Page 38 - 《中国药房》2024年8期
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0.05  or  P＜0.01）；  the  other  quantitative  indicators  in  serum  and  vascular  tissue  were  significantly  reversed  in  groups  of  total
          flavonoids  from  R.  multiflora  root （P＜0.05  or  P＜0.01），  and  pathological  damage  of  vascular  tissue  was  significantly  relieved.
          CONCLUSIONS  Total  flavonoids  from  R.  multiflora  root  can  significantly  improve  vascular  injury  in  RA  model  rats，  and  its
          mechanism may be related to reducing the protein expression of TLR4 in vascular tissue and inhibiting the activation of IL-6/JAK2/
          STAT3 signaling pathway.
          KEYWORDS     total flavonoids from Rosa multiflora root； rheumatoid arthritis； inflammation； vascular injury； TLR4； IL-6/JAK2/
          STAT3 signaling pathway


              类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见            大鼠 IL-6 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号
          且持续的关节炎症，其不仅影响关节，而且常累及心血                            1331431330）购 自 武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ；
                           [1]
          管等其他器官/系统 。高脂饮食作为RA的风险因素之                           ICAM-1、VCAM-1 ELISA 试剂盒（批号均为 202303）均
                                                [2]
          一，与炎症反应紧密相关，并可加剧血管损伤 。在炎症                           购自郑州创生生物工程有限公司；RIPA裂解液、BCA蛋
          进展过程中，黏附分子[如细胞间黏附分子 1（intercel-                     白定量试剂盒、ECL化学发光试剂盒、兔源JAK2单克隆
          lular adhesion molecule-1，ICAM-1）和血管细胞黏附分           抗体、兔源STAT3单克隆抗体（批号分别为CR2206025、
          子 1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）]在血    CR2206149、CR2302076、AC220901093、AC220901053）
                               [3]
          管中的表达会明显上调 。白细胞介素 6（interleukin-6，                  均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；兔源磷酸化
          IL-6）作为一种关键的促炎细胞因子，可通过激活 Janus                      JAK2（phosphorylated JAK2，p-JAK2）单克隆抗体（批号
          激酶2（Janus kinase 2，JAK2）/信号转导及转录激活因子                3411）购自美国 Signalway Antibody 公司；兔源磷酸化
          3（signal  transduction  and  activator  of  transcription  3，  STAT3（phosphorylated STAT3，p-STAT3）单克隆抗体、兔
                                                    [4]
          STAT3）信号通路来促进血管炎症性病变的发生 。此                          源 TLR4 单克隆抗体（批号分别为 1000205-1、1035815-
          外，Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）也被证实能          1）均购自英国Abcam公司；兔源β-肌动蛋白（β-actin）单
                                                [5]
          够直接促进 IL-6 的分泌，从而加剧炎症反应 。由此可                        克隆抗体（批号 10021787）购自武汉三鹰生物技术有限
          见，IL-6/JAK2/STAT3信号通路可能是药物改善RA血管                    公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G
          损伤的关键通路。                                           （IgG）二抗（批号ATUJL0201）购自亚科因（武汉）生物技
              野蔷薇根作为传统中药，已被证实含有丰富的黄酮                          术有限公司。
                [6]
          类成分 。本课题组前期研究发现，野蔷薇根总黄酮对                            1.3 实验动物与饲料
          动脉粥样硬化大鼠受损的血管内皮细胞具有保护作用，                                SPF 级雌性 Wistar 大鼠 50 只，5 周龄，体重（100±
          且这种作用可能与其抗炎活性有关                [7―8] 。但是，野蔷薇        20）g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，动物生产
          根总黄酮是否对RA模型大鼠血管损伤具有改善作用尚                            许可证号为 SCXK（鲁）2022 0006。本实验方案经河南
          不明确。基于此，本研究拟基于 IL-6/JAK2/STAT3 信号                   省中西医结合医院实验动物伦理委员会审批，批准号为
          通路，初步探讨野蔷薇根总黄酮对 RA 模型大鼠血管损                          20230208。高脂高胆固醇高胆酸钠日粮型饲料（批号
          伤的改善作用及机制，以期为野蔷薇根总黄酮的开发利                            20230215）购自江苏省协同医药生物工程有限责任
          用提供参考。                                              公司。
          1 材料                                                2 方法
          1.1 主要仪器                                            2.1 野蔷薇根总黄酮的制备和CⅡ乳剂的配制
                                                                                                          [9]
              本研究所用主要仪器包括ELX800型全功能酶标仪                            取野蔷薇根饮片，按照本课题组前期研究方法 提
         （美国BioTek公司），2K15型冷冻离心机（德国Sigma公                     取纯化，制得野蔷薇根总黄酮（纯度为54.21%），备用。
          司），DDY-7C 型电泳仪电源、DYCF-40 型转印电泳仪                         取 CⅡ于无菌条件下用 0.1 moL/L 冰醋酸充分溶
         （北京六一生物科技有限公司），Fluorchem HD2 Western                 解，制成质量浓度为2 mg/mL的CⅡ溶液，置于4 ℃冰箱
          型成像系统（美国Alpha Innotech公司），Leica DM4000B             中保存。造模当日，将上述 CⅡ溶液和 CFA 等体积混
          型显微镜（德国Leica公司）等。                                   合，超声（功率80 W，频率20 kHz）混匀。将上述溶液置
          1.2 主要药品与试剂                                         于 4 ℃冰箱中过夜，次日观察，若不分层，表明 CⅡ乳剂
              野蔷薇根饮片（批号 20160993）购自安徽亳州药材                     配制成功，可用于后续实验，若出现分层则需要重新超
          市场，经河南省中西医结合医院中药研究所马开研究员                            声混匀。
          鉴定为蔷薇科植物野蔷薇Rosa multiflora Thunb.的干燥                2.2 动物分组、造模与给药
          根；阿司匹林肠溶片（批号 018181122，规格 0.25 mg）购                     将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林组
          自石药集团欧意药业有限公司；鸡Ⅱ型胶原（chicken                        （阳性对照，30 mg/kg，剂量根据临床等效剂量换算而得）
          type Ⅱ collagen，CⅡ；批号 H05N6J5556）购自上海源叶             和野蔷薇根总黄酮低、高剂量组（4.15、8.30 g/kg，以生药
          生物科技有限公司；完全弗氏佐剂（complete Freund’s                   量计，剂量参考文献[10]设置），每组10只。除正常对照
                                                                                                       [11]
          adjuvant，CFA；批号F5881-10ML）购自美国Sigma公司；              组外，其余各组大鼠均按如下方法复制RA模型 ：腹腔

          · 932 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 8                               中国药房  2024年第35卷第8期
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