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以及局部或全身并发症。全球急性胰腺炎的发病率为                            1.3 动物
                                                       [1]
          3/10 000～4/10 000，其中约 20% 的患者发展为 SAP 。                 本研究所用动物为 Wistar 大鼠（10 周龄，雄性，SPF
          SAP 的病死率很高，临床中对于 SAP 采取多模式治疗，                      级），体重 322～348 g，购自贵州中睿生物科技有限公
          包括监测、评估以及药物治疗等，但治疗效果不理想，急                          司，生产许可证号为 SCXK（贵）2022-0001，使用许可证
          需寻找治疗SAP的有效药物，以降低SAP的病死率。                          号为 SYXK（黔）2021-0004。大鼠购入后在遵义市第一
              益母草碱是从中药益母草中提取、纯化得到的活性                         人民医院基础实验室中常规饲养。本研究经遵义市第
          生物碱，最初广泛应用于治疗妇科疾病。近期研究显                            一人民医院伦理审查批准，批准号为基础L-2023-054。
          示，益母草碱可减轻阿尔茨海默病小鼠的认知功能障                            2 方法
          碍，改善其氧化应激 ；可改善炎症性肠病小鼠炎症反                           2.1 建模、分组与给药
                           [2]
                                      [3]
          应、氧化应激，抑制结肠细胞凋亡 ；还可改善子宫内膜                              依据文献方法进行造模 ：将大鼠用戊巴比妥钠麻
                                                                                      [7]
                        [4]
          炎小鼠炎症反应 。以上研究表明，益母草碱对炎症性                           醉，切开腹部，用金属夹夹住十二指肠，在胰胆管中注入
          疾病具有较好的治疗效果，由此推测其对SAP可能也具
                                                             1 mg/kg的5%牛磺胆酸钠，结扎，5 min后可观察到胰腺
          有改善作用。另有报道显示，抑制高迁移率族蛋白 1
                                                             出现充血、水肿；松开金属夹，缝合。造模6 h后，随机选
         （high-mobility group box 1，HMGB1）/晚期糖基化终产
                                                             择 4 只大鼠进行胰腺组织 HE 染色，若观察到胰腺组织
          物 受 体（receptor  for  advanced  glycation  end  products，
                                                             出现坏死、水肿、充血、炎症浸润等现象，说明 SAP 造模
          RAGE）信号通路可以降低小胶质细胞介导的神经炎症
                                                             成功。造模过程中大鼠的死亡率约为15%，大鼠死亡后
          活性，阻断炎症级联反应，减轻 SAP 相关肺损伤炎症反
                                                             用其他大鼠进行补充造模。
          应 [5―6] 。因此，本研究拟研究益母草碱对 SAP 大鼠胰腺
                                                                 随机将 70 只 SAP 造模成功大鼠分为模型组、低剂
          损伤的影响，并基于 HMGB1/RAGE 信号通路探讨其作
                                                             量益母草碱组、高剂量益母草碱组、HMGB1 过表达组、
          用机制，旨在为益母草碱用于SAP的治疗提供参考。
                                                             高剂量益母草碱+HMGB1 过表达组，每组 14 只。另取
          1 材料
                                                             14只健康大鼠按上述方法进行手术，并在胰胆管中注入
          1.1 主要仪器
                                                             1 mg/kg生理盐水，作为假手术组。低、高剂量益母草碱
              本研究所用的主要仪器包括DP-180型全自动生化
                                                             组大鼠分别腹腔注射8、16 mg/kg益母草碱（以生理盐水
          分析仪、ContourGT 型光学显微镜、DYY-8 型电泳仪和
                                                                    [8]
                                                             为溶剂） ；HMGB1过表达组大鼠尾静脉注射8 μg/kg的
          Quantum CX5型蛋白成像仪（南京普东兴生物科技有限
                                                                               [9]
                                                             HMGB1 过表达质粒 ；高剂量益母草碱+HMGB1 过表
          公司），PT-3600B型酶标仪、eQ164CP型实时荧光定量聚
                                                             达组大鼠腹腔注射 16 mg/kg的益母草碱，然后尾静脉注
          合酶链反应（PCR）仪（苏州东胜兴业科学仪器有限
                                                             射8 μg/kg的HMGB1过表达质粒；模型组和假手术组大
          公司）。
                                                             鼠腹腔注射生理盐水。注射体积均为10 mL/kg，每日给
          1.2 主要药品与试剂
                                                             药1次，连续5 d。给药期间，HMGB1过表达组大鼠死亡
              益母草碱原料药（批号 Y7471-16-2，纯度≥99%）购
                                                             4只（因病情加重），其余各组大鼠均未出现死亡。
          自武汉沃轩科技有限公司；HMGB1 过表达质粒（批号
                                                             2.2 大鼠血清中AMS、LPS水平检测
          AD30356）购自广州艾迪基因科技有限责任公司；淀粉
          酶（amylase，AMS）、脂肪酶（lipase，LPS）检测试剂盒（批                  末次给药后 24 h，取各组大鼠的腹主动脉血，低温
          号 分 别 为 1913J、1724J），苏 木 精 - 伊 红（hematoxylin-      离心后取血清，按试剂盒说明书操作，使用全自动生化
          eosin，HE）染液（批号 1735D），肿瘤坏死因子 α（tumor               分析仪检测血清中AMS、LPS水平。
          necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，    2.3 大鼠胰腺组织病理损伤观察
          IL-6）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化                  大鼠采血完成后，随机从 HMGB1 过表达组中选取
          酶（superoxide dismutase，SOD）酶联免疫吸附检测（en‐            5 只大鼠，从其余各组中选取 7 只大鼠，处死，取出胰腺
          zyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号       组织，固定，石蜡包埋，切片，HE 染色后，使用光学显微
                                                                                             [10]
          分别为 1829D、2933F、2914F、3067F）和 PCR 试剂盒（批            镜观察胰腺组织的病理变化，并评分 。评分标准为：
          号 325K）均购自宜昌京溢生物科技有限公司；TRIzol 试                    0 分——形态结构正常；1 分——腺泡结构不清晰，小面
          剂盒（批号 lm-103）和兔抗大鼠 HMGB1、RAGE、甘油                   积腺泡浆液性颗粒脱失，间质内小灶炎症细胞浸润；2
          醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydroge‐    分——组织结构消失，小面积腺泡和间质溶解性坏死，
          nase，GAPDH）单克隆抗体（批号分别为lm-114、lm-191、               少量淋巴细胞浸润；3分——组织结构消失，较大面积腺
          lm-204）均购自上海联迈生物工程有限公司；反转录试                        泡和间质溶解性坏死，少量分叶粒细胞或淋巴细胞浸
          剂盒、山羊抗兔单克隆免疫球蛋白 G 二抗（批号分别为                         润；4分——组织结构消失，大面积腺泡和间质溶解性坏
          16349、17528）均购自武汉肽芯生物科技有限公司。                       死，大量分叶粒细胞浸润，间质水肿。


          中国药房  2024年第35卷第14期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 14    · 1723 ·
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