Page 53 - 《中国药房》2025年5期
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linked to regulation of GSK3α， p-GSK3α and PP1γ2 protein expressions.
          KEYWORDS    triptolide； pregnancy； lactation； male offspring rat； reproductive toxicity


              现代医学中，孕期和哺乳期的药物安全性一直是临                         T0023、S0001）均购自江苏亲科生物研究中心有限公司；
          床关注的重点。随着药物种类的增多和使用范围的扩                            兔 源 糖 原 合 酶 激 酶 3α（glycogen  synthase  kinase  3α，
          展，药物暴露对生殖系统及子代健康的潜在影响引起了                           GSK3α）单克隆抗体、兔源磷酸化 GSK3α（p-GSK3α）单
          广泛关注。尽管许多药物已完成针对孕期和哺乳期的                            克隆抗体、HRP 标记的山羊抗小鼠 IgG 二抗（批号分别
          毒理学评估，明确其对胎儿及新生儿的毒性作用，但仍                           为 A19060、AP0582、AS003）均购自武汉爱博泰克生物
          有大量常用药物缺乏充分的毒理学研究。已有证据表                            科技有限公司；兔源蛋白磷酸酶 1γ2（protein phospha‐
          明，妊娠期使用某些药物可能增加子代的出生缺陷及其                           tase 1γ2，PP1γ2）单克隆抗体（批号 ab134947）购自英国
          他健康风险     [1―2] 。因此，评估孕期和哺乳期用药对子代                  Abcam公司；巴氏染色试剂盒（批号G1614）购自北京索
          生长发育的影响具有重要临床意义。                                   莱宝科技有限公司。
              雷公藤甲素（triptolide，TP）是一种从雷公藤中提取                 1.3 动物
          的环氧二萜内酯化合物，具有抗白血病、调节免疫、抗                               本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，6 月龄，体重
                                 [3]
          炎、抗肿瘤等多重生物活性 ，常被当作免疫抑制剂用于                          300～450 g，共100只（雄性25只、雌性75只），购自成都
          类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肾病综合征、强直性                          达硕实验动物有限公司，动物使用许可证号为 SYXK
                                      [4]
          脊柱炎等自身免疫性疾病的治疗 。此外，大量研究证                          （川）2021-246。购入后，所有大鼠均饲养于屏障环境
          明，TP还对多种恶性肿瘤（如白血病、乳腺癌、肺癌、胰腺                        中 ，饲养环境温度为（23±3） ℃ ，相对湿度为（50±
          癌等）具有良好的抗肿瘤活性            [5―7] 。但相关研究指出，TP         10）%，12 h日/12 h夜光照循环，通风良好。实验期间大
          对心脏、肝脏、肾脏等脏器以及生殖系统均有一定的毒                           鼠均采用普通饲料喂养，自由摄食、饮水。本动物实验
          性作用，尤其对雄性生殖系统影响较大                [4，8―9] 。目前关于
                                                             已通过兰州大学第二医院实验动物福利伦理委员会审
          TP在母体孕期及哺乳期暴露对雄性子代生殖系统的发                           批（受理编号为D2022-261）。
          育是否有影响仍不明确，相关研究较为缺乏。因此，本                           2 方法
          研究旨在通过动物实验模型，观察雌性大鼠孕期及哺乳
                                                             2.1 造模、分组与给药
          期暴露于 TP 对雄性子鼠生殖系统的影响，为这一特殊                             将雌、雄大鼠分笼适应性喂养 1 周，然后按照雌雄
          时期的安全用药提供科学依据。
          1 材料                                               3∶1 的比例在每日 22：00 合笼，次日若肉眼观察到阴栓
                                                                                                  [10]
                                                             或雌性大鼠阴道涂片发现精子则视为受孕 ，记为孕期
          1.1 主要仪器
              本研究所用的主要仪器包括 SpectraMAX Plus384                的第 0 天。受孕 10 d 左右观察大鼠腹部是否有明显隆
                                                             起，若没有则视为假孕而剔除。经检查，共有68只雌鼠
          型酶标仪[美谷分子仪器（上海）有限公司]、HH-6型恒温
                                                             成功受孕。采用随机数字表法将孕鼠分为对照组（12
          水浴锅（上海力辰邦西仪器科技有限公司）、UV752N型
          分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）、BA210Digi‐                     只，灌胃生理盐水）和 T1～T4 组[分别有 12、13、14、17
                                                             只，给药剂量分别为 200、400、600、800 μg/（kg·d）]        [4，11] 。
          tal 型数码三目摄像显微镜（麦克奥迪实业集团有限公
                                                             各组大鼠每日灌胃给药/生理盐水1次，直至子鼠出生并
          司）、JT-12S 型自动组织脱水机（武汉俊杰电子有限公
          司）、H2050R 型台式高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室                       断乳，平均给药时间约为 41 d，灌胃体积均为 2 mL/只。
                                                             实验期间，对照组孕鼠无死亡和流产；TP各组孕鼠共死
          仪器开发有限公司）、5200 Multi 型荧光图像分析系统
         （上海天能科技有限公司）等。                                      亡11只、流产13只，最终32只完成妊娠。每组随机选取
          1.2 主要药品与试剂                                        3只孕鼠进行哺乳。子鼠出生后通过测量其肛门生殖器
              TP原料药（批号C14852118，纯度98%）购自上海麦                  距离（anogenital distance，AGD）判断雌雄——雄性AGD
                                                                               [12]
          克林生化科技股份有限公司；血清促性腺激素释放激素                           明显更长，雌性更短 。将雌、雄子鼠分笼饲养。每组
         （gonadotropin-releasing hormone，GnRH）、卵泡刺激素         选取3只雄性子鼠接受母乳喂养，母乳喂养期间母鼠仍
         （follicle stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（lutei-     然用 TP 干预，断乳后以普通饲料喂养，用于后续实验。
          nizing hormone，LH）、睾酮（testosterone，T）酶联免疫吸         自子鼠出生起共喂养60 d，并每日称定其体重。
          附 测 定（ELISA）试 剂 盒（批 号 分 别 为 ZC-36486、              2.2 样本取材及处理
          ZC036477、ZC-36719、ZC-36635）均购自上海茁彩生物                   喂养 60 d 后，取雄性子鼠进行腹主动脉采血，将血
          科技有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒（批号P0009）                       样静置 1 h，然后以 3 000 r/min 离心 10 min，收集血清并
          购自上海碧云天生物技术股份有限公司；鼠源β-微管蛋                          置于－80 ℃冰箱中保存备用。采血后用 50 mg/kg戊巴
          白（β-tubulin）单克隆抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记                   比妥钠麻醉子鼠后处死，取睾丸、附睾、精囊腺并称定质
          的 山 羊 抗 兔 免 疫 球 蛋 白 G（IgG）二 抗（批 号 分 别 为            量，然后将睾丸和附睾置于4%多聚甲醛中固定24 h。


          中国药房  2025年第36卷第5期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5    · 559 ·
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