Page 12 - 《中国药房》2024年20期
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肝癌是全球死亡率极高、年发病率呈上升趋势且预                          1.2 主要药品与试剂
          后差的肿瘤，采用经典疗法治疗后易出现术后并发症、                                GiP 由本课题组前期按照文献方法 从胀果甘草
                                                                                                 [8]
                          [1]
          化疗药耐药等情况 。肿瘤免疫疗法可通过增强机体固                            G. inflata Bat. 中提取所得，含量为 52.66%；通过柱层析
          有免疫和/或适应性免疫，从而提高其对肿瘤细胞的控制                           法进行纯化、精制得到 GiP-B1，含量为 100%，分子量约
                                                                      6
          和杀伤能力，其中树突状细胞（dendritic cell，DC）疫苗在                 为2.0×10  Da，具有聚鼠李糖-半乳糖醛酸主链。
                                   [2]
          肿瘤治疗中发挥了重要作用 。DC 是一类多功能且最                               重组小鼠肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，
          有效的抗原提呈细胞（antigen presenting cell，APC），具            TNF-α）（批号 061454-1）购自美国 PeproTech 公司；小鼠
          有强大的免疫活性，根据其活化成熟程度分为未成熟                             骨髓 imDC 完全培养基（批号 CM-M151A）购自武汉普
          DC（immature  DC，imDC）和 成 熟 DC（mature  DC，           诺赛生命科技有限公司；RPMI-1640 培养基、青霉素-
          mDC）；imDC 的抗原摄取加工能力虽强，但抗原提呈及                        链霉素混合液（双抗）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffer
          激活细胞毒性 T 淋巴细胞（简称“T 细胞”）能力有限，而                       saline，PBS）（批号分别为2152424、2245296、2201008）均
          mDC不仅抗原提呈能力强，还能提供T细胞激活所需的                           购自上海龙田生物科技有限公司；胎牛血清（批号
                  [3]
          所有信号 。已有研究发现，处于肿瘤环境中的mDC数                           42G5093K）购自美国 Gibco 公司；CCK-8 试剂盒（批号
          量不足及其抗原提呈功能缺陷、imDC 过多聚集会导致                          PM508）购自日本同仁化学研究所；抗小鼠的mDC表面
                               [4]
          DC疫苗达不到预期疗效 。信号转导和转录激活因子4                           标志物 CD11c、CD86、CD80、MHC-Ⅱ单克隆抗体（批号
         （signal transducer and activator of transcription-4，STAT-4）  分别为B383301、B318893、B321317、B336920）均购自美
                                                                                   +
          能诱导 imDC 成熟并增强其对 T 细胞的激活能力，而激                       国 BioLegend 公司；CD4 T 细胞磁珠分选试剂盒（批号
          活 Toll 样受体/核转录因子 κB（nuclear factor-kappa B，         130-104-454）购自德国 Miltenyi Biotec 公司；BCA 蛋白
          NF-κB）信号通路则能够上调STAT-4表达 。因此，研发                      定量试剂盒、小鼠脾淋巴细胞分离试剂盒、RIPA组织/细
                                             [5]
          促进 imDC 成熟、改善并提高 mDC 抗原提呈功能的药                       胞裂解液（批号分别为PC0020、P8860、R0010）均购自北
          物，对于提高DC疫苗作用具有重要意义。                                 京索莱宝科技有限公司；乳酸脱氢酶（lactate dehydroge‐
              多糖是新疆特色药用植物胀果甘草 Glycyrrhiza                     nase，LDH）细胞毒性检测试剂盒（批号 C0017）购自上
          inflata Batal.中具有免疫调节作用的活性成分。本课题                    海碧云天生物技术股份有限公司；小鼠 IL-12p70、干扰
          组前期研究发现，胀果甘草粗多糖（G. inflata polysac‐                 素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、IL-4、IL-10 酶联免疫吸附测
          charides，GiP）及其纯化多糖 GiP-B1 可在体外通过激活                 定实验（ELISA）试剂盒（批号分别为 EK0422、EK0375、
          Toll 样受体/NF-κB 信号通路来促进 imDC 成熟，提高白                  EK0405、EK0417）和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG
          细胞介素 12（interleukin-12，IL-12）分泌和抗原提呈功               二抗（批号BA1054）均购自武汉博士德生物工程有限公
          能，从而发挥增强免疫功能的作用 。研究发现，GiP 及                         司；细胞总RNA提取试剂盒（批号C0017）购自成都福际
                                        [6]
          GiP-B1佐助的DC疫苗对肝癌细胞H22荷瘤小鼠具有抗                        生物技术有限公司；SYBR Green Mix荧光定量试剂、反
          肿瘤作用，但其作用机制是否与 GiP、GiP-B1 调节肿瘤                      转录试剂盒（批号分别为Q111-02、R223-01）均购自南京
                                  [7]
          中DC的功能有关尚不明确 。为此，本研究探讨GiP及                          诺唯赞生物科技股份有限公司；兔抗小鼠 NF-κB p65、
          GiP-B1对荷瘤小鼠imDC促成熟的影响，并通过共培养                        STAT-4 单克隆抗体（批号分别为 ab32536、ab284408）均
          体系评价GiP及GiP-B1促成熟的荷瘤小鼠mDC以T细                        购自英国Abcam公司；兔抗小鼠IL-12受体β2（IL-12Rβ2）
          胞为介导的抗肿瘤能力以及作用机制，以期为开发胀果                            单克隆抗体（批号A10348）购自武汉爱博泰克生物科技
          甘草多糖-DC疫苗提供理论基础和实验依据。                               有限公司；兔抗小鼠磷酸化 NF-κB p65（phosphorylated
          1 材料                                                NF-κB p65，p-NF-κB p65）、磷酸化 STAT-4（phosphory‐
          1.1 主要仪器                                            lated  STAT-4，p-STAT-4）多 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为
              HERACELL 150i 型 CO2 恒温细胞培养箱、Multi‐              AF2006、AF3441）均购自江苏亲科生物研究中心有限公
          skan GO 型全波长酶标仪、NanoDrop2000/200C 型核酸               司；小鼠抗β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（批号66009-
          蛋白定量仪均购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；             1-Ig）购自武汉三鹰生物技术有限公司。
          AB135-S型电子分析天平购自瑞士Mettler Toledo公司；                 1.3 实验动物
          3-18K 型低温离心机购自德国 Sigma 公司；HH-S4 型恒                      本研究所用动物为健康 C57BL/6 雄性小鼠与昆明
          温水浴锅购自江苏金怡仪器科技有限公司；LSRFortessa                      种雌性小鼠，SPF级，6～8周龄，体重18～20 g，分别购自
          型流式细胞仪购自美国 BD 公司；0.4 μm 孔径 Transwell                新疆医科大学动物实验中心、湖南斯莱克景达实验动物
          嵌套装置购自北京兰杰柯科技有限公司；QuantStudio 6                     有限公司、北京维通利华实验动物技术有限公司，实验
          型实时定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，             动物生产许可证号分别为 SCXK（新）2018-0002、SCXK
          PCR）系统购自美国ABI公司；DYCZ-24DN型电泳仪购                     （湘）2019-0004、SCXK（京）2021-0006。本研究得到新
          自北京六一生物科技有限公司；SH-523型化学发光成像                         疆医科大学实验动物伦理委员会审批，伦理审批号为
          系统购自杭州申花科技有限公司。                                     IACUC-20210405-1。


          · 2454 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 20                            中国药房  2024年第35卷第20期
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