Page 46 - 《中国药房》2025年2期

尾静脉注射 Compound C 0.2 mg/（kg·d）（以生理盐水为
[9]
溶剂） ；Control组和UC组大鼠灌胃并同时尾静脉注射
等体积生理盐水；每天1次，连续14 d。
2.2 大鼠体重测量及DAI评分
末次给药结束后，称定各组大鼠体重，并从体重、大
便性状及便血情况3个方面进行DAI评分，具体标准如
下：三者均正常，记0分；体重较造模前下降1%～5%，大
便呈半糊状，且趋于隐血阳性，记1分；体重较造模前下
降 6%～10%，大便呈糊状，且呈隐血阳性，记 2 分；体重
较造模前下降11%～15%，大便介于糊状与稀便之间，便
血介于隐血阳性与肉眼可见之间，记3分；体重较造模前
[10]
下降＞15%，便稀，且便血肉眼可见，记4分 。
2.3 大鼠血清中炎症因子水平检测
DAI 评分结束后，取各组大鼠腹主动脉血，静置后
离心，取上层血清，严格按照相应试剂盒说明书方法操
作，采用 ELISA 法以酶标仪检测其中 IL-18、IL-1β、IL-6
水平。
2.4 大鼠结肠黏膜损伤评估
取血后，将各组大鼠处死，取其距肛门 8 cm 处的结
肠，观察其形态并进行结肠黏膜损伤指数（colonic muco‐
sal damage index，CMDI）评分。具体标准如下：结肠黏
膜正常，记 0 分；结肠黏膜水肿、充血但无溃疡，记 1 分；
结肠黏膜出现糜烂，记2分；结肠黏膜出现单个直径＜1
cm 的溃疡，记 3 分；结肠黏膜出现 2 个及以上直径＜1
cm 的溃疡，记 4 分；结肠黏膜出现直径＞1 cm 的溃疡，
[11]
记5分 。
2.5 大鼠结肠长度测量及结肠组织病理观察
取“2.4”项下各组大鼠结肠，从每组中任选6只大鼠
测量其结肠长度；随后，取结肠组织适量，经固定、脱水、
浸蜡、包埋后切片，进行 HE 染色，使用显微镜观察结肠
组织的病理改变情况。
2.6 大鼠结肠组织中细胞焦亡相关蛋白表达检测
采用免疫组化法检测。取“2.5”项下各组大鼠的结
肠组织石蜡切片，常规处理后进行抗原修复、血清封闭；
加入 caspase-1、GSDMD 一抗（稀释比例均为 1∶200），于
4 ℃下孵育过夜；加入相应二抗（稀释比例为1∶200），于
37 ℃下孵育 2 h；洗膜后，加入 3，3′-二氨基联苯胺四盐
酸盐（DAB）显色；用水冲洗后，以苏木精复染；脱水后，
以中性树脂封片，置于显微镜下观察。以棕褐色为阳性
染色，采用Image软件分析阳性区域的光密度值，用以表
示caspase-1、GSDMD蛋白的表达水平。
2.7 大鼠结肠组织中 AMPK/TXNIP/NLRP3 信号通路
相关蛋白表达检测
采用 Western blot 法检测。取各组剩余 6 只大鼠的
结肠组织，研碎后与蛋白裂解液充分反应，离心后取上
清液，以BCA法定量后，于沸水浴中加热变性。取变性
蛋白适量，经电泳分离后转膜、封闭；洗膜后，加入 p-
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AMPK、AMPK、TXNIP、NLRP3、ASC、β-actin一抗（稀释
比例分别为1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、
1∶1 000），于4 ℃下孵育过夜；洗膜后，加入相应二抗（稀
释比例为1∶10 000），避光孵育2 h；洗膜后，以ECL发光
试剂显色，于凝胶成像分析系统下成像。使用 Image 软
件分析各蛋白条带的灰度值，以 β-actin 为内参，计算各
目的蛋白的表达水平，并以p-AMPK与AMPK蛋白的表
达水平比值表示AMPK蛋白的磷酸化水平。
2.8 统计学方法
采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。实验数
据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
3 结果
3.1 Asp对UC大鼠体重及DAI评分的影响
与Control组比较，UC组大鼠的体重显著降低，DAI
评分显著升高（P＜0.05）；与 UC 组比较，Asp-L、Asp-H
组大鼠的体重均显著升高，DAI 评分均显著降低（P＜
0.05），且Asp-H组上述指标的改善更明显（P＜0.05）；与
Asp-H 组比较，Asp-H+Compound C 组大鼠的体重显著
降低，DAI评分显著升高（P＜0.05）。结果见表1。
表1 各组大鼠体重及DAI评分比较（x±s，n＝12）
组别 体重/g DAI评分/分
Control组 221.53±12.45 0
UC组 163.48±9.78 a 3.58±0.26 a
Asp-L组 189.37±10.49 b 2.42±0.18 b
Asp-H组 217.64±11.56 bc 1.17±0.12 bc
Asp-H+Compound C组 180.25±10.02 d 2.50±0.19 d
a：与Control组比较，P＜0.05；b：与UC组比较，P＜0.05；c：与Asp-L
组比较，P＜0.05；d：与Asp-H组比较，P＜0.05。
3.2 Asp对UC大鼠血清中炎症因子水平的影响
与 Control 组比较，UC 组大鼠血清中 IL-18、IL-1β、
IL-6 水平均显著升高（P＜0.05）；与 UC 组比较，Asp-L、
Asp-H组大鼠血清中IL-18、IL-1β、IL-6水平均显著降低
（P＜0.05），且 Asp-H 组上述指标的改善更明显（P＜
0.05）；与 Asp-H 组比较，Asp-H+Compound C 组大鼠血
清中 IL-18、IL-1β、IL-6 水平均显著升高（P＜0.05）。结
果见表2。
表2 各组大鼠血清中炎症因子水平比较（x±s，n＝12，
pg/mL）
组别 IL-18 IL-1β IL-6
Control组 11.58±1.17 428.46±25.69 20.83±1.63
UC组 48.26±1.65 a 1 362.73±46.83 a 72.64±3.78 a
Asp-L组 31.73±1.42 b 976.22±37.51 b 51.79±2.85 b
Asp-H组 13.95±1.26 bc 597.68±28.36 bc 28.56±2.17 bc
Asp-H+Compound C组 36.42±1.51 d 1 125.47±39.84 d 57.33±3.09 d
a：与Control组比较，P＜0.05；b：与UC组比较，P＜0.05；c：与Asp-L
组比较，P＜0.05；d：与Asp-H组比较，P＜0.05。
3.3 Asp对UC大鼠CMDI评分及结肠长度的影响
与 Control 组比较，UC 组大鼠的 CMDI 评分显著升
高，结肠长度显著缩短（P＜0.05）；与UC组比较，Asp-L、
中国药房 2025年第36卷第2期