Page 33 - 《中国药房》2024年8期

2.2.4 专属性的考察 标准品溶液（200.00 μg/mL）各 3 份，置于 10 mL 容量瓶
取 TET 标准品溶液、供试品溶液、空白纳米胶束溶 中，加入空白纳米胶束溶液1.0 mL，以流动相定容，即得
液适量，按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。 TET 质量浓度分别为 12.00、16.00、20.00 μg/mL 的样品
结果显示，杂质峰不干扰 TET 的测定，表明方法专属性 溶液共 9 份，按“2.2.3”项下色谱条件进样测定并计算回
良好。结果见图1。 收率。结果显示，上述3个质量浓度样品溶液的回收率
250 分别为100.14%、100.90%、101.28%，RSD分别为0.68%、
200
200 0.93%、0.76%（n＝3）。
150
150 2.3 FA-CS-SA/TET纳米胶束的包封率和载药量测定
mAU mAU 100
100
采用超速离心法测定载药纳米胶束的包封率（en‐
50 50
trapment efficiency，EE）和载药量（drug loading，DL）。
0 0
精密吸取 FA-CS-SA/TET 纳米胶束溶液 1.2 mL，低温离
0 5 10 15 0 5 10 15
t/min t/min 心 10 min（转速 10 000 r/min），以 0.45 μm 微孔滤膜过
A.TET标准品溶液 B.供试品溶液
250 滤；取滤液，按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，并采用外
200 标法计算未包入 TET 的量，记为 W 游。另按“2.2.2”项下
150 方法制备供试品溶液，以 0.45 μm 微孔滤膜过滤，取滤
mAU 100 液，按“2.2.3”项下色谱条件进样测得溶液中 TET 的总
50
量，记为 W 总。制备过程中，FA-CS-SA 空白纳米胶束的
0
量记为 W 载体，载药纳米胶束的投药量记为 W 药。按下式
0 5 10 15
t/min 计算分别 EE 和 DL：EE＝（W 总－W 游）/W 总×100%，DL＝
C.空白纳米胶束溶液
图1 各样品溶液的HPLC图 （W 总－W 游 ）/（W 载体+W 药 ）×100%。
2.4 FA-CS-SA/TET纳米胶束的制备工艺优化
2.2.5 标准曲线的绘制 根据前期预实验和单因素实验结果，本研究选取
取TET标准品溶液适量，以乙腈稀释成质量浓度分 FA-CS-SA 与 TET 质量比（A）、超声功率（B）和超声次数
别为 100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.12 μg/mL 的系 （C）作为考察因素，以EE（a）、DL（b）和粒径（c）的综合评
列溶液，然后按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，记录峰 分[综合评分（Y）＝0.4a/amax＋0.4b/bmax－0.2c/cmax （式中，
面积。以 TET 质量浓度为横坐标（x）、峰面积为纵坐标 amax为 EE 的最大值，bmax为 DL 的最大值，cmax为粒径的最
（y）绘制标准曲线，得到回归方程 y＝6.879 9x+0.971 1 大值）]为评价指标 ，采用L9 （3）正交表优化FA-CS-SA/
[14]
4
2
（R ＝0.999 9）。 TET 检 测 质 量 浓 度 的 线 性 范 围 为 TET 纳米胶束的制备工艺。正交实验的因素与水平见
3.12～100.00 μg/mL。 表1，实验结果见表2，方差分析结果见表3。
2.2.6 方法学考察 表1 正交实验的因素与水平
（1）精密度试验：按“2.2.1”项下方法分别制备 TET 水平 A B/W C/次
低、中、高质量浓度（4.00、50.00、80.00 μg/mL）的标准品 1 2∶1 200 100
溶液，每天进样测定 6 次，连续测定 3 d，记录峰面积，考 2 3∶1 250 200
3 4∶1 400 300
察日内和日间精密度。结果显示，TET低、中、高质量浓
表2 正交实验结果
度标准品溶液的日内精密度RSD分别为0.37%、0.10%、
因素 指标 综合评分/
0.11%（n＝6），日间精密度 RSD 分别为 0.63%、0.90%、 序号
A B C D（误差） a/% b/% c/nm 分
0.54%（n＝3），表明仪器精密度良好。（2）稳定性试验：精 1 1 1 1 1 99.85 31.02 173.9 0.62
密吸取 TET 标准品溶液（50.00 μg/mL）适量，分别于室 2 1 2 2 2 99.95 32.56 198.7 0.62
3 1 3 3 3 99.88 31.71 194.4 0.61
温下放置0、1、2、4、8、10、12、24 h时进样测定，记录峰面 4 2 1 2 3 99.20 21.97 149.3 0.53
积。结果显示，TET 峰面积的 RSD 为 0.49%（n＝8），表 5 2 2 3 1 98.74 23.11 196.8 0.50
明该溶液在室温下放置24 h内稳定。（3）重复性试验：取 6 2 3 1 2 84.91 19.63 152.8 0.44
7 3 1 3 2 98.53 16.80 219.0 0.40
FA-CS-SA/TET 纳米胶束溶液适量，按“2.2.2”项下方法 8 3 2 1 3 77.46 12.51 192.7 0.29
平行制备供试品溶液 6 份，再按“2.2.3”项下色谱条件进 9 3 3 2 1 83.22 15.64 137.7 0.40
样测定，记录峰面积，并采用外标法计算 TET 含量。结 K 1 0.617 0.518 0.450 0.507
K 2 0.490 0.469 0.516 0.487
果显示，TET 含量的 RSD 为 0.11%（n＝6），表明方法重
K 3 0.363 0.484 0.504 0.477
复性良好。（4）回收率试验：取600、800、1 000 μL的TET 极差 0.255 0.049 0.066 0.030

中国药房 2024年第35卷第8期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 8 · 927 ·