Page 83 - 《中国药房》2025年2期

表2 各组细胞中 AMPK/mTOR/ULK1 信号通路相关
Caspase-3 35 kDa
蛋白表达比较（x±s，n＝6）
β-actin 42 kDa 组别 p-AMPK/AMPK p-ULK1/ULK1 p-mTOR/mTOR
LC3-Ⅰ 16 kDa 对照组 0.91±0.09 0.86±0.08 0.23±0.02
LC3-Ⅱ 14 kDa PD组 0.25±0.02 a 0.20±0.02 a 0.89±0.09 a
NEF-L组 0.41±0.04 b 0.37±0.03 b 0.73±0.06 b
p62 62 kDa
NEF-M组 0.63±0.05 bc 0.54±0.05 bc 0.51±0.05 bc
NEF-H组 0.82±0.07 bcd 0.76±0.06 bcd 0.32±0.03 bcd
Beclin-1 52 kDa
NEF-H+Compound C组 0.56±0.05 e 0.42±0.04 e 0.60±0.05 e
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与PD组比较，P＜0.05；c：与NEF-L组比
β-actin 42 kDa
较，P＜0.05；d：与NEF-M组比较，P＜0.05；e：与NEF-H组比较，P＜0.05。
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
Ⅰ：对照组；Ⅱ：PD组；Ⅲ：NEF-L组；Ⅳ：NEF-M组；Ⅴ：NEF-H组； 4 讨论
Ⅵ：NEF-H+Compound C组。 PD 发病率高，影响我国近 2% 老年人的生活质
图4 各组细胞中凋亡、自噬相关蛋白表达的电泳图 量 。研究指出，PD的神经病理学特征是黑质中多巴胺
[11]
表1 各组细胞中凋亡、自噬相关蛋白表达比较（x±s， 能神经元的进行性丢失，伴有路易体和神经突的积累，
n＝6） 其主要成分是聚集的 α-突触核蛋白（由 SNCA 基因编
[11]
组别 Caspase-3/β-actin LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ p62/β-actin Beclin-1/β-actin 码），从而导致黑质纹状体神经变性 。现有治疗方法
对照组 0.26±0.02 1.02±0.13 0.22±0.02 1.14±0.17 可以缓解 PD 患者的早期症状，但不能阻止疾病进展或
PD组 1.08±0.13 a 0.26±0.02 a 0.97±0.09 a 0.31±0.02 a 逆转现有病情 。因此，寻找新的药物对于 PD 的临床
[11]
NEF-L组 0.87±0.08 b 0.39±0.03 b 0.83±0.07 b 0.48±0.03 b 治疗至关重要。
NEF-M组 0.65±0.06 bc 0.62±0.05 bc 0.64±0.05 bc 0.70±0.06 bc
NEF-H组 0.40±0.04 bcd 0.85±0.07 bcd 0.45±0.04 bcd 0.91±0.08 bcd 莲子心是莲种子的绿色胚，是一种可食用的中草
NEF-H+Compound C组 0.72±0.06 e 0.52±0.04 e 0.71±0.05 e 0.53±0.04 e 药，具有多种营养和药用价值，可用于治疗神经退行性
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与PD组比较，P＜0.05；c：与NEF-L组比 疾病、失眠、高烧和心血管疾病 。NEF 是莲子心所含
[12]
较，P＜0.05；d：与NEF-M组比较，P＜0.05；e：与NEF-H组比较，P＜0.05。
的主要双苄基异喹啉生物碱成分，具有抗心律失常、抗
3.8 细胞中AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关蛋白表
高血压、抗癌、抗氧化、抗炎、治疗神经退行性疾病等作
达比较 用 。Wu 等 研究表明，NEF 可显著提高 SH-SY5Y 细
[4]
[13]
与对照组比较，PD 组细胞中 AMPK、ULK1 蛋白的 胞的活力并降低其活性氧水平，抑制β淀粉样蛋白和tau
磷酸化水平均显著降低，mTOR蛋白的磷酸化水平显著 蛋白诱导的毒性，并增强线虫的抗应激能力，具有神经
升高（P＜0.05）；与 PD 组比较，NEF-L、NEF-M、NEF-H 保护作用。自噬是一种高度保守的分解代谢过程，可将
组细胞中AMPK、ULK1蛋白的磷酸化水平均显著升高， 异常蛋白和细胞器隔离到自噬体中，并将其递送到溶酶
mTOR蛋白的磷酸化水平均显著降低，且呈浓度依赖性 体进行降解和回收，对细胞稳态调节、压力适应和生存
（P＜0.05）；与NEF-H组比较，NEF-H+Compound C组细 至关重要 。一项缺血性脑损伤研究指出，NEF可显著
[14]
胞中 AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平均显著降低， 抑制 LC3-Ⅱ、Beclin-1 和 p62 等自噬相关蛋白表达的上
mTOR 蛋白的磷酸化水平显著升高（P＜0.05）。结果见 调，并阻止自噬体的形成 。本研究通过构建 PD 细胞
[15]
图5、表2。 模型发现，细胞出现线粒体损伤并发生凋亡，自噬体明
+
显增加，说明经MPP 诱导后细胞发生了自噬和凋亡；经
p-AMPK 63 kDa
2.5、5.0、10.0 μmol/L的NEF干预后，PD细胞中自噬体增
AMPK 63 kDa 多，自噬加重，凋亡率显著降低，Caspase-3、p62蛋白的表
达显著下调，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 蛋白的表达显著
p-ULK1 113 kDa
升高或上调，线粒体损伤有所改善，且上述作用具有浓
ULK1 113 kDa 度依赖性，提示NEF能够促进细胞线粒体自噬进而缓解
细胞凋亡。这一结果与文献[15]有所不同，可能与所用
p-mTOR 289 kDa
模型不同、所涉疾病发生机制不同有关。然而，无论是
mTOR 289 kDa 促进自噬还是抑制自噬，两项研究均证明了NEF对缺血
性脑损伤和PD有一定的改善作用。
β-actin 42 kDa
AMPK是能量代谢、细胞生长和自噬的重要调节因
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ [16]
Ⅰ：对照组；Ⅱ：PD组；Ⅲ：NEF-L组；Ⅳ：NEF-M组；Ⅴ：NEF-H组； 子 。AMPK作为关键的能量传感器，可通过磷酸化来
Ⅵ：NEF-H+Compound C组。 激活 ULK1 蛋白，以维持细胞能量稳态并促进自噬，而
图5 各组细胞中 AMPK/mTOR/ULK1 信号通路相关 mTOR是细胞生长的中枢调节剂和自噬的关键制动器，
[16]
蛋白表达的电泳图 具有抑制 ULK1 激活的能力 。研究报道，AMPK 被激

中国药房 2025年第36卷第2期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 2 · 201 ·