Page 58 - 《中国药房》2024年14期

2.4 大鼠胰腺组织中 TNF-α、IL-6、MDA、SOD 水平 表1 各组大鼠血清中AMS、LPS水平比较（x±s）
检测 组别 n AMS/（U/L） LPS/（U/L）
大鼠采血完成后，将各组剩余大鼠处死，取部分胰 假手术组 14 317.57±39.02 10.53±1.72
模型组 14 1 356.29±134.62 a 97.16±10.05 a
腺组织制成匀浆，离心后取上清液，按试剂盒说明书操
低剂量益母草碱组 14 938.64±109.05 b 55.08±7.16 b
作，检测胰腺组织中TNF-α、IL-6、MDA、SOD水平。 高剂量益母草碱组 14 424.36±51.78 bc 18.72±2.51 bc
2.5 大鼠胰腺组织中HMGB1、RAGE mRNA表达检测 HMGB1过表达组 10 1 786.45±157.35 b 129.63±14.34 b
高剂量益母草碱+HMGB1过表达组 14 809.72±91.53 d 49.25±6.04 d
按 TRIzol 试剂盒说明书操作，从“2.4”项下部分胰
a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与低剂
腺组织中提取总 RNA，反转录成 cDNA，再进行 PCR 扩
量益母草碱组比较，P＜0.05；d：与高剂量益母草碱组比较，P＜0.05。
增。以β-肌动蛋白（β-actin）为对照，采用2 －ΔΔCt 法计算胰
3.2 各组大鼠胰腺组织病理损伤比较
腺组织中HMGB1、RAGE mRNA表达水平，并以假手术
假手术组大鼠胰腺组织结构基本正常，无炎症细胞
组为对照进行归一化处理。引物由深圳子科生物科技
浸润。模型组大鼠胰腺组织结构出现异常，大面积的胰
有限公司合成。HMGB1 的正向引物为 5′-GACGAG-
腺腺泡和间质出现溶解性坏死，并出现炎症细胞浸润。
CATCCTGGCTTATC-3′，反向引物为 5′-CGCTGCTT-
与模型组比较，低剂量益母草碱组大鼠胰腺组织结构异
GTCATCTGCTGA-3′，扩增产物长度为 245 bp；RAGE
常减轻，腺泡和间质的溶解性坏死面积减少，炎症细胞
的正向引物为 5′-ACATGTGTGTCTGAGGGAAGC-3′，
浸润稍减少；高剂量益母草碱组大鼠胰腺组织形态趋于
反向引物为 5′-TGCTCTGACCGCAGTGTAAAG-3′，扩
增产物长度为 213 bp；β-actin 的正向引物为 5′-TTGCT- 正常，只见少许胰腺腺泡溶解性坏死，只有少量炎症细
GACAGGATGCAGAAGGAG-3′，反向引物为 5′-ACT- 胞浸润出现；HMGB1 过表达组大鼠的胰腺腺泡和间质
CCTGCTTGCTGATCCACATC-3′，扩增产物长度为 168 坏死面积更大，炎症细胞浸润也更明显。与高剂量益母
bp。PCR 的反应体系（30 μL）如下：PCR 试剂 9 μL，正、 草碱组比较，高剂量益母草碱+ HMGB1过表达组大鼠胰
反向引物各2 μL，cDNA 6 μL，ddH2O 11 μL。扩增条件 腺组织形态结构明显异常，胰腺腺泡和间质的坏死面积
如下：92 ℃预变性5 min；92 ℃变性19 s，56 ℃退火16 s， 增大，炎症细胞浸润增多。结果见图1。
69 ℃延伸22 s，共35个循环。
2.6 大鼠胰腺组织中HMGB1、RAGE蛋白表达检测
取“2.4”项下部分胰腺组织，裂解后提取总蛋白，测
定蛋白质浓度后，电泳分离，将蛋白质转移到硝酸纤维
素膜上，用 5% 脱脂牛奶封闭；加入 HMGB1、RAGE、
GAPDH一抗（稀释比例分别为1∶1 200、1∶900、1∶1 600）， 50 μm 50 μm 50 μm
在4 ℃下孵育过夜；次日清洗后，加入二抗（稀释比例为 A.假手术组 B.模型组 C.低剂量益母草碱组
1∶3 000），在室温下孵育 1 h；洗涤后使用电化学发光溶
液 成 像 ，检 测 。 使 用 Image J 软 件 分 析 目 的 蛋 白
（HMGB1、RAGE）与内参蛋白（GAPDH）条带灰度值的
比值，表示目的蛋白的表达水平。
2.7 统计学方法
50 μm 50 μm 50 μm
采用SPSS 26.0软件分析数据。计量资料以x±s表 D.高剂量益母草碱组 E. HMGB1过表达组 F.高剂量益母草碱+
HMGB1过表达组
示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采
箭头：胰腺腺泡和间质坏死部位。
用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
图1 各组大鼠胰腺组织病理损伤显微镜图（HE染色）
3 结果
3.1 各组大鼠血清中AMS、LPS水平比较 与假手术组[（0.21±0.03）分]比较，模型组[（3.49±
与假手术组比较，模型组大鼠血清中 AMS、LPS 水 0.38）分]大鼠胰腺组织病理损伤评分显著升高（P＜
平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，低、高剂量益 0.05）；与模型组比较，低、高剂量益母草碱组[（2.25±
母草碱组大鼠血清中 AMS、LPS 水平均显著降低， 0.41）、（0.94±0.18）分]大鼠胰腺组织病理损伤评分均显
HMGB1 过表达组大鼠血清中 AMS、LPS 水平均显著升 著降低（P＜0.05），HMGB1过表达组[（3.92±0.07）分]大
高（P＜0.05）；与低剂量益母草碱组比较，高剂量益母草 鼠胰腺组织病理损伤评分显著升高（P＜0.05）；与低剂
碱组大鼠血清中AMS、LPS水平均显著降低（P＜0.05）； 量益母草碱组比较，高剂量益母草碱组大鼠胰腺组织病
与高剂量益母草碱组比较，高剂量益母草碱+HMGB1过 理损伤评分显著降低（P＜0.05）；与高剂量益母草碱组
表达组大鼠血清中 AMS、LPS 水平均显著升高（P＜ 比较，高剂量益母草碱+HMGB1过表达组[（2.06±0.32）
0.05）。结果见表1。 分]大鼠胰腺组织病理损伤评分显著升高（P＜0.05）。

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