Page 16 - 《中国药房》2024年20期

TNF-α 组（效靶比 20∶1 除外）、GiP 组及 GiP-B1 组 CD4-
NF-κB p65 64 kDa
CTL 对 H22 细胞的杀伤活性均显著增强（P＜0.05）。结
果见表6。
p-NF-κB p65 65 kDa
表6 各组 CD4-CTL 对 H22 细胞的杀伤活性比较（x±
s，n＝3，%%） IL-12Rβ2 112 kDa
组别 效靶比10∶1 效靶比20∶1 效靶比50∶1
对照组 3.50±0.26 10.81±1.69 14.12±0.74 STAT-4 83 kDa
TNF-α组 10.74±0.35 a 12.13±0.87 25.33±2.81 a
GiP组 13.05±2.23 a 25.34±1.72 a 40.93±0.99 a
p-STAT-4 85 kDa
GiP-B1组 14.98±1.43 a 25.26±3.29 a 43.87±1.43 a
a：与对照组比较，P＜0.05。
β-actin 43 kDa
3.2.4 共培养后荷瘤小鼠mDC中IL-12、IL-12R、STAT-4
对照组 TNF-α组 GiP组 GiP-B1组
mRNA的表达情况 图2 各组共培养后荷瘤小鼠 mDC 中 IL-12/NF-κB/
与对照组比较，TNF-α 组、GiP 组及 GiP-B1 组共培 STAT-4信号通路相关蛋白表达的电泳图
养 后 荷 瘤 小 鼠 mDC 中 IL-12、IL-12R（GiP 组 除 外）、
七多糖、人参多糖均能诱导 DC 成熟，从而激活 T 细胞，
STAT-4 mRNA 表 达 量 均 显 著 升 高（P＜0.05）。 结 果
增强 DC 与 T 细胞的相互作用 [14―16] 。因此，天然多糖通
见表7。
过促进DC成熟，提高肿瘤免疫疗效，在肿瘤治疗中具有
表7 各组共培养后荷瘤小鼠 mDC 中 IL-12、IL-12R、 一定的潜力。
STAT-4 mRNA表达量比较（x±s，n＝3） 表面标志物 CD11c 代表 DC 纯度，CD80 与 CD86 是
组别 IL-12/GAPDH IL-12R/GAPDH STAT-4/GAPDH DC 激活 T 细胞的共刺激分子，MHC-Ⅱ是 DC 抗原提呈
对照组 0.94±0.07 1.01±0.05 1.01±0.04
TNF-α组 2.49±0.55 a 1.56±0.15 a 1.82±0.14 a 分子，上述指标的阳性表达率升高表示 DC 的抗原提呈
[7]
GiP组 1.73±0.13 a 1.13±0.12 1.48±0.12 a 功能增强 ；DC分泌细胞因子的水平是其免疫功能是否
GiP-B1组 2.85±0.56 a 1.70±0.13 a 2.17±0.14 a 成熟的重要指标之一，IL-12p70 与 IL-4 是 mDC 的主要
a：与对照组比较，P＜0.05。 分泌细胞因子 。本研究结果显示，经 100 μg/mL GiP
[16]
3.2.5 共培养后荷瘤小鼠 mDC 中 IL-12/NF-κB/STAT-4 和 100 μg/mL GiP-B1 干预 24 h 后，荷瘤小鼠 mDC 的细
信号通路相关蛋白的表达情况 胞活力、MHC-Ⅱ阳性表达率以及IL-12p70、IL-4水平均
与对照组比较，TNF-α 组、GiP 组及 GiP-B1 组共培 显著升高，CD11c、CD80、CD86 阳性表达率也有升高趋
养后荷瘤小鼠 mDC 中 IL-12Rβ2 蛋白表达量和 NF-κB 势，提示GiP与GiP-B1对imDC有促成熟作用。
p65、STAT-4蛋白磷酸化水平均显著升高（P＜0.05）。结 H22 细胞因具备高成瘤性、遗传特性稳定、生长周
果见表8、图2。 期短、肿瘤位置与大小易于控制等优点，而成为抗肝癌
[17]
作用的常用模型 。H22 细胞在培养过程中易于操作、
表8 各组共培养后荷瘤小鼠 mDC 中相关蛋白表达比
较（x±s，n＝3） 培养条件易于控制，其所需培养基成分与本研究 DC 培
养基大致相同。因此，本研究采用肝癌细胞 H22 评价
组别 p-NF-κB p65/NF-κB p65 IL-12Rβ2/β-actin p-STAT-4/STAT-4
对照组 0.12±0.01 0.38±0.03 0.28±0.07 GiP 及 GiP-B1 诱导的 mDC 的抗肿瘤效应。DC 能将肿
+
+
TNF-α组 0.48±0.12 a 0.69±0.04 a 0.67±0.02 a 瘤抗原交叉递呈给CD4 T及CD8 T细胞：前者极化为如
GiP组 0.28±0.04 a 0.58±0.04 a 0.49±0.10 a 抗肿瘤的T辅助性细胞1、促肿瘤的T辅助性细胞2等不
GiP-B1组 0.54±0.06 a 0.92±0.20 a 0.76±0.13 a
同功能亚群；后者激活生成 CTL 细胞，发挥抗肿瘤效
a：与对照组比较，P＜0.05。 [4]
应 。本研究将 GiP 与 GiP-B1 诱导的荷瘤小鼠 mDC 与
4 讨论 CD4 T 细胞共培养，以评估荷瘤小鼠 mDC 对 CD4 T 细
+
+
多糖是一类具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗炎等 胞的增殖能力和抗肿瘤效应。本研究结果显示，GiP 及
多种生物活性，且疗效良好、毒副作用低的天然高分子 GiP-B1促成熟的荷瘤小鼠mDC均能显著刺激CD4 T细
+
聚合物，在预防和治疗肿瘤中有广泛的应用前景 。 胞增殖，增强对H22细胞的杀伤活性。
[11]
[12]
Wei等 发现，铁皮石斛均一多糖DOPA-1能剂量依赖性 为了阐明GiP及GiP-B1如何改善并增强mDC激活
[13]
地抑制肝癌细胞 HepG2 的生长；刘亚楠等 发现，枸杞 T 细胞，进而发挥抗肿瘤的作用，本研究采用 Transwell
+
多糖能激活巨噬细胞 RAW264.7 并增强 IL-6、IL-12 分 嵌套装置使 mDC 与 CD4 T 细胞间接共培养，以此维持
泌，发挥免疫调节作用。巨噬细胞的抗原提呈能力远远 上述细胞的功能和活力，同时只收集 mDC 用于检测分
不如DC，并且DC迁移到淋巴结的能力对于启动T细胞 子水平的变化。结果显示，GiP 及 GiP-B1 共培养后，荷
介导的抗肿瘤反应是必需的。研究发现，黄芪多糖、三 瘤 小 鼠 mDC 中 IL-12、IL-12R（GiP 组 除 外）、STAT-4

· 2458 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 20 中国药房 2024年第35卷第20期