Page 43 - 《中国药房》2024年7期
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r/min 离心 10 min，取上清液，使用全自动生化分析仪检                   3 结果
          测血清中 SCr、BUN 水平，使用酶标仪检测血清中氧化                       3.1 原花青素对AKI大鼠血清和尿液生化指标的影响
          应激指标 MDA、SOD、GSH-Px 水平；收集各组大鼠 24 h                     与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中 SCr、

          尿液，使用全自动生化分析仪检测24 h尿液中UP水平。                        BUN水平和24 h尿液中UP水平均显著升高（P＜0.05）；
          具体方法按试剂盒说明书操作。                                     与模型对照组比较，各给药组大鼠血清中 SCr、BUN 水
          2.3 大鼠肾脏指数测定及肾组织病理观察                               平和24 h尿液中UP水平均显著降低（P＜0.05），且原花
              各组大鼠尿液收集后，颈椎脱臼处死，称体重和肾                         青素的作用存在剂量依赖性（P＜0.05）；与盐酸贝那普
          脏质量，计算肾脏指数：肾脏指数＝[肾脏质量（g）/体重                        利 5 mg/kg 组比较，原花青素 200 mg/kg 组大鼠血清中
         （g）]×100%。每组随机选取 5 只大鼠的肾组织，置于                       SCr、BUN 水平和 24 h 尿液中 UP 水平差异均无统计学
          4% 多聚甲醛中固定 24 h 后脱水，石蜡包埋，切片（4                      意义（P＞0.05）。结果见表1。

          µm），使用二甲苯进行脱蜡，梯度乙醇处理后进行HE染                         表1 原花青素对AKI大鼠血清和尿液生化指标的影响
          色，脱水，封片，于显微镜下观察，根据肾损伤面积百分                               （x±s，n＝10）
                                                              组别             SCr/（µmol/L）  BUN/（mmol/L）  UP/（mg/L）
                                 [10]
          比进行病理评分，评分标准 ：无肾损伤，0分；肾损伤面
                                                              正常对照组           50.53±5.41  5.10±1.12  731.22±35.17
          积百分比≤10%，1 分；肾损伤面积百分比 11%～25%，2                     模型对照组          135.80±8.72 a  16.78±1.41 a  1 980.15±304.83 a
                                                              盐酸贝那普利5 mg/kg组  59.57±5.06 bcd  6.19±1.55 bcd  824.63±37.22 bcd
          分；肾损伤面积百分比 26%～45%，3 分；肾损伤面积百
                                                              原花青素50 mg/kg组  109.33±6.09 b  14.02±1.66 b  1 443.44±249.50 b
          分比46%～75%，4分；肾损伤面积百分比≥76%，5分。                       原花青素100 mg/kg组  87.29±5.44 bc  10.63±1.14 bc  1 073.27±130.19 bc
                                                              原花青素200 mg/kg组  61.05±4.76 bcd  6.82±1.52 bcd  830.24±35.15 bcd
          2.4 大鼠肾组织细胞凋亡率检测
                                                                a：与正常对照组比较，P＜0.05；b：与模型对照组比较，P＜0.05；
              取“2.3”项下各组大鼠肾组织切片，经脱蜡、梯度乙                      c：与原花青素50 mg/kg组比较，P＜0.05；d：与原花青素100 mg/kg组比
          醇处理后用磷酸盐缓冲液冲洗，加入 TUNEL 溶液孵育                        较，P＜0.05。
          1 h后用二氨基联苯胺显色10 min，苏木精复染，封片，使                     3.2 原花青素对AKI大鼠血清中氧化应激指标的影响

          用显微镜观察，随机选取5个视野计数阳性细胞数（呈棕                              与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中 MDA
          褐色），并计算细胞凋亡率：细胞凋亡率（%）＝阳性细胞                         水平显著升高，SOD、GSH-Px 水平均显著降低（P＜
          数/总细胞数×100%。                                       0.05）；与模型对照组比较，各给药组大鼠血清中 MDA
          2.5 大鼠肾组织中凋亡相关蛋白和SIRT1/AMPK信号                      水平均显著降低，SOD、GSH-Px 水平均显著升高（P＜
          通路相关蛋白表达检测                                         0.05），且原花青素的作用存在剂量依赖性（P＜0.05）；与
              采用免疫印迹法进行检测。取“2.3”项下各组剩余                       盐酸贝那普利5 mg/kg组比较，原花青素200 mg/kg组大
          5 只大鼠的肾组织，经裂解液裂解后提取总蛋白，经                           鼠血清中 MDA、SOD、GSH-Px 水平差异均无统计学意
          BCA 法检测总蛋白含量；取上样缓冲液与蛋白混匀后                          义（P＞0.05）。结果见表2。

          100 ℃变性5 min，以每孔40 µg的量进行凝胶电泳，低温                   表2 原花青素对AKI大鼠血清中氧化应激指标的影响
          转移蛋白至聚偏氟乙烯膜上，5% 的脱脂奶粉封闭 1 h                             （x±s，n＝10）
                                                              组别            MDA/（nmol/mg）  SOD/（U/mg）  GSH-Px/（U/mg）
          后，加入兔抗Caspase-3、Bax、SIRT1、p-SIRT1、AMPK、p-
                                                              正常对照组          2.58±0.34   125.71±10.12  46.33±3.22
          AMPK、β -actin 一 抗（稀 释 比 例 均 为 1∶1  000），孵 育         模型对照组          6.31±0.63 a  71.63±6.14 a  21.14±2.03 a
                                                              盐酸贝那普利5 mg/kg组  3.04±0.40 bcd  120.16±10.23 bcd  44.55±3.42 bcd
         （4 ℃）过夜；用磷酸盐缓冲液清洗3次后加入羊抗鼠IgG
                                                              原花青素50 mg/kg组  5.30±0.35 b  86.08±5.57 b  26.17±2.06 b
          二抗（稀释比例为1∶3 000），孵育2 h，显色，于凝胶成像                     原花青素100 mg/kg组  4.25±0.39 bc  101.05±6.44 bc  35.23±2.31 bc
                                                              原花青素200 mg/kg组  3.14±0.25 bcd  118.28±9.31 bcd  43.98±3.17 bcd
          仪上成像。采用 Image J 软件分析，以目的蛋白与内参
                                                                a：与正常对照组比较，P＜0.05；b：与模型对照组比较，P＜0.05；
          蛋白（β-actin）的灰度值比值评价目的蛋白的表达水平，
                                                             c：与原花青素50 mg/kg组比较，P＜0.05；d：与原花青素100 mg/kg组比
          再以 p-SIRT1 与 SIRT1、p-AMPK 与 AMPK 的表达水平             较，P＜0.05。
          比值评价SIRT1、AMPK蛋白的磷酸化水平。                            3.3 原花青素对AKI大鼠肾脏指数的影响

          2.6 统计学处理                                              与正常对照组比较，模型对照组大鼠肾脏指数显著
              采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。计量资料                     增加（P＜0.05）；与模型对照组比较，各给药组大鼠肾脏
          以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步                        指数均显著降低（P＜0.05），且原花青素的作用存在剂
          两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。                          量依赖性（P＜0.05）；与盐酸贝那普利 5 mg/kg 组比较，


          中国药房  2024年第35卷第7期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 7    · 809 ·
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