Page 58 - 《中国药房》2025年5期
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和患者易耐药、易复发以及中位生存率低等问题。近年                            科技有限公司；i160型CO2细胞孵箱、Synergy H1酶标仪
          来，从天然植物或者传统中药中寻找抗肿瘤活性单体越                            均购自美国 Bio-Tek 公司；CKX53 型倒置显微镜购自日
                                 [3]
          来越受到研究人员的关注 。据统计，1981－2019 年美                       本 Olympus 公司；5702 型低速离心机购自德国 Eppen‐
          国 FDA 批准的 247 种抗癌药物中，有 18 种来自天然产                    dorf公司。
                                     [4]
          物，有 44 种为天然产物衍生物 。因此，从天然植物或                         2 方法
          传统中药中寻找抗肿瘤活性单体对开展新药研究意义                             2.1 单羰基姜黄素类似物的合成与表征
          重大。                                                     根据羟醛缩合反应合成单羰基姜黄素类似物。将
              姜黄素是从中药姜黄中提取的一种活性单体，具有                          硫酸与氯化钠制备成的氯化氢气体通入无水冰醋酸中，
          抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗衰老等药理作用，是一种极具                           得饱和氯化氢醋酸溶液。将 4-羟基-3，5-二甲基苯甲醛
                             [5]
          潜力的中药活性单体 。研究发现，姜黄素可通过诱导                           （3.47 mmol）分别与四氢噻喃-4-酮、四氢吡喃酮、环戊酮
          肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和新生血管形成、逆                           （1.735 mmol）溶解在饱和氯化氢醋酸溶液中，室温下搅
          转耐药以及免疫调节等多种机制干预肿瘤进程                     [6―7] 。但   拌反应12 h，静置24 h后，过滤；滤渣用纯水和无水乙醇
          是姜黄素存在不稳定、生物利用度低的问题，这主要与                            先后洗涤 3 次，洗涤物经真空干燥后，分别得到化合物
          其β-二酮结构有关。相关研究发现，通过单羰基取代不                           F1、F2 和 F3，具体合成路线见图 1。配制化合物 F1、F2
          稳定的 β-二酮可以获得更稳定的单羰基姜黄素类似                            和F3的氘代二甲基亚砜（DMSO）溶液，采用核磁共振仪
            [8]
          物 。早在1992年，Markaverich等 研究发现，使用环己                   测定其氢谱；配制化合物F1、F2、F3的甲醇溶液，采用液
                                       [9]
          酮来取代 β-二酮的单羰基姜黄素类似物能够显著抑制                           相色谱-质谱联用仪测定3种化合物的分子量。
          乳腺癌MCF-7细胞的增殖。此外，通过N-取代哌啶酮、
          S-取代噻喃酮来取代β-二酮的单羰基姜黄素类似物能够                                         1
                                                                                                        F1
          进一步增强抗肿瘤活性，并显著改善类似物的药代动力                                          HCl/冰醋酸
          学参数   [10―11] 。因此，以姜黄素为母体结构合成单羰基姜
          黄素类似物是改善姜黄素不稳定性的重要手段。基于                                            1
                                                                  2         HCl/冰醋酸                     F2
          此，本研究以姜黄素 β-二酮为研究切入点，结合前期研
          究设计合成一系列新型小分子化合物，筛选其抗肿瘤活
          性并初步揭示其抗乳腺癌的作用机制，以期为进一步开                                           1
                                                                                                        F3
          发抗乳腺癌药物和研究同类型单羰基姜黄素类似物提                                           HCl/冰醋酸
          供优良的先导化合物。
                                                                    图1 单羰基姜黄素类似物的合成路线图
          1 材料
          1.1 细胞株                                             2.2 单羰基姜黄素类似物的抗肿瘤活性测定
              人乳腺癌细胞 MCF-7、人肺癌细胞 A549 分别由四                        采用RPMI 1640培养基对人乳腺癌细胞MCF-7、人
          川大学临床医学院及西南医科大学附属医院肿瘤科                              肺癌细胞 A549 进行培养（培养条件为 5%CO2、37 ℃）。
                                                                                                           3
          提供。                                                 将处于对数生长期的MCF-7、A549细胞以每孔3×10 ～
                                                                   3
          1.2 主要药品与试剂                                         4×10 个的密度接种在 96 孔板中，孵育 24 h；分别加入
              四氢噻喃-4-酮、四氢吡喃酮、环戊酮、4-羟基-3，5-二                   不同浓度（3.75、7.5、15、30、60 μmol/L，浓度根据预实验
          甲基苯甲醛（批号分别为 T121984、T107483、C108567、                结果设置）的 F1、F2、F3 和姜黄素，每个浓度平行 4 个复
          H1929182，纯度≥97%）均购自阿拉丁试剂（上海）有限                      孔；培养 24 h 或 48 h 后，向每个孔中加入 5 mg/mL MTT
          公司；冰醋酸（批号C15026336，纯度99.5%）购自成都市                    试剂，采用比色法测定各孔光密度值并计算半数抑制浓
          科隆化学品有限公司；MTT（批号ST1537，纯度98%）购                      度（half inhibitory concentration，IC50 ），以评估 F1、F2、F3
          自北京索莱宝科技有限公司；RPMI 1640 培养基、胎牛                       和姜黄素的抗肿瘤活性。IC50值越小，抗肿瘤活性越强。
          血 清（批 号 分 别 为 6124112、BS-1101-2）均 购 自 美 国           2.3 生物信息学分析
          Gibco公司；兔源蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）、磷                 采用 ChemDraw 软件分别构建化合物 F1、F2 和 F3
          酸 化 AKT（p-AKT）、表 皮 生 长 因 子 受 体（epidermal            的化学结构式以及 SMILES 结构式，利用 SwissTarget‐
          growth factor receptor，EGFR）、磷酸化EGFR（p-EGFR）、       Prediction（http：//swisstargetprediction. ch/）、PharmMap‐
          剪切型胱天蛋白酶 3（cleaved-caspase-3）、β-肌动蛋白                per（http：//www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/）数据库分别
         （β-actin）单克隆抗体（批号分别为 4691T、4060、4267T、               检索F1、F2和F3的靶点，并通过UniProt数据库（https：//
          3777、WL01992、8457）均购自美国CST公司。                       www.uniprot.org/）获得靶点基因，去除重复项后获得化
          1.3 主要仪器                                            合物F1、F2和F3的靶点信息。
              8045型液相色谱-质谱联用仪购自日本Shimadzu公                        利 用 GeneCards（https：//www. genecards. org/）、
          司；Bruker AV Ⅲ 400 型核磁共振仪购自布鲁克（北京）                   DisGeNET（https：//www.disgenet.org/）和 OMIM（https：//


          · 564 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5                               中国药房  2025年第36卷第5期
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