Page 36 - 《中国药房》2024年14期
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alleviated in Sin groups； body weight， liver weight， liver indexes， the contents of AST， ALT， IL-1β， IL-18 in serum and TG， TC
          in  liver  tissue，  the  mRNA  expressions  of  IL-1β  and  IL-18，  and  the  expressions  of  cleaved-IL-1β  and  fibrosis-related  proteins  all
          decreased  significantly （P＜0.01）；  the  protein  expression  of  IL-1β，  and  the  phosphorylation  levels  of  AMPK  and  YAP  proteins
          significantly increased （P＜0.01）. Compared with OA group， the lipid droplet accumulation of cells in OA+Sin groups significantly
          decreased，  while  the  phosphorylation  levels  of AMPK  and  YAP  proteins  significantly  increased （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Sin
          can  ameliorate  the  inflammation，  lipid  deposition  and  fibrosis  of  liver  tissue  in  mice，  the  mechanism  of  which  may  be  associated
          with activating the AMPK signaling pathway and promoting YAP phosphorylation.
          KEYWORDS     non-alcoholic steatohepatitis； sinomenine； AMPK； YAP； inflammatory reaction



              非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，        1.2 主要药品和试剂
          NASH）的主要特征为脂肪变性、炎症反应，并伴有细胞                              Sin原料药（批号HY-15122，纯度99.88%）购自美国
          气泡形成，是肝硬化和肝细胞性肝癌的主要诱因                       [1―2] 。  MedChemExpress 公司；丙氨酸转氨酶（alanine amino‐
          然而，目前尚无药物被批准用于 NASH 的治疗，导致临                         transferase，ALT）、天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotrans‐
          床可用于改善或逆转 NASH 患者临床症状的有效药物                          ferase，AST）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯
                  [3]
          极度匮乏 。因此，研发有效安全的 NASH 治疗新药具                        （triglyceride，TG）试剂盒（批号分别为C009-2-1、C010-2-
          有重要的临床意义。                                           1、A111-1-1、A110-1-1）均购自南京建成生物工程研究
              炎症反应可促使肝纤维化的发生，并可诱导NASH                         所；兔 IL-1β、剪切的 IL-1β（cleaved-IL-1β）、α-平滑肌肌
          的恶性进展 。腺苷一磷酸活化的蛋白激酶（adenosine                       动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、AMPK、磷酸化
                    [4]
          monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/Yes相   AMPK（phosphorylated AMPK，p-AMPK）、YAP、磷酸化
          关蛋白（Yes-associated protein，YAP）信号通路在多种炎             YAP（phosphorylated YAP，p-YAP）、β-肌动蛋白（β-ac‐
                                             [5]
          症性疾病发生发展过程中具有重要作用 。研究表明，                            tin）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体（批号分别为
          AMPK 的活化有望改善 NASH 相关脂质代谢异常并缓                        31202S、 63124S、 19245T、 2532S、 2535S、 14074S、
                    [6]
          解炎症反应 ；而 YAP 的过度激活则能促进 NASH 相关                      13619S、4967S、2118S）均购自美国 Cell Signaling Tech‐
                                [7]
          肝脏脂质沉积和炎症反应 。有研究者通过磷酸化YAP                           nology 公司；兔Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ，Col-Ⅰ）抗体
          而使 YAP 的激活受到抑制，从而改善肝脏炎症和纤维                         （批号ab270993）购自英国Abcam公司；兔结缔组织生长
                                                        [9]
            [8]
          化 ；同时有研究指出，AMPK 可促进 YAP 的磷酸化 。                      因子（connective tissue growth factor，CTGF）抗体、辣根
          可见，AMPK/YAP信号通路可能是治疗NASH的潜在靶                        过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批号分
          点之一。                                                别为25474-1-AP、SA00001-4）均购自武汉三鹰生物技术
              青藤碱（sinomenine，Sin）是一种从中药青风藤中提                  有限公司；油酸（oleic acid，OA）、RIPA裂解液（批号分别
          取的天然生物碱，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和调节免疫                           为ST2053、P0013B）均购自上海碧云天生物技术股份有
          等多种生物学活性 。研究指出，Sin可通过促进AMPK                         限公司；DMEM 培养基、BCA 蛋白定量试剂盒（批号分
                          [10]
          的磷酸化而抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子                         别 为 C1995500BT、23227）均 购 自 美 国 Thermo  Fisher
          的释放，可减少类风湿关节炎模型小鼠体内白细胞介素                            Scientific 公司；苏木精-伊红（HE）、Masson、油红 O 染色
                                                [11]
          1β（interleukin-1β，IL-1β）等炎症因子的分泌 。考虑到               试剂盒（批号分别为 G1120、G1340、G1261）均购自北京
          Sin可促进AMPK的磷酸化，以及AMPK、YAP在NASH                      索莱宝科技有限公司；IL-1β、IL-18 酶联免疫吸附测定
          发生发展中的重要作用，本研究拟以小鼠为对象，探讨                           （ELISA）试剂盒（批号分别为 EK201BHS、EK218）均购
          Sin 对其 NASH 的干预作用，并基于 AMPK/YAP 信号通                  自杭州联科生物技术股份有限公司；ChamQ通用SYBR
          路探讨 Sin 肝保护作用的潜在机制，以期为该药在                           qPCR 预混液（批号 Q711-02）购自南京诺唯赞生物科技
          NASH治疗领域中的应用提供理论和实验依据。                              股份有限公司；MTT 试剂（批号 475989）购自西格玛奥
          1 材料                                                德里奇（上海）贸易有限公司。
          1.1 主要仪器                                            1.3 实验细胞与动物、饲料
              1510型全波长酶标仪、EVOS M5000型智能细胞成                        人肝癌细胞 HepG2 购自中国科学院细胞库/干细
                            TM
          像系统、Quant Studio  1 Plus型实时荧光定量聚合酶链                 胞库。
          式反应（quantitative PCR，qPCR）仪均购自美国 Thermo                 SPF级雄性C57BL/6小鼠，体重约24 g，购自广东省
          Fisher Scientific 公司；HF151UV 型 CO2培养箱购自力康           医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为 SCXK
          生物医疗科技控股有限公司；1658033 小型垂直电泳转                       （粤）2022-0002；高 脂 饲 料（high-fat  diet，HFD；批 号
          印系统购自美国Bio-Rad公司；3300 Mini型化学发光成                    12492M）购自北京博爱港生物技术有限公司；标准饲料
          像系统购自上海勤翔科学仪器有限公司。                                 （standard chow diet，SCD）由广东药科大学实验动物中


          · 1702 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 14                            中国药房  2024年第35卷第14期
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