Page 48 - 《中国药房》2025年5期
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          2.3 肝指数计算和生化指标检测                                    且 P＜0.05 。将差异代谢物通过京都基因与基因组
              根据肝脏质量和小鼠体重，计算小鼠肝指数[肝指                          百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，
          数（%）＝肝脏质量（g）/体重（g）×100%]。取小鼠血清样                     KEGG）数据库进行代谢通路注释，获得相关代谢通路。
          品，根据相应试剂盒说明书方法操作，检测血清中ALT、                          2.6 统计学方法

          AST、LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平。                             采用SPSS Statistics 25软件进行统计分析。满足正
          2.4 肝组织病理学观察                                        态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素
              取“2.2”项下 4% 多聚甲醛固定的肝组织，经脱水、                     方差分析，方差齐性时组间两两比较采用LSD-t检验，方
          石蜡包埋、切片后，进行 HE 染色，然后在光学显微镜下
                                                              差不齐时组间两两比较则采用 Tamhane’s T2 检验。检
          观察小鼠肝组织病理学形态变化。
                                                              验水准α＝0.05。
          2.5 血清代谢组学分析
                                                              3 结果
          2.5.1 样品制备
                                                              3.1 SSC对ALI小鼠肝指数和肝功能的影响
              根据血清指标和病理切片分析结果，取“2.2”项下冻
                                                                  与空白组比较，模型组小鼠肝指数和血清中 ALT、
          存的空白组、模型组、SSC-H 组小鼠血清，常规解冻后，
                                                              AST、LDH 水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，
          分别吸取 80 μL 置于 2 mL 离心管中，加入 240 μL 提取
                                                              阳性对照药组、SSC-H 组小鼠肝指数和血清中 ALT、
          液[V（甲醇）∶V（乙腈）＝1∶1]充分涡旋提取；使用预冷的
                                                              AST、LDH水平均显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
          离心机，在 4 ℃下以 13 000 r/min 离心 10 min（下同），取
                                                              表1 各组小鼠肝指数和血清中肝功能指标测定结果
          上清液移至新的离心管中，以氮气吹干；再加入 100 μL
                                                                  （x±s，n＝8）
          复溶液[V（乙腈）∶V（水）＝1∶1]涡旋复溶，离心，每管吸
                                                              组别         肝指数/%    ALT/（U/L）  AST/（U/L）  LDH/（U/L）
          取70 μL上清液至进样小瓶，作为待测样品溶液。同时                          空白组        3.97±0.36  16.82±5.60  25.94±7.71  3 718.62±335.68
          分别吸取各样品 20 μL 至同一离心管中，涡旋混匀，离                        模型组        4.69±0.32 a  250.65±30.73 a  120.92±1.83 a  5 705.76±221.43 a
                                                              阳性对照药组     4.23±0.38 b  211.42±28.08 b  95.54±17.71 b  5 320.01±345.02 b
          心，取上清液至进样小瓶中作为质控（quality control，                   SSC-L组     4.47±0.20  223.01±29.28  102.02±20.66  5 591.05±222.17
          QC）样本溶液，待上机检测。                                      SSC-H组     4.23±0.35 b  171.64±67.22 b  82.64±30.54 b  5 018.11±574.19 b
                                                                 a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05。
          2.5.2 检测条件
                                                              3.2 SSC对ALI小鼠炎症因子水平的影响
              采用 LC-MS 法进行测定。将各组样品随机排序，
          每 6 个样品插入 1 个 QC 样本进样检测。超高效液相色                          与空白组比较，模型组小鼠血清中 IL-6、IL-1β、
          谱系统的检测条件为：采用 Waters ACQUITY UPLC                    TNF-α 水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，阳性
          HSS  T3 色 谱 柱（100  mm×2.1  mm，1.8  μm），以 95%        对照药组、SSC-H组小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平
          水 -5% 乙 腈（含 0.1% 甲 酸）为 流 动 相 A、47.5% 乙              均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表2。
          腈-47.5% 异丙醇-5% 水（含 0.1% 甲酸）为流动相 B 进行                表2 各组小鼠血清中炎症因子水平测定结果（x±s，
          等度洗脱，进样量为3 μL，柱温为40 ℃。质谱系统的检                             n＝8，pg/mL）
                                                              组别              IL-6        IL-1β       TNF-α
          测条件为：采用热喷雾离子源，在正、负离子扫描模式下
                                                              空白组           28.76±9.18  199.54±44.20  3.57±1.18
          检测；离子源电压为2 800 V；鞘气压力为50 Arb；辅助气                    模型组           296.30±87.63 a  309.42±4.58 a  10.49±3.93 a
          压 力 为 15 Arb；毛 细 管 温 度 为 350  ℃ ；加 热 温 度 为          阳性对照药组        163.17±58.33 b  204.98±56.03 b  5.82±1.36 c
                                                              SSC-L组        214.34±74.00  283.50±64.99  6.95±1.94
          400 ℃；分辨率为 60 000；质谱扫描范围为 m/z 70～                   SSC-H组        165.92±49.40 b  250.34±51.63 c  4.38±2.03 b
          1 050。                                                 a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组
          2.5.3 数据分析                                          比较，P＜0.05。
                                                              3.3 SSC对ALI小鼠肝组织病理学的影响
              将 LC-MS 检测的原始数据导入代谢组学处理软件
          Progenesis QI进行数据处理，然后进行主成分分析（prin‐                     空白组小鼠肝细胞排列紧密，无坏死和炎症细胞浸
          cipal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘判别             润。模型组小鼠可见较多肝细胞水肿、坏死及空泡变
          分析（orthogonal partial least squares discriminant analy‐  性，胞浆疏松淡染，胞核固缩深染或碎裂溶解，并存在炎
          sis，OPLS-DA），并绘制火山图。根据 OPLS-DA 模型得                  症细胞浸润。与模型组比较，各给药组小鼠肝组织病理
          到的变量权重值（variable importance in the projection，      学形态均有不同程度缓解，肝细胞坏死和空泡减少，可
          VIP）值和 P 值来确定差异代谢物，判断标准为 VIP＞1                      见少量炎症细胞浸润。结果见图1。


          · 554 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5                               中国药房  2025年第36卷第5期
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