Page 79 - 《中国药房》2025年3期

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上皮化等过程 。皮肤创面愈合能够使皮肤保持完整 VEGFA）、SHH、血管内皮生长因子受体2（vascular endo‐
性，然而在感染、过度炎症、严重缺血甚至部分疾病的影 thelial growth factor receptor-2，VEGFR-2）、神经胶质瘤
响下，创面愈合的过程受到干扰，使得愈合时间明显延 相关癌基因同源蛋白 1（glioma-associated oncogene ho‐
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长，严重影响了患者的身心健康 。研究发现，促进伤口 molog-1，GLI1）、GAPDH一抗和辣根过氧化物酶标记的
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的血管生成是加速皮肤创面愈合的有效策略之一 。常 羊抗兔二抗（批号分别为 ab214424、ab308225、ab11939、
见的促进伤口血管生成的药物有血管内皮生长因子类 ab273018、ab181602、ab6721）均购自美国Abcam公司。
药物（如贝伐珠单抗、阿柏西普等）、血管生成素类药物 1.3 实验动物
（如马西替坦、利奥西呱）、前列环素类药物（如前列地 本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，共 72 只，体重
尔、依前列醇）等，但这些药物会导致高血压、出血、血栓 200～250 g，雄性，7～8周龄，由湖北贝恩特生物科技有
等副作用。因此，开发新的安全有效的药物以促进皮肤 限公司提供[动物生产许可证号为 SCXK（鄂）2021-
创面愈合和血管生成，已成为临床研究的热点和重点。 0027]。实验前所有大鼠在温度 23～25 ℃、相对湿度
蛇床子素（osthole，OST）是提取自中药蛇床子的一 40%～60% 的动物房中分笼饲养，自由饮水、摄食，适应
种天然化合物，具有抗炎、抗过敏、抗肿瘤、保护肝脏、保 性饲养7 d后用于实验。本研究的动物实验方案已通过
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护神经、保护骨关节、改善骨质、改善免疫功能等作用 。 武汉华联科生物技术有限公司动物伦理委员会的审核
已有研究发现，OST能减轻皮肤炎症、修复皮肤屏障，在
（伦理号为HLK-20220719）。
组胺诱导的人角质形成细胞和成纤维细胞炎症过程中， 2 方法
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改善了细胞迁移和细胞屏障功能 。还有研究发现，
2.1 大鼠全层皮肤缺损伤口模型的构建
OST可促进血管生成，且其衍生物能够加快皮肤伤口愈
参考文献方法，构建大鼠全层皮肤缺损伤口模
合 [6―7] 。超音刺猬（sonic hedgehog，SHH）信号通路与胚
型 [9―10] 。将60只大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠（45 mg/kg）
胎发育、细胞自我更新和干细胞群维持密切相关，其被
麻醉，背部脱毛、消毒，备皮面积为 2 cm 。大鼠固定后
2
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激活能够促进皮肤创面愈合和血管形成 。基于此，本
在背部脊柱一侧标记一个圆形切口，切口平行于脊柱，
研究拟建立全层皮肤缺损伤口模型大鼠，从SHH信号通
沿标记线切除全层皮肤，深至筋膜层，形成创面。次日，
路角度出发，研究OST对模型大鼠皮肤血管生成和创面
肉眼可见创面少许渗血，且无感染，则表明造模成功。
愈合的影响及机制，以期为OST的临床应用提供参考。
2.2 动物分组与给药
1 材料
本研究共造模成功60只大鼠，采用随机数字表法将
1.1 主要仪器
其分为模型组（即 Model 组），低、中、高剂量 OST 组（即
本研究所用主要仪器包括 RX50 型光学显微镜[舜
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OST-L、OST-M、OST-H 组，20、30、40 mg/kg OST ）和高
宇光学科技（集团）有限公司]，AMR-100型酶标仪（杭州
剂量 OST+SHH 抑制剂环巴胺组（即 OST-H+环巴胺组，
奥盛仪器有限公司），CFX Duet 型实时荧光定量聚合酶
40 mg/kg OST+10 mg/kg 环巴胺 ），每组 12 只；另选取
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链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase
12只大鼠为对照组（仅剃除皮肤毛发，不造模）。OST-L
chain reaction，RT-qPCR）仪（美国Bio-Rad公司），500-151-
组、OST-M 组、OST-H 组大鼠分别腹腔注射 20、30、40
30型游标卡尺（苏州天音腾达机电工程有限公司），Tanon
mg/kg OST；OST-H+环巴胺组在腹腔注射40 mg/kg OST
5200型凝胶图像处理系统（上海天能科技有限公司）。
1.2 主要药品与试剂 前 30 min，腹腔注射 10 mg/kg 环巴胺；每天给药 1 次，给
OST 对照品（批号 S2337，纯度 99.99%）购自美国 药体积均为 10 mL/kg，连续 14 d。Model 组和对照组大
Selleck Chemical 公司；SHH 抑制剂环巴胺对照品（批号 鼠腹腔注射等量生理盐水。
C4116，纯度≥98%）购自美国 Sigma 公司；苏木素-伊红 2.3 大鼠创面愈合率的计算
（HE）染色试剂盒、Masson 染色试剂盒（批号分别为 在给药第1、7、14天时观察大鼠创面愈合情况，用游
D006-1-4、D026-1-1）均购自南京建成生物科技有限公 标卡尺测量创面直径，并进行拍照；采用Image J软件计
司；血管生成素 1（angiopoietin-1，Ang-1）酶联免疫吸附 算大鼠的创面愈合率，创面愈合率＝（用药前创面面
测定（ELISA）试剂盒（批号 SEKR-0055）购自北京索莱 积－用药后创面面积）/用药前创面面积×100%。
宝科技有限公司；碱性成纤维细胞生长因子（basic fibro‐ 2.4 大鼠创面组织的病理学形态观察
blast growth factor，bFGF）ELISA 试剂盒（批号 D731030- 采用 HE 染色法观察。末次给药后，所有大鼠脱颈
0096）购自生工生物工程（上海）股份有限公司；BCA 蛋 处死，每组随机选取6只大鼠，切除创面组织，固定于多
白 定 量 试 剂 盒 、Trizol 试 剂（批 号 分 别 为 FD2001、 聚甲醛中，组织脱水后制成石蜡切片，一部分切片行HE
FD8872）均购自杭州弗德生物科技有限公司；兔源血管 染色，另一部分备用。取HE染色的切片，于光学显微镜
内皮生长因子 A（vascular endothelial growth factor A， 下观察创面组织的病理学变化。

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