Page 26 - 《中国药房》2024年20期

异常增生面积＜25%，记1分；杯状细胞异常增生面积为 表1 各组大鼠 BALF 中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占
25%～＜50%，记2分；杯状细胞异常增生面积为50%～ 比比较（x±s，n＝12）
[8]
＜75%，记3分；杯状细胞异常增生面积≥75%，记4分 。 组别 细胞总数（×10）/（个/mL） 嗜酸性粒细胞数占比/%
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2.7 大鼠肺组织中MDA、SOD水平检测 对照组 26.63±1.31 0.06±0.01
哮喘组 103.44±4.68 a 4.13±0.19 a
取“2.5”项下各组大鼠右肺组织适量，加入生理盐水
金合欢素组 54.45±2.14 b 2.36±0.11 b
1 mL，匀浆，按照相应试剂盒说明书操作，采用比色法以 EX-527组 136.65±5.67 b 5.88±0.21 b
分光光度计检测肺组织匀浆中MDA、SOD水平。 金合欢素+EX-527组 75.56±3.14 c 3.66±0.14 c
2.8 大鼠肺组织中信号通路相关蛋白表达检测 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与哮喘组比较，P＜0.05；c：与金合欢
取“2.5”项下各组大鼠右肺组织适量，以 RIPA 裂解 素组比较，P＜0.05。
缓冲液提取总蛋白。所得蛋白以 BCA 法测定浓度后， （P＜0.05），而EX-527组大鼠BALF中IL-5、IL-4、TNF-α
于95 ℃下加热5 min变性。取变性蛋白适量，进行10% 水平均显著升高（P＜0.05）；与金合欢素组比较，金合欢
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并转移到聚 素+EX-527 组大鼠 BALF 中 IL-5、IL-4、TNF-α 水平均显
偏二氟乙烯膜上，以 5% 脱脂牛奶封闭；洗膜后，加入 著升高（P＜0.05）。结果见表2。
SIRT1、p-AMPK、AMPK、PGC-1α、GAPDH一抗（稀释比 表2 各组大鼠 BALF 中 IL-5、IL-4、TNF-α 水平比较
例分别为1∶5 000、1∶4 000、1∶5 000、1∶5 000、1∶5 000），孵 （x±s，n＝12，ng/mL）
育过夜；洗膜后，加入相应二抗（稀释比例为 1∶6 000）， 组别 IL-5 IL-4 TNF-α
孵育 1 h；洗膜后，使用 ECL 试剂显影后成像。采用 对照组 45.56±1.95 165.54±7.18 83.36±3.15
哮喘组 138.39±6.12 a 223.51±10.44 a 201.15±9.77 a
Image J 软件进行定量分析，分别以 SIRT1 与 GAPDH、
金合欢素组 73.36±2.95 b 183.34±7.25 b 125.56±5.44 b
PGC-1α 与 GAPDH 蛋白的条带灰度值比值作为 SIRT1、 EX-527组 165.56±6.88 b 251.65±11.14 b 237.74±10.02 b
PGC-1α蛋白的表达水平，以p-AMPK与AMPK蛋白的灰 金合欢素+EX-527组 121.83±5.02 c 206.54±9.83 c 151.52±6.34 c
度值比值作为AMPK蛋白的磷酸化水平。 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与哮喘组比较，P＜0.05；c：与金合欢
2.9 统计学方法 素组比较，P＜0.05。
使用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。数据以 3.3 金合欢素对大鼠肺组织病理形态学的影响
x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两 对照组大鼠肺组织结构正常，无明显的炎症细胞浸
两比较采用SNK-q检验。检测水准α＝0.05。 润现象；哮喘组大鼠肺组织中有大量炎症细胞浸润；与
3 结果 哮喘组比较，金合欢素组大鼠肺组织中炎症细胞浸润有
3.1 金合欢素对大鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞 所改善，而 EX-527 组大鼠肺组织中炎症细胞浸润更加
数占比的影响 严重；与金合欢素组比较，金合欢素+EX-527 组大鼠肺
与对照组比较，哮喘组大鼠 BALF 中细胞总数、嗜 组织中炎症细胞浸润加重。结果见图1。
酸性粒细胞数占比均显著升高（P＜0.05）；与哮喘组比 3.4 金合欢素对大鼠肺组织中杯状细胞异常增生的影响
较，金合欢素组大鼠 BALF 中细胞总数、嗜酸性粒细胞 与对照组[（0.10±0.03）分]比较，哮喘组大鼠肺组织
数占比均显著降低（P＜0.05），而 EX-527 组大鼠 BALF 中有大量杯状细胞异常增生，PAS评分[（2.89±0.11）分]
中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占比均显著升高（P＜ 显著升高（P＜0.05）。与哮喘组比较，金合欢素组大鼠
0.05）；与金合欢素组比较，金合欢素+EX-527 组大鼠 肺 组 织 中 杯 状 细 胞 异 常 增 生 有 所 改 善 ，PAS 评 分
BALF 中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占比均显著升高 [ （1.06±0.08）分]显著降低（P＜0.05）；而 EX-527 组大鼠
（P＜0.05）。结果见表1。 肺组织中杯状细胞异常增生现象更加严重，PAS 评分
3.2 金合欢素对大鼠BALF中炎症因子水平的影响 [ （3.62±0.08）分]显著升高（P＜0.05）。与金合欢素组比
与对照组比较，哮喘组大鼠 BALF 中 IL-5、IL-4、 较，金合欢素+EX-527组大鼠肺组织中杯状细胞异常增
TNF-α 水平均显著升高（P＜0.05）；与哮喘组比较，金合 生现象加重，PAS 评分[（1.55±0.09）分]显著升高（P＜
欢素组大鼠BALF中IL-5、IL-4、TNF-α水平均显著降低 0.05）。结果见图2。

50 μμmm
50 μμmm
50 50 50 50 μμmm 50 50 μμmm 50 50 μμmm
A.对照组 B.哮喘组 C.金合欢素组 D. EX-527组 E.金合欢素+EX-527组
→：炎症细胞浸润。
图1 各组大鼠肺组织病理形态学显微图（HE染色法）

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