Page 37 - 《中国药房》2024年20期

2.8 细胞迁移能力考察 48、72 h 的吸光度和培养 10 d 的克隆数均显著降低，细
实验方法同“2.7”项，但不包被基质胶，统计细胞迁 胞凋亡率均显著升高（P＜0.05），且呈浓度依赖性（P＜
移数。 0.05）；与 CSL 高浓度组比较，CSL 高浓度+Zn27 组细胞
2.9 细胞中ROS水平检测
培养 24、48、72 h 的吸光度和培养 10 d 的克隆数均显著
收集“2.4”项下分组干预 24 h 的细胞，制成细胞悬
升高，细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）。结果见表 1、图
5
液，以1×10 个/孔接种至6孔板中，待细胞贴壁后，用胰
1、图2。
酶消化并收集培养液，按照试剂盒说明书操作，用酶标
仪于450 nm波长处测定吸光度，通过与标准曲线比较， 表1 各组细胞增殖、克隆能力及凋亡率比较（x±s，n＝6）
计算细胞中ROS水平。 组别 增殖实验吸光度 细胞克隆数/个 细胞凋亡率/%
2.10 细胞中 FAK/MEK/ERK 信号通路及凋亡相关蛋 24 h 48 h 72 h
对照组 1.12±0.10 1.19±0.13 1.25±0.14 124.11±5.43 3.71±0.90
白检测 CSL低浓度组 0.85±0.05 a 0.91±0.06 a 0.96±0.06 a 100.02±4.75 a 27.22±1.05 a
采用免疫印迹法检测。收集“2.4”项下分组干预24 CSL中浓度组 0.57±0.04 ab 0.60±0.04 ab 0.63±0.05 ab 81.37±3.26 ab 40.63±1.19 ab
h 的细胞，制成细胞悬液，以 1×10 个/孔接种至 6 孔板 CSL高浓度组 0.22±0.02 abc 0.24±0.02 abc 0.27±0.02 abc 47.79±2.32 abc 55.75±1.53 abc
5
CSL高浓度+Zn27组 0.89±0.07 d 0.93±0.08 d 0.99±0.09 d 107.46±5.01 d 26.14±1.06 d
中，待细胞贴壁后，用胰酶消化并收集细胞，用 RIPA 液
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与CSL低浓度组比较，P＜0.05；c：与
裂解15 min，采用BCA法测定蛋白含量，加热变性蛋白。
CSL中浓度组比较，P＜0.05；d：与CSL高浓度组比较，P＜0.05。
取变性后的蛋白样品适量，电泳、转膜后，用 5% 脱脂牛
3.2 CSL对细胞侵袭、迁移能力的影响
奶封闭 2 h，加入 p-FAK（稀释比例 1∶1 000）、p-MEK（稀
与对照组比较，CSL低、中、高浓度组细胞的侵袭数
释比例 1∶1 000）、p-ERK（稀释比例 1∶1 000）、Bax（稀释
比例 1∶3 000）、Bcl-2（稀释比例 1∶2 000）、caspase-3（稀 和迁移数均显著降低（P＜0.05），且呈浓度依赖性（P＜
释比例 1∶500）、GAPDH（稀释比例 1∶2 500）抗体，于 0.05）；与 CSL 高浓度组比较，CSL 高浓度+Zn27 组细胞
4 ℃孵育过夜；洗膜，加入二抗（稀释比例1∶5 000），室温 的侵袭数和迁移数均显著增加（P＜0.05）。结果见表
孵育 1 h；用 ECL 液可视化后，使用凝胶系统成像，通过 2、图3。
Image J 软件分析，以目的蛋白与内参（GAPDH）的条带
表2 各组细胞侵袭、迁移能力和 ROS 水平比较（x±s，
灰度值比值计算目的蛋白的相对表达量。
n＝6）
2.11 统计学方法
组别 细胞侵袭数/个 细胞迁移数/个 ROS/（pg/mL）
采用SPSS 26.00软件进行分析。数据用x±s表示， 对照组 112.35±7.73 138.72±7.95 14.15±1.53
多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 CSL低浓度组 81.14±6.52 a 105.91±6.43 a 25.13±1.65 a
SNK-q检验。检验水准α＝0.05。 CSL中浓度组 56.02±4.83 ab 74.68±4.51 ab 35.62±1.72 ab
CSL高浓度组 33.41±3.17 abc 50.44±3.22 abc 44.07±1.86 abc
3 结果
CSL高浓度+Zn27组 79.17±6.45 d 109.85±6.10 d 25.69±1.69 d
3.1 CSL对细胞增殖、克隆能力及凋亡率的影响 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与CSL低浓度组比较，P＜0.05；c：与
与对照组比较，CSL 低、中、高浓度组细胞培养 24、 CSL中浓度组比较，P＜0.05；d：与CSL高浓度组比较，P＜0.05。

A.对照组 B. CSL低浓度组 C. CSL中浓度组 D. CSL高浓度组 E. CSL高浓度+Zn27组
图1 各组Huh7/Len细胞克隆情况
10 5 10 5 10 5 10 5 10 5
10 4 10 4 10 4 10 4 10 4
PI PI PI PI PI
10 3 10 3 10 3 10 3 10 3
0 0 0 0 0
－10 3 －10 3 －10 3 －10 3 －10 3
4
3
3
3
4
4
3
3
4
3
3
4
3
－10 0 10 10 10 5 －10 0 10 10 10 5 －10 0 10 10 10 5 －10 0 10 10 10 5 －10 0 10 10 10 5
3
3
Annexin V-FITC Annexin V-FITC Annexin V-FITC Annexin V-FITC Annexin Ⅴ-FITC
A.对照组 B. CSL低浓度组 C. CSL中浓度组 D. CSL高浓度组 E. CSL高浓度+Zn27组
图2 各组Huh7/Len细胞凋亡情况
中国药房 2024年第35卷第20期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 20 · 2479 ·