Page 53 - 《中国药房》2024年14期

2.3.2 主成分分析
2.0
以 15 批样品中的 19 个共有峰峰面积为变量，采用
1.5
SPSS 26.0 软件进行主成分分析（principal component
1.0
analysis，PCA）。结果显示，共得到 4 个主成分，累计方 VIP值 0.5
差贡献率为 88.208%，表明这 4 个主成分包含了 19 个共 0
有峰 88.208% 的信息，能较好地反映样品的主要特征， －0.5
[7]
具有代表性 。第 1 个主成分信息主要来自于 2、6、11 －1.0 2 6 1 11 3 14 8 10 19 5 13 9 7 12 16 17 18 15 4
（槲皮素）、1 号峰；第 2 个主成分信息主要来自于 4、16、 峰号
图8 15批样品19个共有峰的VIP值
17（山柰素）、18、19号峰（大黄素）；第3个主成分信息主
要来自于 5、10、15 号峰（山柰酚）；第 4 个主成分信息主 26%A；75～94 min，26%A→80%A，波长均为 360 nm。
要来自于 7 号峰。以 15 批样品的 19 个共有峰峰面积为 94～105 min，80%A→100%A；105～110 min，100%A→
变量，利用 SIMCA 14.1 软件绘制散点图，结果（图 6）显 16%A，波长均为 287 nm）；流速为 1 mL/min；柱温为
示，S1～S5、S7、S9 位于 PCA 得分图的左侧，S6、S8、 30 ℃；进样量为10 μL。
S10～S15位于PCA得分图的右侧，与CA结果相同。 2.4.2 溶液的制备
（1）混合对照品溶液。取槲皮素、山柰酚、山柰素、
6 大黄素对照品适量，精密称定，加入90%甲醇定容，制成
4
上述各成分质量浓度分别为 640.0、40.00、40.00、20.00
2
0 μg/mL的混合对照品溶液。
t[2]
－2
（2）供试品溶液。制备方法同“2.2.1”项。
－4
－6 （3）空白溶液。以90%甲醇为空白溶液。
－8
－8 －6 －4 －2 0 2 4 6 2.4.3 系统适用性试验
t[1] 取“2.4.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液、空白
图6 15批样品的PCA散点图
溶液，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。
2.3.3 正交偏最小二乘法-判别分析 结果（图4、图9，空白溶液图略）显示，供试品溶液中4种
以 15 批样品中的 19 个共有峰峰面积为变量，采用 成分的色谱峰峰形尖锐，与混合对照品中各成分色谱峰
SIMCA 14.1 软件进行正交偏最小二乘法-判别分析 保留时间一致，理论板数均大于 15 000，拖尾因子均在
（orthogonal partial least squares discrimination analysis， 0.95～1.05范围内，空白溶液对测定无干扰。
OPLS-DA）。结果（图 7）显示，OPLS-DA 模型中的所有
100
数据点均在95%置信区间内，15批样品聚类良好，与CA 80 11
和 PCA 结果一致。以变量重要性投影（variable impor‐ mAU 60 6 8 14 18
tance in projection，VIP）值＞1 为标准，筛选影响质量的 40 2 17
20 1 10
差异标志物 ，结果（图 8）显示，2、6、1、11（槲皮素）、3、 3 4 5 7 9 12 13 15 16 19
[8]
0
14、8、10、19（大黄素）、5号峰的VIP值均大于1。
0 20 40 60 80 100
t/min
1
2 11：槲皮素；15：山柰酚；17：山柰素；19：大黄素。
4
图9 供试品溶液（编号S1）的HPLC图
2
1.325 21＊t[1] －2 0 2.4.4 线性关系考察
取“2.4.2（1）”项下混合对照品溶液，用 90% 甲醇倍
－4 比稀释，制成系列质量浓度的混合对照品溶液，按
－6 “2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以各待测
－8 －6 －4 －2 0 2 4 6
1.003 99＊t[1] 成分质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标
图7 15批样品的OPLS-DA散点图 准曲线。结果见表2。
2.4 包尔胡特果实药材中4种指认成分的含量测定 表2 槲皮素等4种成分的回归方程和线性关系
2.4.1 色谱条件 待测成分 回归方程 线性范围/（μg/mL） r
4
以 Agilent-5 TC-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）为色 槲皮素 Y＝3.622 5×10 X－81 423.0 5.00～640.00 0.999 3
4
山柰酚 Y＝4.409 3×10 X－4 521.8 0.31～40.00 0.999 6
谱柱，以乙腈（A）-0.2%甲酸溶液（B）为流动相进行梯度 山柰素 Y＝3.150 9×10 X－6 882.7 0.31～40.00 0.999 6
4
4
洗脱（0～52 min，16%A→23%A；52～75 min，23%A→ 大黄素 Y＝4.310 5×10 X－2 308.9 0.16～20.00 0.999 9
中国药房 2024年第35卷第14期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 14 · 1719 ·