Page 48 - 《中国药房》2024年7期

brain tissue in rats， with a large amount of inflammatory cell infiltration； the positive expression of NLRP3 protein in brain tissue
of rats obviously increased. Compared with the model group， the levels of the above indicators in the medium-dose and high-dose
groups of Longshengzhi capsules， as well as the Nimodipine group， were reversed to varying degrees， and most differences were
statistically significant （P＜0.05 or P＜0.01）； the pathological morphology observation showed a significant improvement， and the
positive expression of NLRP3 protein in the brain tissue of rats was obviously reduced. CONCLUSIONS Longshengzhi capsules
may inhibit TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway and neuroinflammatory response， thereby achieving a protective effect against
cerebral ischemia-reperfusion injury in rats.
KEYWORDS Longshengzhi capsule； cerebral ischemia-reperfusion injury； inflammatory factor； TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling
pathway

脑卒中又称“中风”，是以突然发病、迅速出现局限 1.2 主要药品与试剂
性或弥散性脑功能缺损为共同临床特征的脑血管疾病， 龙生蛭胶囊（批号150914，规格0.4 g）购自陕西步长
分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中 制药有限公司；尼莫地平片（批号180402，规格20 mg）购
较常见，是我国成年人残疾的首要原因，严重威胁着人 自山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司；TTC 试剂（批
类的健康和生命安全 。缺血性脑卒中可引发兴奋性氨 号 298-96-4）购自美国 Sigma 公司；苏木素-伊红（HE）染
[1]
基酸毒性作用、离子失衡、自由基反应和炎症反应等一 液（货号 BL700A）购自兰杰柯科技有限公司；通用型组
系列复杂病理过程。目前，相关证据表明，炎症反应是 织固定液、RNA 提取液、兔源 NLRP3 多克隆抗体、辣根
[2]
影响缺血性脑卒中发生发展的重要因素 。脑缺血过程 过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号分别
中，Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）可通过介导 为G1101、G3013、GB114320-100、GB23301）均购自武汉
核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的激活来促进其下 赛维尔生物科技有限公司；IL-6和肿瘤坏死因子α（tumor
游炎症因子白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β 和 necrosis factor-α，TNF-α）酶联免疫吸附测定（ELISA）试
NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3（NOD-like recep‐ 剂盒、BCA 蛋白定量试剂盒（批号分别为 20220609、
20220514、20220815）均购自南京建成生物科技有限公
tor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）
司；RIPA 裂解液、特超敏 ECL 化学发光试剂盒、细胞核
释放，从而放大炎症信号，引发炎症反应，最终造成缺血
[3]
后脑组织损伤 。 蛋白与细胞质蛋白抽提试剂盒（批号分别为 P0013B、
P0018S、P0027B）均购自南京碧云天生物技术有限公
中医认为，脑卒中由风、痰、瘀血阻滞经络所致。龙
司；鼠源 TLR4 单克隆抗体、兔源 NF-κB 单克隆抗体、兔
生蛭胶囊由黄芪、水蛭、桃仁等12味中药材组成，具有补
源磷酸化 NF-κB（phosphorylated NF-κB，p-NF-κB）单克
气活血、逐瘀通络的功效，临床用于动脉硬化性脑梗死
隆抗体（批号分别为ab22048、ab32536、ab76302）均购自
恢复期，症见半身不遂、偏身麻木、口角歪斜、语言不利 英国 Abcam 公司；鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH，
[4]
等 。本研究团队前期围绕龙生蛭胶囊抗动脉粥样硬化
内参）单克隆抗体、兔源组蛋白 H3（histone H3，核内参）
及抗脑缺血再灌注损伤进行了研究，结果表明，该药具
多克隆抗体、HRP 标记的山羊抗鼠 IgG 二抗（批号分别
有降脂、抑制系统炎症反应、抗动脉粥样硬化的作用，同
为 YM3029、YK0006、RS0002）均购自美国 ImmunoWay
时其可通过抗氧化作用来保护脑缺血再灌注损伤大鼠
公司。
的脑组织 [4―5] 。本研究拟构建大鼠大脑中动脉阻塞
1.3 实验动物
（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，观察龙
SPF级雄性SD大鼠80只，体重250～280 g，购自西
生蛭胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用，并基 安交通大学动物中心，动物生产许可证号为SCXK（陕）
于 TLR4/NF-κB/NLRP3 信号通路探讨其潜在的作用机
2018-001，合格证号为 2879。实验动物饲养条件符合
制，以期为龙生蛭胶囊治疗缺血性脑卒中提供理论 《实验动物管理条例》，控制室温在18～20 ℃，相对湿度
依据。 在55%～60%，大鼠自由进食、进水。本研究经西安交通
1 材料 大学医学部生物医学伦理委员会审查批准（批件号
1.1 主要仪器 2021-1297）。
68907型大鼠脑模具购自深圳市瑞沃德生命科技股 2 方法
份有限公司；JA10003B 型电子精密天平购自上海精密 2.1 造模、分组与给药
仪器仪表有限公司；CFX 型荧光定量 PCR 仪、Universal 采用改良线栓法制作大鼠 MCAO 模型 。大鼠腹
[6]
Hood Ⅲ型化学发光成像仪、PowerPac Basic型电泳仪均 腔注射麻醉，固定于手术台上，于颈部正中纵向切口，逐
购自美国 Bio-Rad 公司；Fresco 17 型冷冻高速离心机、 层钝性分离出右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉；结扎
1510 型全自动酶标仪均购自美国 Thermo Fisher Scien‐ 颈总动脉和颈外动脉近心端，动脉夹夹闭颈总动脉远心
tific公司；ECLIPSE Ci-L型显微镜购自日本Nikon公司。 端，在动脉夹近心端打结剪一小口，将线栓送入颈总动

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