Page 38 - 《中国药房》2024年12期
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increased， and the protein expressions of GSDME and caspase-3 were significantly reduced （except for berberine 20 μmol/L group，
          P＜0.05）.  The  embryonic  development  of  zebrafish  treated  with  berberine  was  almost  unaffected，  and  the  survival  rate  of  embryo
          reached  100%，  with  no  obvious  abnormalities  observed.  CONCLUSIONS  Berberine  has  good  activity  against  the  proliferation  of
          tumor  stem  cells，  and  its  mechanism  of  action  may  be  related  to  activating  GSDME  and  promoting  cell  pyroptosis；  berberine  has
          good in vivo safety.
          KEYWORDS     berberine； tumor stem cells； pyroptosis； gasdermin E； safety


              肿瘤干细胞也被称为“肿瘤起始细胞”，是肿瘤中一                         1 材料
          小群同时具备干细胞和癌细胞特性的细胞群，具有自我                            1.1 主要仪器
                                                        [1]
          更新和多向分化能力，以及先天耐药性和高致瘤性 。                                SGX-FA110 型万分之一电子天平购自上海实干实
          肿瘤干细胞在大多数实体瘤中均有发现，其可促进治疗                            业有限公司；XDS200 型光学显微镜购自江西凤凰光学

          后肿瘤的发生、扩张、耐药、复发和转移                [2―3] 。目前认为，      科技有限公司；BPN-150CH（UV）型气套式 CO2恒温培
          肿瘤干细胞对化疗和放疗的抵抗是导致肿瘤复发和转                             养箱、GHP-9080 型恒温生化培养箱购自上海一恒科学
                                                                                TM
          移的重要原因之一，因此，从根本上杀死肿瘤干细胞，是                           仪器有限公司；iMark 型多功能酶标仪购自美国 Bio-
          根除肿瘤、提高患者治愈率的关键。通过对肿瘤干细胞                            Rad 公司；LC-LX-HR165A 型台式高速冷冻离心机购自
          表面标志物进行鉴定并实施针对性干预是基于肿瘤干                             上海力辰邦西仪器科技有限公司；FACS CantoⅡ型流式
          细胞理论治疗肿瘤的重要手段。目前已有多种针对肿                             细胞仪购自美国BD公司；OI 600MF型多功能成像仪购
          瘤干细胞的靶向疗法（如免疫治疗、小干扰RNA递送和                           自广州光仪生物科技有限公司；M165 FC型荧光体视显
          基因敲除等），通过抑制肿瘤干细胞的干性、内源性或外                           微镜购自德国Leica公司。
                                                              1.2 主要药品与试剂
          源性信号传递、体内致瘤性等途径达到治疗肿瘤的
                                                                  小檗碱（货号 B226165，纯度 98%）购自上海玻尔化
          目的  [4―5] 。
                                                              学试剂有限公司；全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，
              小檗碱，亦称黄连素，是从中药黄连中分离的一种
                                                              ATRA）（货号R106320-25g）购自上海阿拉丁生化科技有
          季铵型生物碱。小檗碱具有广泛的抗癌作用，包括减少
                                                              限公司。DMEM/F12 培养基、B27 补充剂（50×）（批号
          细胞增殖、抑制细胞转移并诱导细胞凋亡等                    [6―7] 。本团
                                                              分别为 6123006、2670457）均购自美国 Gibco 公司；人表
          队在针对抗肿瘤干细胞的药效实验中发现，小檗碱能诱
                                                              皮生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子（批号分别为
          导肿瘤干细胞肿胀膨大、膜起泡，该现象与细胞焦亡现
                                                              CM745505、CM735737）均购自乔默生物技术（上海）有
          象非常相似。细胞焦亡是一种独特的程序性细胞死亡，
                                                              限公司；重组人胰岛素干粉（批号 L410909）购自上海源
          其依赖于消皮素（gasdermin，GSDM）的介导，GSDM 家
                                                              培生物科技股份有限公司；FITC荧光CD44抗体（CD44-
          族蛋白激活后释放的氮端片段可通过寡聚并易位插入
                                                              FITC）和 PE 荧光 CD133 抗体（CD133-PE）（批号分别为
          胞膜，形成孔洞，进而使DNA断裂、染色质凝集、细胞肿
                                                              B378954、B389953）均购自美国 BioLegend公司；兔消皮
          胀、胞质外流、细胞膜破裂、细胞内容物渗出，从而导致
                                                              素 E（gasdermin E，GSDME）多克隆抗体、兔性别决定区
                  [8]
          细胞死亡 。
                                                              Y 框 蛋 白 2（sex  determining  region  Y  box  protein  2，
              中药进入生物体内经过代谢可能会转化成毒性较
                                                              SOX2）多克隆抗体（批号分别为 13075-1-AP、11064-1-
          强的成分，通过多途径、多靶点对机体产生整体调节作                            AP）均 购 自 美 国 Proteintech 公 司 ；消 皮 素 E 氮 端
          用。斑马鱼是被广泛认可的用于高效评价药物毒理作                            （GSDME-N）单克隆抗体（批号 AF4016）购自江苏亲科
          用的模型动物，既具有快速、高效、费用低等优势，又能                           生物研究中心有限公司；兔胱天蛋白酶 3（caspase-3）多
          有效模拟完整代谢系统下中药的在体综合效应，弥补体                            克隆抗体、兔裂解胱天蛋白酶 3（cleaved-caspase-3）多克
                       [9]
          外模型的不足 。本研究以小鼠皮肤黑色素瘤 B16F10                         隆抗体（批号分别为 R04194004、N12281992）均购自沈
          细胞系分选的肿瘤干细胞为研究对象，基于小檗碱诱导                            阳万类生物科技有限公司；青链霉素混合液、兔 Nanog
          肿瘤干细胞焦亡，初步探讨小檗碱体外抑制肿瘤干细胞                            同源盒蛋白（Nanog homologous box protein，NANOG）多
          增殖的作用机制，并通过斑马鱼胚胎毒性实验对其体内                            克隆抗体（批号分别为 18K10A16、XA4779BP11374）购
          安全性进行初步评价，以期为基于肿瘤干细胞的肿瘤治                            自武汉博士德生物工程有限公司；鼠八聚体结合转录因
          疗策略提供实验依据和思路。                                       子 4（octamer-binding transcription factor 4，OCT4）单克


          · 1444 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12                            中国药房  2024年第35卷第12期
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