Page 45 - 《中国药房》2025年2期
P. 45

significantly  reverse  the  improvement  effect  of  high-dose  of Asp  on  the  above  indicators  in  UC  rats （P＜0.05）.  CONCLUSIONS
          Asp  can  improve  inflammatory  damage  in  colon  tissue  and  inhibit  pyroptosis  of  intestinal  epithelial  cells  in  UC  rats，  which  is
          associated with the activation of AMPK and inhibition of TXNIP/NLRP3 signaling pathway.
          KEYWORDS    asperuloside； ulcerative colitis； intestinal epithelial cell； pyroptosis； AMPK/TXNIP/NLRP3 signaling pathway


              溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种自身免            介素 18（interleukin-18，IL-18）、IL-1β、IL-6 酶联免疫吸
          疫性炎症性肠病，主要病理表现为结直肠黏膜及黏膜下                           附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为E-EL-R0567、E-EL-
          层的弥散性炎症，以及肠上皮细胞的过度焦亡和异常凋                           R0012、E-EL-R0015）均购自武汉伊莱瑞特生物科技股
          亡、坏死等，临床表现包括腹痛、腹泻、脓血便等症状 。                         份有限公司；苏木精-伊红（HE）染色液（批号 DH0006）
                                                       [1]
          其中，细胞焦亡是一种炎症性细胞死亡方式，可促进大                           购自北京雷根生物技术有限公司；兔源胱天蛋白酶 1
          量炎症细胞因子的释放，诱发炎症级联反应，从而介导                          （caspase-1）多克隆抗体（批号 abs148492）购自爱必信
                       [1]
          UC 的发生发展 。由于环境、生活方式、饮食习惯的改                        （上海）生物科技有限公司；兔源消皮素D（gasdermin D，
                                [2]
          变，UC的患病率持续上升 。目前，UC的临床治疗以免                         GSDMD）多克隆抗体（批号 FNab03670）购自武汉菲恩
          疫抑制剂、类固醇类、氨基水杨酸类、生物制剂等药物治                          生物科技有限公司；兔源磷酸化 AMPK（phosphorylated
          疗为主，虽能一定程度缓解患者的症状，但存在服药时                           AMPK，p-AMPK）、AMPK 单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为
          间长、副作用发生率高、病情易反复、感染及癌变风险高                          ab133448、ab207442）均 购 自 英 国 Abcam 公 司 ；兔 源
          等缺点，疗效有限 。UC 发病机制较复杂，了解其发病                         TXNIP、NLRP3 多克隆抗体（批号分别为 JK262438、
                         [3]
          机制、寻找特异性治疗药物是相关研究的重要方向。                            JK220143）均购自上海晶抗生物工程有限公司；兔源凋
              车叶草苷（asperuloside，Asp）是一种环烯醚萜类化                亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like pro‐
          合物，广泛分布于茜草科、杜仲科等药用植物中，具有抗                          tein  containing  a  CARD，ASC）多 克 隆 抗 体（批 号 kl-
                                            [4]
          菌、消炎、抗氧化、抗癌等多种药理活性 。研究指出，                          6741R）购自上海康朗生物科技有限公司；兔源β-肌动蛋
          Asp 可减轻小鼠炎症和氧化应激，降低疾病活动指数                          白（β-actin）多克隆抗体（批号4967）购自美国CST公司；
         （disease activity index，DAI）评分，减轻结肠组织病理损            辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批
          伤 ，进 而 改 善 葡 聚 糖 硫 酸 钠（dextran  sulfate  sodium，   号S0001）购自上海研卉生物科技有限公司。
                               [5]
          DSS）诱导的慢性结肠炎 。腺苷一磷酸活化的蛋白激                          1.3 实验动物
          酶（adenosine  monophosphate-activated  protein  kinase，  SPF 级健康成年雄性 SD 大鼠，7 周龄，购自武汉云
          AMPK）/硫 氧 还 蛋 白 互 作 蛋 白（thioredoxin-interacting    克隆动物有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（鄂）
          protein，TXNIP）/NOD 样受体蛋白 3（NOD-like receptor       2023-0021。所有大鼠均饲养于温度 22～26 ℃、相对湿
          protein 3，NLRP3）信号通路是经典的细胞焦亡相关通                    度 55%～60%、每 12 h 光暗交替的环境下，自由摄食、饮
          路。研究显示，激活 AMPK、抑制 TXNIP 介导的 NLRP3                  水。本研究方案已通过武汉云克隆动物有限公司动物
          炎症小体激活，可抑制炎症反应，改善DSS诱导的UC小                         伦理委员会审核批准（批准编号2023-12-236）。
          鼠的相关症状和病理损伤 。考虑到 AMPK/TXNIP/                       2 方法
                                  [6]
                                             [7]
          NLRP3 信号通路是 Asp 的潜在作用靶点 ，本研究拟基                     2.1 分组、造模与给药
          于该通路，初步探索 Asp 对 UC 大鼠肠上皮细胞焦亡的                          将大鼠随机分为对照组（Control 组）、模型组（UC
          影响及潜在机制，以期为UC的临床治疗提供参考。                            组）、Asp 低剂量组（Asp-L 组）、Asp 高剂量组（Asp-H
          1 材料                                               组）、Asp高剂量+AMPK抑制剂Compound C组（Asp-H+
          1.1 主要仪器                                           Compound C组），每组12只。除Control组外，其余各组
              本研究所用主要仪器包括Multiskan MK3型全自动                   大鼠按下法建立 UC 模型：大鼠禁食、不禁水 24 h，经麻
          酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、BH-2 型显        醉后固定，将直径 1.5 mm 的聚丙烯管插入肛门内约 8
          微镜（日本Olympus公司）、4200SF型凝胶成像分析系统                    cm 处，经该管向肠腔内灌入 50% 乙醇（0.25 mL）和
         （上海天能科技有限公司）等。                                      5%TNBS溶液（2 mL/kg），随后提尾倒挂约30 s。若大鼠
          1.2 主要药品与试剂                                        3 d后进食减少、懒动并出现黏液血便等症状，则表示造
                                                                   [8]
              Asp对照品（批号Y10131-YLS，纯度≥95%）购自北                 模成功 。Control 组大鼠以生理盐水代替 50% 乙醇和
          京百奥莱博科技有限公司；AMPK 抑制剂 Compound C                    5%TNBS 溶液，其余操作同上。造模成功后，Asp-L、
          的对照品（批号 C649291，纯度 98%）购自上海阿拉丁生                    Asp-H组大鼠分别灌胃Asp 35、70 mg/（kg·d）（以生理盐
                                                                            [7]
          化科技股份有限公司；2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS，批                      水为溶剂，下同） ，并同时尾静脉注射生理盐水；Asp-
          号 YBP7020）购自上海钰博生物科技有限公司；白细胞                       H+Compound C 组大鼠灌胃 Asp 70 mg/（kg·d），并同时


          中国药房  2025年第36卷第2期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 2    · 167 ·
   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50