Page 54 - 《中国药房》2024年14期

2.4.5 精密度试验 3 讨论
取“2.4.2（2）”项下供试品溶液（编号 S1）适量，按 3.1 试验条件的优化
“2.4.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。 本课题组前期以槲皮素、山柰酚、山柰素、大黄素的
结果显示，槲皮素、山柰酚、山柰素、大黄素峰面积的 总含量为指标，通过单因素试验结合 Box-Behnken 响应
RSD分别为0.68%、1.00%、1.45%、0.94%（n＝6），表明方 面法对提取溶剂、提取时间、提取温度、超声频率、提取
法精密度良好。 次数、料液比等因素及水平进行优化，最终确定了本研
2.4.6 重复性试验 究中所用的供试品处理方法。
取样品（编号S1）适量，共6份，按“2.4.2（2）”项下方 本课题组前期分别考察了甲醇-水、乙腈-水、乙
法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测 腈-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.2%甲酸溶液、乙腈-0.2%磷酸
定，记录峰面积并按标准曲线法计算样品含量。结果显 溶液5种流动相体系，结果表明，以乙腈-0.2%甲酸溶液
示，槲皮素、山柰酚、山柰素、大黄素含量的 RSD 分别为 为流动相时，各色谱峰分离度良好，基线平稳。全波长
0.44%、1.52%、1.32%、1.69%（n＝6），表明方法重复性 扫描结果表明，在360 nm波长下，各色谱峰分离度较好，
良好。 除大黄素外，其余色谱峰响应良好，因此 HPLC 指纹图
2.4.7 稳定性试验 谱分析时以360 nm为检测波长，含量测定时使用双波长
取“2.4.2（2）”项下供试品溶液（编号 S1）适量，分别 切换法，在采集大黄素色谱峰时将检测波长切换至 287
于室温下放置 0、2、4、6、12、24 h 时，按“2.4.1”项下色谱 nm。
条件进样测定，记录峰面积。结果显示，槲皮素、山柰 3.2 包尔胡特果实的化学成分分析
酚、山柰素、大黄素峰面积的RSD分别为0.87%、0.59%、 本课题组前期对比了包尔胡特果实在正、负离子模
1.03%、1.09%（n＝6），表明样品在室温下放置 24 h 内稳 式下化学成分的采集情况，结果发现，在 MS 负离子模
E
定性良好。 式下采集到的化合物信息更多，响应强度更好，因此采
2.4.8 加样回收率试验 用 MS 负离子模式采集质谱信息。本研究共鉴定出 35
E
取样品（编号 S1），每份 0.5 g，共 9 份，精密称定，分 种化合物，包括 28 种黄酮类成分、5 种蒽醌类成分、2 种
别加入槲皮素、山柰酚、山柰素、大黄素对照品适量，按 有机酸类成分，表明黄酮类化合物是包尔胡特果实的主
“2.4.2（2）”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下 要化学成分。天然产物中的黄酮类化合物已被证实具
色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结 [9]
有抗炎、抗氧化、抑菌、抗肿瘤等多种作用 。本研究所
果显示，槲皮素、山柰酚、山柰素、大黄素的平均加样回
得分析结果也揭示了包尔胡特果实可能的物质基础组
收率分别为 99.84%、99.27%、98.81%、100.81%（n＝9），
成，为该药材的药效物质基础与质量控制研究提供了实
RSD分别为1.71%、1.15%、1.40%、1.64%（n＝9）。
验基础。
2.4.9 样品含量测定
3.3 指纹图谱及化学计量学分析
取 15 批样品，按“2.4.2（2）”项下方法制备供试品溶
本研究共标定了 19 个共有峰，相似度评价结果显
液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并
示，15批样品的相似度均大于0.9，表明不同批次样品的
按标准曲线法计算样品含量。每批样品平行测定3次，
相似度较高，整体质量较稳定。CA、PCA 和 OPLS-DA
结果见表3。
结果显示，15批样品可分为2类，4个主成分信息主要来
表3 15 批样品中槲皮素等 4 种成分的含量测定结果
自于槲皮素、山柰酚、大黄素、山柰酚等13个共有峰；共
（x±s，n＝3，mg/g）
筛选出了10个质量差异标志物，包括已指认的槲皮素和
编号 槲皮素 山柰酚 山柰素 大黄素 大黄素。
S1 4.960±0.063 0.451±0.004 0.405±0.006 0.261±0.001
S2 2.426±0.038 0.444±0.003 1.308±0.012 0.387±0.002 3.4 含量测定指标选择与含量测定结果分析
S3 5.808±0.016 0.441±0.005 0.967±0.010 0.361±0.003 19个共有峰中共指认出4种成分（槲皮素、山柰酚、
S4 3.757±0.026 0.336±0.003 0.595±0.003 0.337±0.001 山柰素、大黄素），其中槲皮素具有抗炎和抗氧化应激的
S5 0.710±0.040 0.236±0.006 0.723±0.003 0.354±0.002 [10]
S6 6.595±0.030 0.653±0.009 0.376±0.006 0.320±0.003 作用 ；山柰酚可通过减轻氧化应激来发挥保护肝脏的
S7 8.768±0.075 0.349±0.004 0.590±0.000 0.368±0.003 作用 ；山柰素可治疗重金属污染引起的大鼠肝损伤 ；
[11]
[9]
S8 9.647±0.073 0.276±0.005 0.357±0.004 0.262±0.002 大黄素具有显著的抗炎和抗氧化活性，对肝癌也有一定
S9 6.614±0.085 0.410±0.004 0.583±0.008 0.380±0.008 [12―13]
S10 10.478±0.039 0.660±0.032 1.078±0.003 0.434±0.002 的治疗作用 。这些均与包尔胡特果实的药理活性
S11 5.461±0.078 0.463±0.003 0.488±0.001 0.316±0.003 密切相关，因此本研究选择上述4种成分作为含量测定
S12 9.903±0.006 0.428±0.004 0.523±0.003 0.360±0.003 的指标。此外，PCA与OPLS-DA结果也从侧面表明，这
S13 10.048±0.003 0.244±0.002 0.334±0.003 0.290±0.001
S14 8.865±0.051 0.297±0.002 1.288±0.013 0.472±0.012 4 种成分作为含量测定指标的合理性：这 4 种成分既是
S15 10.076±0.037 0.394±0.004 3.039±0.024 0.504±0.001 主成分的主要贡献峰，也是导致15批样品质量差异的标

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