Page 32 - 《中国药房》2024年19期

Compared with the model group， the toe swelling degree and AI score in the middle-dose and high-dose groups of petroleum ether
extract of S. divaricata decreased significantly from day 14 to day 28 after administration （P＜0.05 or P＜0.01）. The serum levels
of IL-1β， IL-17， TNF- α， MPO， NE and NETs decreased significantly， while the levels of IL-10 and 25（OH）D3 increased
significantly （P＜0.05 or P＜0.01）. The widened ankle joint space and the improved structure were found； the expression of CitH3
in ankle joint， and the expressions of CYP24A1 and PAD4 in synovium were down-regulated significantly， while the expressions of
CYP27B1 and VDR were up-regulated significantly in synovium （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS The petroleum ether
extract of S. divaricata may inhibit the production of NETs and improve the symptoms of RA by regulating the vitamin D system.
KEYWORDS rheumatoid arthritis； Saposhnikovia divaricata； petroleum ether extract； vitamin D； neutrophil extracellular traps；
inflammatory factors

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以 像分析仪（美国 Protein Simple 公司）、1290 InfinityⅡ型
滑膜炎症为主要特征的进行性自身免疫疾病，主要表现 高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。
为关节滑膜炎症和异常增生、关节与骨破坏，最终引发 1.2 主要药品与试剂
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关节畸形和功能丧失 。RA致病因素众多，中性粒细胞 防风（批号2301041）购自安徽普仁中药饮片有限公
胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）的大量 司，经河南省中医药研究院王慧森副研究员鉴定为伞形
形成被认为是 RA 致病的关键环节。RA 患者的外周血 科植物防风 Saposhnikovia divaricata （Turcz.） Schischk.
液和关节液中存在大量中性粒细胞，当其受刺激后可激 的干燥根。香柑内酯、异欧前胡素对照品（批号分别为
活髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO），并触发中性 2023157、2022331，纯度均大于98%）购自上海阿拉丁生
粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase，NE）从嗜酸性颗 化科技股份有限公司；牛Ⅱ型胶原（批号 20021）购自美
粒中转运至细胞核，从而水解染色质上的组蛋白，使染 国 Chondrex 公司；免疫组化试剂盒、DAB 显色试剂盒、
色 质 成 为 游 离 的 DNA，最 终 形 成 以 DNA 为 骨 架 的 苏木素-伊红（HE）染色试剂盒（批号分别为 P0615、
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NETs 。高水平的NETs 不仅可增加抗环瓜氨酸肽抗体 P0203、C0105S）均购自上海碧云天生物技术有限公司；
的分泌进而加重 RA 病情，而且可促进滑膜成纤维细胞 弗氏完全佐剂（批号068K8761）购自美国Sigma公司；白
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增殖并产生促炎因子 。研究发现，维生素 D、维生素 D 细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-10、IL-17、肿瘤
受体（vitamin D receptor，VDR）及相关代谢酶构成的维 坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）试剂盒（批
生素 D 系统可通过抑制核因子 κB 信号通路减少 NETs 号分别为 20230704、20230609、20230719、20230602）均
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的形成 。流行病学调查也显示，维生素D水平与RA的 购自北京索莱宝科技有限公司；25-羟基维生素 D3[25-
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发病率和疾病活动度之间呈负相关 。 hydroxyvitamin D3，25（OH）D3；用于评价体内维生素 D
中药防风具有祛风解表、胜湿止痛的功效，临床常 水平]、MPO、NE、NETs 酶联免疫吸附测定（ELISA）试
用于治疗感冒头痛、风湿痹痛、风疹瘙痒等症。在治疗 剂 盒（批 号 分 别 为 ml038316、ml003250、ml003280、
RA 的方剂中，防风也常作为基础组方应用，如大防风 ml060524）均购自上海酶联生物科技有限公司；兔源细
汤、防风通络丸等。防风主要含有色原酮、香豆素、挥发 胞色素P450 27B1（cytochrome P450 27B1，CYP27B1）多
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油等活性成分，具有镇痛、抗炎等药理作用 。本课题组 克隆抗体、兔源细胞色素 P450 24A1（cytochrome P450
前期研究发现，防风石油醚提取物、正丁醇提取物均具 24A1，CYP24A1）多克隆抗体、兔源VDR多克隆抗体、辣
有抗 RA 作用，且石油醚提取部位的抗 RA 作用更为显 根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批号
著，可降低关节炎大鼠的足趾肿胀度，抑制RA成纤维样 分别为 bs14146R、bs3899R、bs10618R、bs0295G）均购自
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滑膜细胞增殖 。本研究在前期实验基础上，通过注射 北京博奥森生物技术有限公司；兔源瓜氨酸化组蛋白
Ⅱ型胶原建立大鼠RA模型，基于维生素D系统和NETs H3（citrullinated histone H3，CitH3）、肽基精氨酸脱亚胺
考察防风石油醚提取物对 RA 大鼠的改善作用及机制， 酶 4（peptidyl arginine deiminase 4，PAD4）、甘油醛-3-磷
以期为RA的临床治疗提供实验依据。 酸脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体（批号分别为ab281584、
1 材料 ab214810、ab181602）均购自英国Abcam公司。
1.1 主要仪器 1.3 实验动物
本研究所用主要仪器有 Synergy NEO 型全功能酶 本研究所用动物为8周龄的SPF级雄性SD大鼠，共
标仪（美国Bio-Tek公司）、PV-200型足趾容积测量仪（成 70只，体重（200±10） g，购自北京华阜康生物科技股份
都泰盟软件有限公司）、2K15 型高速低温离心机（德国 有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（京）2019-0008。
Sigma公司）、RM2245型切片机（德国Leica公司）、CX31 大鼠饲养于河南省中医药研究院实验动物中心（环境温
型显微镜（日本 Olympus 公司）、Fluor Chem R 型凝胶成 度 22～25 ℃、相对湿度 50%～60%、12 h/12 h 明暗交

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