A549、MCF-7 细胞的 IC50 （F2 作用于 A549 细胞 24 h 的
          行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，以 5%
                                                             IC50除外）均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），具有一定时
          脱脂奶粉孵育 2 h，加入 AKT、EGFR、p-AKT、p-EGFR、
          β-actin 一抗（稀释度分别为 1∶2 000、1∶2 000、1∶1 000、         间依赖趋势，且对 MCF-7 细胞的抗肿瘤活性更明显，其
          1∶1 000、1∶1 000）在 4 ℃下孵育过夜；采用 TBST 洗涤 3            中 F2 对 MCF-7 细胞的 IC50最小（作用 48 h），为（9.67±
          次，加入相应二抗（稀释度为1∶5 000）在室温下孵育3 h。                    1.27） μmol/L。结果见表1。
          采用ECL试剂对蛋白曝光成像，采用凝胶图像分析成像                          表1 各化合物对 A549、MCF-7 细胞的 IC50比较（x±s，
          系统进行分析，以目的蛋白与磷酸化蛋白的灰度值比值                                n＝4，μmol/L）
          表示目的蛋白的磷酸化水平，以考察F1、F2和F3对细胞                         化合物            A549细胞             MCF-7细胞
          中其对应第一核心蛋白表达的影响。另外，采用 F1、F2                                     24 h      48 h     24 h      48 h
                                                              F1        25.57±1.34 a  16.74±0.56 b  20.80±2.20 b  16.61±2.98 b
          和F3（8 μmol/L，浓度根据预实验结果设置）处理MCF-7                    F2        62.19±11.98  28.97±1.89 a  18.82±1.33 b  9.67±1.27 b
                                 3
                          3
          细胞（密度为3×10 ～4×10 个/mL）24 h，另设不加药物                   F3        23.52±2.07 a  12.80±0.41 b  23.22±3.01 a  10.19±1.62 b
          处理的对照组，每个浓度平行3个复孔，同上述方法检测                           姜黄素       37.90±3.24  34.73±1.52  37.91±2.35  22.00±1.77
          细 胞 中 cleaved-caspase-3 的 表 达 水 平 ，以 cleaved-         a：与姜黄素比较，P ＜0.05；b：与姜黄素比较，P＜0.01。
          caspase-3与内参蛋白β-actin的灰度值比值表示cleaved-              3.3 生物信息学分析结果
          caspase-3的蛋白表达水平，以考察各化合物对凋亡下游                          将F1、F2和F3的靶点分别与乳腺癌靶点进行比对，
          蛋白的影响。                                             分别得到 124、154、127 个交集靶点（图 2）。利用 Cyto‐
          2.5 统计学方法                                          scape软件建立PPI网络，筛选出F1、F2和F3治疗乳腺癌
              采用 GraphPad Prism 8.0 软件进行统计分析。数据              的核心靶点分别有28、33、24（去除孤立靶点）个，各化合
          以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两                        物对应的第一核心蛋白分别是EGFR、AKT、AKT。各化
          两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。                           合物与核心靶点的PPI网络图见图3。
                        乳腺癌        F1               乳腺癌        F2                乳腺癌        F3




                     16 885   124     108         16 855  154      128         16 882  127      112





                          A. F1与乳腺癌                    B. F2与乳腺癌                   C. F3与乳腺癌
                                      图2 各化合物靶点与乳腺癌靶点的交集靶点图


          中国药房  2025年第36卷第5期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5    · 565 ·
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