Page 52 - 《中国药房》2024年14期

2.2 包尔胡特果实药材HPLC指纹图谱的建立 共标定了19个共有峰，通过与混合对照品溶液（图4）保
2.2.1 供试品溶液的制备 留时间、二极管阵列紫外吸收光谱图比对，指认了4个共
取样品粉末，约 1 g（过 80 目筛），精密称定，置于 有峰，分别为槲皮素（11号峰）、山柰酚（15号峰）、山柰素
100 mL锥形瓶中，加入90%甲醇50 mL，于50 ℃超声提 （17号峰）、大黄素（19号峰）。
取 25 min，冷却，以 90% 甲醇补足减失的质量。精密量 18
680 10 17
取 2 mL，置于 10 mL 容量瓶中，加入 90% 甲醇定容，经 640 6 8 11 14
600 1 2 34 5 7 9 12 13 15 16 19 R
0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 560 S15
520
480 S14
S13
2.2.2 混合对照品溶液的制备 440 S12
400
S11
取槲皮素、山柰酚、大黄素、山柰素对照品适量，精 U/mV 360 S10
320
S9
280 S8
密称定，加入 90% 甲醇溶解并定容，制成上述各成分质 240 S7
S6
200
160 S5
量浓度分别为 40.02、2.71、0.83、3.62 μg/mL 的混合对照 120 S4
S3
80
40 S2
品溶液。 0 S1
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
2.2.3 色谱条件 t/min
以 Agilent-5 TC-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）为色 图3 15批样品的叠加HPLC指纹图谱和对照指纹图谱
谱柱，以乙腈（A）-0.2%甲酸溶液（B）为流动相进行梯度
100
洗脱，洗脱程序为：0～52 min，16%A→23%A；52～75 80 11
min，23%A→26%A；75～94 min，26%A→80%A；94～ mAU 60 17
105 min，80%A→100%A；105～110 min，100%A→16%A； 40 15 19
20
流速为 1 mL/min；检测波长为 360 nm；柱温为 30 ℃；进 0
样量为10 μL。 0 20 40 60 80 100
t/min
2.2.4 精密度考察 11：槲皮素；15：山柰酚；17：山柰素；19：大黄素。
取“2.2.1”项下供试品溶液（编号S1）适量，按“2.2.3” 图4 混合对照品的HPLC图
项下色谱条件连续进样测定6次，以11号峰（槲皮素）为 2.2.8 相似度分析
参照峰，得到各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012
0.11%（n＝6），相对峰面积的RSD均小于3.05%（n＝6）， 版）》，以对照指纹图谱（R）为参照，评价15批样品HPLC
表明方法精密度良好。 图谱的相似度。结果显示，15批样品与对照指纹图谱的
2.2.5 重复性考察 相似度为 0.901～0.991，表明 15 批样品的质量一致性
取样品（编号 S1）适量，共 6 份，按“2.2.1”项下方法 良好。
制备供试品溶液，再按“2.2.3”项下色谱条件进样测定， 2.3 15批药材的化学计量学分析
以11号峰（槲皮素）为参照峰，得到各共有峰相对保留时 2.3.1 聚类分析
间的RSD均小于0.64%（n＝6），相对峰面积的RSD均小 采用 SPSS 26.0 软件对 15 批样品中的 19 个共有峰
于3.47%（n＝6），表明方法重复性良好。 峰面积进行聚类分析（cluster analysis，CA）。结果（图5）
2.2.6 稳定性考察 显示，当平方欧氏距离为20时，15批样品聚为2类，其中
取“2.2.1”项下供试品溶液（编号S1）适量，分别于室 S1～S5、S7、S9为一类，其余样品为一类，表明包尔胡特
温下放置 0、2、4、6、12、24 h 时，按“2.2.3”项下色谱条件 果实的生长环境对其质量未产生明显影响。
进样测定，以11号峰（槲皮素）为参照峰，得到各共有峰 平方欧氏距离
0 5 10 15 20 25
相对保留时间的RSD均小于0.18%（n＝6），相对峰面积 S2
S4
的RSD均小于3.43%（n＝6），表明样品在室温下放置24 S5
h内稳定性良好。 S1
S9
2.2.7 指纹图谱的建立 S7
S3
取15批样品（编号S1～S15）粉末，按“2.2.1”项下方 样品编号 S13
法制备供试品溶液，再按“2.2.3”项下色谱条件进样测 S14
S12
定，记录色谱图，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系 S10
S8
统（2012版）》，以S1样品为参照，时间窗设定为0.1 min， S6
S11
采用中位数法进行 Mark 峰匹配，生成 15 批样品的叠加 S15
指纹图谱与对照指纹图谱（R）。结果（图3）显示，样品中 图5 15批样品的CA树状图

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