Page 64 - 《中国药房》2025年5期

容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照
品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备
取皂角刺药材，润透，切厚片，干燥，粉碎，过三号
筛；取粉末约 0.6 g，置于具塞锥形瓶中，加入 50% 甲醇
25 mL，称定质量；加热回流40 min，冷却，以50%甲醇补
足减失的质量，摇匀，静置，过滤，即得。
2.1.3 色谱条件及方法学考察
采 用 Kromasil C18 色 谱 柱（250 mm×4.6 mm，5
μm），检测波长为254 nm（检测原儿茶酸和香草酸）、360
nm（检测异东莨菪内酯、滨蒿内酯、异牡荆素、黄颜木素、
花旗松素、漆黄素、槲皮素和山柰酚）、210 nm（检测刺囊
酸、白桦脂酸、β-谷甾醇和豆甾醇）；流动相为 0.2% 磷酸
（A）-乙腈（B）溶液，梯度洗脱（0～10 min，15.0%B；10～
18 min，15.0%B→26.0%B；18～31 min，26.0%B→48.0%B；
31～47 min，48.0%B→55.0%B；47～61 min，55.0%B→
72.0%B；61～65 min，72.0%B→15.0%B）；柱温为 30 ℃；
流速为 1.0 mL/min；进样量为 10 μL。取混合对照品溶
液和供试品溶液各适量，按上述色谱条件进样分析，结
果显示，各成分色谱峰均能达到基线分离，供试品溶液
中各成分的色谱峰位置和出峰时间与混合对照品溶液
一致（图 1）。参考 2020 年版《中国药典》（四部）9101 分
析方法验证指导原则 进行方法学考察，结果显示，原
[10]
儿茶酸、香草酸、异东莨菪内酯、滨蒿内酯、异牡荆素、黄
颜木素、花旗松素、漆黄素、槲皮素、山柰酚、刺囊酸、白
桦脂酸、β-谷甾醇、豆甾醇的质量浓度分别在 1.55～
77.50、0.71～35.50、0.28～14.00、0.96～48.00、1.77～
88.50、0.09～4.50、4.65～232.50、1.49～74.50、0.37～
18.50、1.18～59.00、7.35～367.50、3.58～179.00、0.49～
24.50、0.21～10.50 μg/mL 范围内线性关系良好（r 均大
于0.999）；精密度试验（n＝6）、重复性试验（n＝6）、稳定
性试验（24 h，n＝7）的 RSD 均小于 2.00%；平均加样回
收率分别为 98.68%、97.95%、97.01%、99.28%、99.02%、
97.26%、100.03%、99.29%、96.99%、98.58%、100.09%、
100.13%、98.47%、97.57%，RSD 均小于 2.00%（n＝9），表
明上述结果均符合 2020 年版《中国药典》相关指导原则
要求。
2.1.4 相对校正因子的计算及重复性考察
量取“2.1.1”项下混合对照品贮备液适量，分别置于
6个不同的容量瓶中，用50%甲醇稀释4、10、20、40、100
和 200 倍制成系列溶液，按“2.1.3”项下色谱条件进样分
析，记录峰面积，再按下述公式计算相对校正因子
[5，11]
（f） ：f＝（ρs×Ai ）/（ρi×As ），式中ρ和A分别表示质量浓
度和峰面积，i和s分别表示内参物和其他待测成分。本
研究以香草酸为内参物，计算原儿茶酸的ƒ值；以花旗松
素为内参物，计算异东莨菪内酯、滨蒿内酯、异牡荆素、
黄颜木素、漆黄素、槲皮素和山柰酚的ƒ值；以β-谷甾醇
· 570 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 5
350
300
250
200
mAU 150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
t/min
A.混合对照品溶液
350
300
250
mAU 200
150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
t/min
B.供试品溶液
1：原儿茶酸；2：香草酸；3：异东莨菪内酯；4：滨蒿内酯；5：异牡荆
素；6：黄颜木素；7：花旗松素；8：漆黄素；9：槲皮素；10：山柰酚；11：刺
囊酸；12：白桦脂酸；13：β-谷甾醇；14：豆甾醇。
图1 专属性考察结果
为内参物，计算刺囊酸、白桦脂酸和豆甾醇的ƒ值。结果
显示，原儿茶酸、异东莨菪内酯、滨蒿内酯、异牡荆素、黄
颜木素、漆黄素、槲皮素、山柰酚、刺囊酸、白桦脂酸和豆
甾醇的 ƒ 值分别为 0.688 1、1.035 6、1.207 8、0.722 4、
1.507 3、0.870 3、0.923 2、1.093 0、0.750 6、1.430 2 和
1.497 8。进一步考察色谱柱（Kromasil C18柱、SGE Jupiter
300 C18柱和 Alltima C18柱）、流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）、
柱温（25、30、35 ℃）对 ƒ 值的影响，结果显示，不同色谱
柱、流速和柱温对ƒ值的影响较小，RSD均小于2.00%。
2.1.5 含量测定
取30批皂角刺样品，分别按“2.1.2”项下方法制备供
试品溶液（每批制备 3 份），按“2.1.3”项下色谱条件进样
分析，采用外标法（external standard method，ESM）计算
样品中 14 种成分的含量；采用 QAMS 法，分别以香草
酸、花旗松素、β-谷甾醇为内参物，计算其他11种成分的
含量。运用 SPSS 26.0 软件中的独立样本 t 检验比较两
种方法对含量测定结果的影响。结果显示，两种方法所
测得的含量差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表2。
2.1.6 浸出物和总灰分检测
参照2020年版《中国药典》（四部）通则2201浸出物
[10]
测定法、2302 灰分测定法进行测定 。结果显示，30 批
皂角刺样品的浸出物含量分别为 8.1%、8.8%、9.2%、
10.3%、9.7%、9.1%、10.1%、8.8%、7.9%、7.4%、8.5%、
7.3%、6.9%、5.2%、6.7%、4.2%、6.1%、5.8%、6.6%、4.9%、
12.1%、11.7%、11.4%、10.9%、11.3%、10.5%、11.7%、
10.2%、12.2% 和 12.5%；总灰分含量分别为 1.3%、0.8%、
0.9%、1.1%、0.8%、0.9%、1.2%、1.4%、0.8%、0.9%、1.2%、
1.5%、1.4%、1.6%、1.7%、2.3%、2.2%、1.9%、1.8%、2.1%、
0.6%、0.5%、0.7%、0.6%、0.7%、0.9%、0.8%、0.7%、1.1%
和1.0%。
中国药房 2025年第36卷第5期