Page 31 - 《中国药房》2024年20期

30%）制成单味饮片样品，再按“2.2.2”项下方法分别制 2 000
1 800 R
成单味饮片溶液。 1 600 S10
2.2.4 阴性样品溶液的制备 1 400 S9
S8
按 DBHG 处方及“2.2.3”项下制剂工艺分别制备缺 电压/mV 1 200 S7
1 000
黄芪、缺灯盏细辛、缺红景天的阴性样品，再按“2.2.2”项 800 S6
S5
600 S4
下方法分别制成缺黄芪、缺灯盏细辛、缺红景天的阴性 400 S3
样品溶液。 200 S2
0 S1
2.3 DBHG指纹图谱研究 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80
时间/min
2.3.1 精密度试验
图1 10批样品的HPLC叠加指纹图谱和对照指纹图谱
取“2.2.2”项下供试品溶液（编号 S2），按“2.1”项下
色谱条件连续进样测定6次，以野黄芩苷（峰面积较大， 450
400
350
出峰时间居中，峰形好，与相邻色谱峰分离较好）为参照 300 16（S）
250
峰，计算得到各共有峰相对保留时间的 RSD≤0.07% mAU 200 15
150
100 3 4 13 21
（n＝6），相对峰面积的RSD≤2.65%（n＝6），表明方法精 50 0
－50
密度良好。 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80
时间/min
2.3.2 重复性试验
3：红景天苷；4：酪醇；13：芍药苷；15：毛蕊异黄酮葡萄糖苷；16
取同一批DBHG（编号S2），按“2.2.2”项下方法平行 （S）：野黄芩苷；21：毛蕊异黄酮。
制备6份供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件分别进样 图2 混合对照品溶液的HPLC图
测定6次，以野黄芩苷为参照峰，计算得到各共有峰相对 辛特有成分，3（红景天苷）、4（酪醇）、14号峰为红景天特
保留时间的 RSD≤0.20%（n＝6），相对峰面积的 RSD≤ 有成分，15（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、20、21（毛蕊异黄
2.86%（n＝6），表明方法重复性良好。 酮）、24、25号峰为黄芪特有成分，6、11、13（芍药苷）号峰
2.3.3 稳定性试验 为赤芍特有成分，1号峰为桃仁特有成分，7、23号峰为地
取“2.2.2”项下供试品溶液（编号S2），分别于室温下 龙特有成分；8 号峰为灯盏细辛、当归、川芎的共有
放置 0、3、6、9、12、18、24 h 时按“2.1”项下色谱条件进样 成分。
测定，以野黄芩苷为参照峰，计算得到各共有峰相对保 2.4 10批DBHG的化学计量学分析
留时间的 RSD≤0.19%（n＝7），相对峰面积的 RSD≤ 2.4.1 CA
2.69%（n＝7），表明 DBHG 供试品溶液在室温下放置 24 将 10 批 DBHG 的 25 个共有峰峰面积导入 SPSS 22
h内稳定性良好。 软件，选择组间聚类方法和平方欧氏距离进行CA [13―14] 。
2.3.4 指纹图谱的建立及相似度分析 结果（图 4）显示，当平均欧氏距离为 25 时，10 批样品聚
取 10 批供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测 为2类，S4～S5、S7样品为一类，其余样品为一类。
定，记录色谱图，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系 2.4.2 PCA
统（2012 版）》，以 S1 样品的色谱图为参照图谱，选择中 以 10 批 DBHG 的 25 个共有峰峰面积为变量，使用
[12]
位数法 ，设置时间窗宽度为0.1，Mark峰匹配生成对照 SPSS 22 软件进行 PCA，在“抽取”中设置特征值＞1，结
指纹图谱（R）和 10 批样品的叠加指纹图谱（切去前 5 果显示，前6个主成分的累计方差贡献率为91.748%，可
min 色谱峰的图谱见图 1）。结果显示，得到共有峰 25 概括 DBHG 指纹图谱的大部分信息。主成分因子载荷
个，经与混合对照品溶液（图2）比对后，指认出6个共有 矩阵结果显示，1、4、12～15、17、19、22 号峰对主成分 1
峰，分别为红景天苷（3号峰）、酪醇（4号峰）、芍药苷（13 贡献较大，3、7～8、16、20～21、24～25 号峰对主成分 2
号峰）、毛蕊异黄酮葡萄糖苷（15号峰）、野黄芩苷（16号 贡献较大。以 10 批样品的 25 个共有峰峰面积为变量，
峰）、毛蕊异黄酮（21 号峰）。S1～S10 样品与对照指纹 使用 SIMCA 14.1 软件绘制 PCA 得分图（图 5），结果显
图谱的相似度分别为 0.998、0.998、0.993、0.997、0.998、 示，S4～S5、S7 样品为一类，其余样品为一类，与 CA 结
0.997、0.996、0.995、0.997、0.992，提示 10 批样品的化学 果一致。
成分组成相似，质量稳定、均一。 2.4.3 OPLS-DA
2.3.5 共有峰药味归属 结合CA和PCA分析结果，10批样品可分为2组，为
取各单味饮片溶液、供试品溶液（编号 S2）、混合对 了进一步探究组间的差异性原因，将25个共有峰峰面积
照品溶液各 10 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记 导 入 SIMCA 14.1 软 件 进 行 OPLS-DA。 结 果 显 示 ，
2
2
录色谱图（图3）。通过比对分析药味归属，结果显示，2、 OPLS-DA 模型的 R X＝0.884，R Y＝1，Q ＝0.984，提示
2
5、9、10、12、16（野黄芩苷）、17、18、19、22 号峰为灯盏细 建立的模型稳定，预测力较强。以变量重要性投影
中国药房 2024年第35卷第20期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 20 · 2473 ·