Page 32 - 《中国药房》2025年4期
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2.9 大鼠肝组织中 α-SMA 及 TNF-α/NF-κB 信号通路 表2 各组大鼠血清中炎症因子指标水平比较(x±s,
相关蛋白表达测定 n=6,ng/L)
采用Western blot法测定。取“2.2”项下冻存的大鼠 组别 TNF-α IL-17 IL-1β IL-6
对照组 106.17±16.18 11.08±1.18 23.90±2.12 76.55±8.08
肝组织(每组选3只大鼠的肝组织),提取组织中总蛋白, 模型组 428.67±32.81 a 31.24±1.96 a 79.56±4.52 a 159.09±10.98 a
采用 BCA 法测定总蛋白浓度。将蛋白变性后,取蛋白 水飞蓟宾组 261.98±21.89 b 19.46±1.50 b 47.84±3.73 b 115.27±7.43 b
地锦草低剂量组 349.65±19.27 b 25.55±1.53 b 60.73±4.88 b 129.38±8.15 b
40 μg 上样进行电泳(恒压 180 V,电泳时间 40 min),转 地锦草中剂量组 246.70±24.51 b 20.91±1.50 b 46.35±3.17 b 117.17±9.22 b
膜 13 min 至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。电转移后,用 地锦草高剂量组 169.44±16.32 b 14.97±1.37 b 34.04±3.84 b 92.49±9.62 b
含 5% 脱脂奶粉的 TBST(磷酸化蛋白用 1%BSA)浸泡 a:与对照组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01。
表3 各组大鼠血清中肝功能指标及 HYP 水平比较
PVDF 膜,室温摇床封闭 2 h;加入 α-SMA、TNF-α、NF-
(x±s,n=6)
κB p65、p-NF-κB p65、IκBα、GAPDH 一抗(稀释比例分
组别 ALT/(U/L) AST/(U/L) HYP/(μg/mL)
别 为 1∶30 000、1∶1 000、1∶ 5 000、1∶1 000、1∶10 000、 对照组 33.25±4.10 84.73±7.04 11.89±2.11
1∶10 000),于 4 ℃孵育过夜;洗膜后,加入相应二抗(稀 模型组 144.08±17.04 a 257.89±17.38 a 40.66±3.62 a
水飞蓟宾组 84.42±9.27 b 165.40±13.76 b 21.41±2.49 b
释比例为 1∶10 000),室温孵育 2 h。洗膜后进行曝光显 地锦草低剂量组 121.37±11.72 c 210.20±15.01 b 27.11±2.77 b
色,利用Image Pro Plus 6.0软件分析条带灰度值。以目 地锦草中剂量组 86.78±7.52 b 156.66±12.80 b 19.40±1.90 b
地锦草高剂量组 55.08±8.85 b 127.32±13.22 b 14.72±1.72 b
标蛋白与内参蛋白(GAPDH)条带灰度值的比值表示目
a:与对照组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01;c:与模型组
标蛋白的表达水平,以 p-NF-κB p65 与 NF-κB p65 灰度 比较,P<0.05。
值比值表示NF-κB p65蛋白的磷酸化水平。 3.4 地锦草对HF大鼠肝组织病理的影响
2.10 统计学方法 3.4.1 HE染色情况
使用SPSS 29.0软件对数据进行统计分析。符合正 对照组大鼠肝组织结构完整,肝细胞排列不规则,
态分布的定量资料以x±s表示,多组间比较采用单因素 未见明显结缔组织增生,间质内可见零散炎症细胞浸
方差分析,方差齐性时组间两两比较采用LSD-t检验,方 润。与对照组比较,模型组大鼠肝细胞排列更不规则,
差不齐性时组间两两比较采用Tamhane’s T2检验;不符 肝细胞水肿伴明显胞浆疏松化,肝细胞实质内有少量空
合正态分布的定量资料以 M(P25,P75 )表示,组间比较采 泡样变性,汇管区可见大量结缔组织增生,间质内可见
用Kruskal-Wallis H检验。检验水准α=0.05。 少量炎症细胞浸润。与模型组比较,各给药组大鼠肝组
3 结果 织在炎症细胞浸润、肝细胞水肿等方面均有不同程度改
3.1 地锦草对HF大鼠肝指数的影响 善。结果见图1。
对照组、模型组、水飞蓟宾组和地锦草低、中、高剂
量 组 大 鼠 的 肝 指 数 分 别 为(3.18±0.20)% 、(4.07±
0.17)%、(3.47±0.14)%、(3.59±0.21)%、(3.36±0.06)%、
(3.30±0.14)%。与对照组比较,模型组大鼠的肝指数
A.对照组 B.模型组 C.水飞蓟宾组
显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠的肝
指数均显著降低(P<0.01)。
3.2 地锦草对HF大鼠血清中炎症因子水平的影响
与对照组比较,模型组大鼠血清中 TNF-α、IL-17、
D.地锦草低剂量组 E.地锦草中剂量组 F.地锦草高剂量组
IL-1β、IL-6水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,
蓝色箭头:结缔组织增生;黑色箭头:肝细胞水肿;绿色箭头:肝细
各给药组大鼠血清中上述指标水平均显著降低(P< 胞空泡样变性;黄色箭头:炎症细胞浸润。
0.01)。结果见表2。 图1 各组大鼠肝组织HE染色显微图
3.3 地锦草对 HF 大鼠血清中肝功能指标及 HYP 水平 3.4.2 Masson染色情况
的影响 对照组大鼠肝组织未见结缔组织增生,可见少量蓝
与对照组比较,模型组大鼠血清中 ALT、AST、HYP 色胶原纤维。模型组大鼠肝组织蓝色胶原纤维明显增
水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组 多,纤维间隔变粗。与模型组比较,各给药组大鼠肝组
大鼠血清中上述指标水平均显著降低(P<0.05 或 P< 织蓝色胶原纤维明显变细,纤维间隔变窄。与对照组
0.01)。结果见表3。 [ (0.06±0.01)%]比较,模型组大鼠阳性染色百分比
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