Page 35 - 《中国药房》2024年8期
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2.6 FA-CS-SA/TET纳米胶束的体外释放考察                        值-空白组OD值)×100%(细胞增殖抑制率越大,表明
              采用透析法进行FA-CS-SA/TET纳米胶束的体外释                    药物的抗炎作用越强)。应用 SPSS 22 软件进行统计分
          放研究。取 1.0 mg/mL 的 FA-CS-SA/TET 纳米胶束溶液              析,数据以 x±s 表示,两组间比较采用 t 检验。结果(图
          1.5 mL,置于透析袋内,密封后分别浸入装有40 mL释放                     8)显 示 ,TET 原 料 药 和 FA-CS-SA/TET 纳 米 胶 束 对
          介质[分别为0.2%、0.5%的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液]                    RAW264.7 细胞的增殖抑制作用均有浓度依赖趋势;在
          的离心管中,置于37 ℃恒温振荡器中均匀振荡,每种浓                         相同质量浓度下,FA-CS-SA/TET 纳米胶束组的增殖抑
          度的SDS溶液平行3份。分别于0.5、1、2、4、6、8、12、24、                制率高于 TET 原料药组[在 4~7 µg/mL 范围内,两者差
          48、72 h 时从离心管中取样 1 mL,并补充等体积的释放                    异均有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01)],表明 FA-CS-
          介质。将各时间点的样品以 0.45 μm 微孔滤膜过滤,取                      SA/TET纳米胶束比TET原料药具有更强的抗炎作用。
          滤液,按“2.2.3”项下色谱条件进样分析,并采用外标法                                     TET原料药                  b
                                                                     100                       a
          计算 TET 含量,绘制体外累积释放曲线,并按下式计算                                      FA-CS-SA/TET纳米胶束  b
                                  ( C ´ V + ∑ i = n - 1 C ´ V )                        a
          TET 的累积释放度(Ln ):Ln=        n      n = 1  i  0  ×
                                            W
          100%(式中,Cn为第n个时间点样品的质量浓度,V为释                               细胞增殖抑制率/%  50
          放介质的体积,Ci为第i个时间点样品的质量浓度,V0为
          每次取样的体积,W为透析袋中TET的含量)。
              结 果(图 7)表 明 ,FA-CS-SA/TET 纳 米 胶 束 在                     0
                                                                          1   2   3    4   5   6   7
          0.2%SDS 溶液中释放较慢,72 h 内的累积释放度为                                          TET质量浓度/(μg/mL)
         (37.28±4.36)%;而在 0.5%SDS 溶液中释放较快,72 h                  a:与相同质量浓度TET原料药相比,P<0.01;b:与相同质量浓度
                                                             TET原料药相比,P<0.05。
          内的累积释放度为(79.49±3.43)%。
                                                             图8 TET原料药和FA-CS-SA/TET纳米胶束的体外抗
                   100                    0.2%SDS溶液
                                          0.5%SDS溶液               炎作用考察结果(x±s,n=6)
                   80
                                                             3 讨论
                   60
                  L n /%                                         由于 FA 本身反应活性较弱,因此本课题组以 DCC
                   40
                                                             为缩合剂,利用FA、NHS和DCC制备出FA活性酯,然后
                   20
                                                             以 FA 活化酯末端的羧基与 CS-SA 上的氨基进行反应,
                    0                                        最终得到偶联物 FA-CS-SA。FA-CS-SA 作为两亲性载
                     0                    20                   40                    60                   80
                                   t/h                       体,可包载难溶性药物以增加其溶解性,因此在本研究
           图7 FA-CS-SA/TET的体外释放曲线(x±s,n=3)                   中,笔者以 FA-CS-SA 为载体,采用超声法制备了 FA-
          2.7 FA-CS-SA/TET纳米胶束的体外抗炎作用考察                      CS-SA/TET纳米胶束。
          2.7.1 细胞培养                                             以超声法制备载药纳米胶束的影响因素有载体与
              以含 10%FBS 的 DMEM 培养基复苏 RAW264.7 细              药物的比例、温度、热处理、超声功率和次数等。本课题
          胞,然后在37 ℃、5%CO2细胞培养箱中培养。                           组通过预实验发现,FA-CS-SA与TET的质量比、超声功
          2.7.2 细胞增殖抑制率的检测                                   率和次数为主要因素,且 FA-CS-SA 与 TET 质量比的影
                                                  4
              将对数生长期的RAW264.7细胞,按8×10 个/孔接                   响最大。由于正交实验具有高效性、简洁性、代表性以
                                                                                    [18]
          种于96孔板中,并随机分为对照组(加细胞和培养基,不                         及数据点分布均匀的优点 ,因此本研究采用正交实验
          加药物)、不同质量浓度 TET 原料药组(1、2、3、4、5、6、7                 法,以FA-CS-SA与TET质量比、超声功率和超声次数作
          µg/mL)和不同质量浓度的FA-CS-SA/TET组(1、2、3、4、               为考察因素对FA-CS-SA/TET纳米胶束的制备工艺进行
          5、6、7 µg/mL,以TET计),并设置空白组(不加细胞和药                   优化。结果显示,以最优工艺制备的 FA-CS-SA/TET 纳
          物,加培养基),每组设置6个复孔。除对照组和空白组                          米胶束带有阳离子电荷,粒径较小,EE 和 DL 较高。进
          外,其余各组加入相应药物(质量浓度根据预实验结果                           一步体外实验发现,FA-CS-SA/TET 在 0.5%SDS 溶液中
          设置)和 1 000 ng/mL 脂多糖(以诱导炎症 );培养 24 h               释 放 较 快 ,其 在 72  h 时 的 累 积 释 放 度 为(79.49±
                                             [17]
          后,每孔加入CCK-8试剂10 µL,继续培养1 h,采用酶标                    3.43)%。在体外抗炎实验中发现,当 TET 质量浓度为
          仪于 450 nm 波长处测定各孔光密度(optical density,              4~7 µg/mL 时,FA-CS-SA/TET 纳米胶束对巨噬细胞
          OD)值,并按下式计算细胞增殖抑制率:细胞增殖抑制                          RAW264.7 的增殖抑制率显著高于 TET 原料药,表明其
          率(%)=(对照组 OD 值-实验组 OD 值)/(对照组 OD                   具有较好的抗炎作用。


          中国药房  2024年第35卷第8期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 8    · 929 ·
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