Page 33 - 《中国药房》2024年20期

3 500
3 000
Ⅵ
2 500
2 000 Ⅴ
mAU 1 500 Ⅳ
1 000 Ⅲ
500 Ⅱ
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
0 Ⅰ
－500
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80
t/min
Ⅰ：供试品溶液；Ⅱ：混合对照品溶液；Ⅲ：缺黄芪阴性样品溶液；Ⅳ：缺灯盏细辛阴性样品溶液；Ⅴ：缺红景天阴性样品溶液；Ⅵ：空白溶剂；3：
红景天苷；4：酪醇；15：毛蕊异黄酮葡萄糖苷；16：野黄芩苷；21：毛蕊异黄酮。
图7 含量测定的专属性试验色谱图
表2 红景天苷等5个成分的回归方程和线性范围 表3 10批DBHG中红景天苷等5个成分的含量测定结
成分 回归方程 r 线性范围/（mg/mL） 果（n＝3，mg/g）
红景天苷 y＝119.74x+0.055 2 1.000 0 0.040 38～0.201 9
编号 红景天苷 酪醇 毛蕊异黄酮葡萄糖苷 毛蕊异黄酮 野黄芩苷
酪醇 y＝259.05x+0.056 6 1.000 0 0.013 45～0.067 25 S1 1.69 0.45 0.32 0.15 0.77
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 y＝593.29x-0.118 1 0.999 9 0.008 03～0.040 15 S2 1.64 0.45 0.31 0.15 0.73
野黄芩苷 y＝399.57x-0.182 4 0.999 9 0.021 48～0.107 4 S3 1.63 0.43 0.31 0.15 0.75
毛蕊异黄酮 y＝900.46x+0.023 3 1.000 0 0.003 96～0.019 78 S4 1.62 0.45 0.30 0.15 0.72
毛蕊异黄酮的平均含量分别为 1.64、0.45、0.31、0.73、 S5 1.63 0.45 0.30 0.15 0.71
S6 1.67 0.47 0.31 0.15 0.71
0.15 mg/g，RSD 分 别 为 1.06%、2.21%、1.56%、2.62%、
S7 1.65 0.46 0.31 0.14 0.71
1.80%（n＝6），表明该方法重复性良好。 S8 1.63 0.45 0.31 0.14 0.75
2.5.6 加样回收率试验 S9 1.62 0.45 0.31 0.14 0.74
S10 1.61 0.45 0.31 0.15 0.74
精密称取同一批 DBHG（编号 S2），共 9 份，每份
平均值 1.64 0.45 0.31 0.15 0.73
2.5 g，分别置于具塞锥形瓶中，分为 3 个梯度，分别按质
异黄酮葡萄糖苷、野黄芩苷、毛蕊异黄酮的峰面积适中，
量比1∶0.8、1∶1、1∶1.2加入混合对照品溶液适量，然后按
满足指纹图谱及定量分析要求。
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条
3.2 指纹图谱的建立及结果评价
件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果显
本研究结果显示，10批样品共标定25个共有峰，通
示，红景天苷、酪醇、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、野黄芩苷、毛
过比对指认出6个成分，分别为红景天苷、酪醇、芍药苷、
蕊异黄酮的平均加样回收率分别为 101.56%、100.52%、
毛蕊异黄酮葡萄糖苷、野黄芩苷、毛蕊异黄酮。在指纹
100.23%、101.94%、100.95%，RSD 分别为2.06%、1.69%、
图谱中，苦杏仁苷对照品相同保留时间处无相应的色谱
2.08%、1.32%、2.12%（n＝9）。
峰，其原因可能是含有苦杏仁苷的桃仁在方中为佐药，
2.5.7 样品含量测定
剂量小，导致 DBHG 中苦杏仁苷含量太少，没有检出。
取 10 批 DBHG，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶 野黄芩苷为君药灯盏细辛中的有效成分，其保留时间、
液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，采用 峰面积适中，峰形较好，在指纹图谱中作为参照峰。各
标准曲线法计算样品含量。每批样品测定3次，取平均 共有峰的特征性强，保留时间稳定，建立的指纹图谱方
值，结果见表3。 法重复性良好。10 批样品的相似度较高，提示 10 批
3 讨论 DBHG 的质量具有较好的一致性。化学计量学分析结
3.1 色谱条件的选择及样品前处理方法考察 果显示，CA和PCA均将10批DBHG聚为2类，表明不同
本课题组前期分别考察了不同流动相（乙腈-水、甲 批次样品间存在一定差异，推测其原因可能是原料、制
醇-水、甲醇-0.1% 磷酸、乙腈-0.1% 磷酸）、检测波长 备过程等对成品质量有影响；OPLS-DA筛选出5个影响
（190～600 nm）、溶剂（50% 甲醇、70% 甲醇、90% 甲醇） DBHG质量的差异标志物，分别为16（野黄芩苷）、12、15
对色谱峰的影响，结果显示，以乙腈-0.1%磷酸为流动相 （毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、13（芍药苷）、14号峰。
进行梯度洗脱时，所得色谱峰信息丰富，峰形、分离度良 3.3 DBHG的含量测定结果分析
好；检测波长为230 nm时，色谱峰数量最多，基线噪音较 本研究成功建立了 DBHG 中红景天苷、酪醇、毛蕊
低，信息最全；溶剂为70%甲醇时，红景天苷、酪醇、毛蕊 异黄酮葡萄糖苷、野黄芩苷、毛蕊异黄酮的含量测定方

中国药房 2024年第35卷第20期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 20 · 2475 ·