Page 56 - 《中国药房》2024年17期
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炭末推进率[炭末推进率＝炭末推进长度（cm）/小肠总                          LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
          长度（cm）×100%]。迅速分离小鼠回肠及结肠内容物，                        3 结果
          液氮冷冻后置于－80 °C 条件下保存备用。另取 2～4                        3.1 小鼠肠道形态观察
          cm回肠段于多聚甲醛中固定备用。                                        假手术组小鼠肠道颜色正常，无明显创面、出血、溃
          2.3 小鼠回肠组织病理形态学观察                                   疡等病理现象，管径大小正常；模型组小鼠肠道颜色显
              取“2.2”项下冻存的小鼠回肠组织适量，经常规脱                        著加深，肠道间粘连现象严重，且有明显水肿、出血现
          水、石蜡包埋、组织切片后，取部分切片（剩余部分用于                           象，肿胀处肠管轻微透明，肠腔按压有回弹，显示有气体
          后续实验）进行苏木精-伊红（HE）染色，然后采用光学显                         滞留；阳性对照组和术后通气方组小鼠肠道颜色稍深，
          微镜观察回肠组织病理形态及局部炎症情况。                                出血、水肿现象较模型组减轻，肠管内存在少量气体和
          2.4 小鼠血清中炎症因子及脑肠肽水平检测                               积液。
              采用 ELISA 法检测。取“2.2”项下冻存的小鼠血清                    3.2 术后通气方对小鼠小肠炭末推进率的影响
          样品适量，梯度解冻后于室温放置 1 h。根据相应试剂                              与假手术组相比，模型组小鼠小肠炭末推进率均显
          盒说明书方法操作，采用酶标仪于450 nm波长下检测小                         著降低（P＜0.05）；与模型组相比，阳性对照组和术后通
          鼠 血 清 中 炎 症 因 子（IL-6、IL-10、TNF- α）和 脑 肠 肽           气方组小鼠小肠炭末推进率显著升高（P＜0.05）。结果
         （MTL、SS）水平。                                          见表1。
          2.5 小鼠回肠组织中TLR4、NF-κB p65、p38 MAPK蛋
                                                                表1 各组小鼠小肠炭末推进率比较（x±s，n＝6）
          白核内表达情况检测
                                                              组别            小肠总长度/cm   炭末推进长度/cm    炭末推进率/%
              取“2.3”项下剩余切片，用 3% 的过氧化氢处理 10                    假手术组          54.43±4.29   43.90±4.06  79.13±1.17
          min 使内源性过氧化物失活，用 pH 6.0 的 10 mmol/L 柠               模型组           57.23±2.04   10.90±1.93  19.02±3.03 a
          檬酸盐缓冲溶液修复抗原，然后用 3% 的牛血清蛋白封                          阳性对照组         56.83±2.66   37.21±2.80  65.67±5.75 b
                                                              术后通气方组        55.37±2.15   34.07±2.19  61.66±5.87 b
          闭液在 Tris 缓冲盐水中阻断 20 min；加入 TLR4、NF-κB
                                                                 a：与假手术组相比，P＜0.05；b：与模型组相比，P＜0.05。
          p65、p38 MAPK 一抗（稀释度均为 1∶100）在 4 ℃下孵育
                                                              3.3 术后通气方对POI小鼠回肠组织病理形态的影响
          过夜，加入 HRP-Polymer 二抗（稀释度 1∶200）在室温下
          孵育 30 min；采用 DAB 显色并用苏木精复染后，进行脱                         与假手术组相比，模型组小鼠回肠组织肠壁萎缩，
          水和装片。采用显微镜观察图像，并用 Image J 软件进                       小肠绒毛轴心水肿充血，绒毛萎缩变短、数量减少，黏膜
          一步处理。采用SPSS 21.0软件统计细胞核内棕色阳性                        毛细血管充血，并且炎症细胞在黏膜表面和肌层存在不
          区域的表达，用光密度值的百分比（棕色阳性区域光密                            同程度的浸润。阳性对照组和术后通气方组小鼠的上
          度值/全域光密度值）表示核内蛋白表达水平。                               述病理形态得到不同程度的改善。结果见图1。
          2.6 小鼠结肠内容物的肠道菌群分析
              取“2.2”项下结肠内容物适量，提取总DNA后，根据
          全长引物序列合成带有条形码的特异性引物，进行聚合
          酶链式反应，并对产物进行纯化、定量，形成测序文库；
          具体操作由北京百迈客生物科技有限公司进行。建立
          的文库首先进行文库质量检查，合格的文库用 PacBio
                                                                      A.假手术组                   B.模型组
          Sequel 测序。预处理测序数据后，对样品的维恩图（展
          示样品之间共有特征数目，可直观地表现出样品间特征
                    [5]
          的重合情况 ）、稀释曲线（用于验证测序数据量是否足
                                [6]
          以反映样品的物种多样性 ）和等级丰度曲线（用于解释
                                      [7]
          样品所含物种的丰富度和均匀度 ）进行分析，然后再进
          行 α 多样性分析（包括 ACE、Chao1、Shannon、Simpson、
          PD、Coverage 指数）、β 多样性分析[采用偏最小二乘法-                          C.阳性对照组                 D.术后通气方组
                                                                 注：箭头所指为肠道肿胀、绒毛断裂处。
          判别分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-
                                                                   图1 各组小鼠回肠组织病理图（HE染色）
          DA）进行分析]，从而挖掘样品之间的差异。
          2.7 统计学方法                                           3.4 术后通气方对 POI 小鼠血清中炎症因子和脑肠肽
              使用 SPSS 21.0 和 GraphPad Prism 9.0 软件对数据         水平的影响
          进行统计分析并绘制统计图。数据用x±s表示，多组间                               与假手术组相比，模型组小鼠血清中 IL-6、TNF-α、
          比较采用单因素方差分析，进一步组间两两比较采用                             SS 水平均显著升高（P＜0.05），IL-10、MTL 水平均显著


          · 2110 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 17                            中国药房  2024年第35卷第17期
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