Page 84 - 《中国药房》2024年6期
P. 84
2.4 腹膜组织病理学观察 表1 各组大鼠腹膜 UF 和 MTG 的检测结果(x±s,n=
每组取6只大鼠的腹膜组织,用4%多聚甲醛固定, 12)
制作石蜡切片。石蜡切片行 HE 染色,封片后使用显微 组别 UF/mL MTG/(mmoL/kg)
Control组 16.35±1.85 11.23±1.20
镜观察各组大鼠腹膜组织病理变化。石蜡切片行 Mas‐
PD组 5.16±0.74 a 20.56±2.13 a
son 染色,封片后使用光学显微镜观察各组大鼠腹膜组 APS-L组 8.74±0.93 b 17.38±1.82 b
织纤维化变化;每个切片随机选择5个视野计算腹膜厚 APS-H组 14.65±1.54 bc 12.24±1.25 bc
度及胶原纤维沉积占比。 APS-H+DMOG组 10.67±1.16 d 16.54±1.71 d
2.5 腹膜组织微血管密度及α-SMA、LN蛋白表达检测 a:与Control组比较,P<0.05;b:与PD组比较,P<0.05;c:与APS-L
组比较,P<0.05;d:与APS-H组比较,P<0.05。
取“2.4”项下石蜡切片,脱蜡复水后,加入 CD31、
表2 各组大鼠血清中Scr和BUN水平的检测结果(x±
α-SMA、LN一抗(稀释比例分别为1∶50、1∶1 000、1∶500),
s,n=12)
4 ℃孵育;随后加入二抗(稀释比例为 1∶2 000),室温孵
组别 Scr/(μmol/L) BUN/(mmol/L)
育,行DAB、苏木精染色,漂洗后,干燥封片,使用显微镜 Control组 30.22±2.76 4.32±0.33
观察并采集图片。显微镜下观察CD31的染色情况并计 PD组 86.74±7.64 a 9.76±0.89 a
数被染色的阳性微血管数,以5个视野阳性微血管数的 APS-L组 62.17±5.51 b 7.34±0.63 b
APS-H组 38.52±3.12 bc 5.16±0.46 bc
均值为微血管密度。使用 Image J 软件分析,以光密度
APS-H+DMOG组 55.31±4.83 d 6.45±0.57 d
值表示α-SMA、LN蛋白的表达水平。
a:与Control组比较,P<0.05;b:与PD组比较,P<0.05;c:与APS-L
2.6 腹膜组织中HIF-11α/VEGF信号通路相关蛋白检测 组比较,P<0.05;d:与APS-H组比较,P<0.05。
取各组剩余6只大鼠的腹膜组织,研磨后离心,取上
3.3 APS对大鼠腹膜组织病理变化的影响
清液,检测蛋白浓度,煮沸变性,电泳分离,转膜,封
Control 组大鼠腹膜组织间皮细胞排列整齐、紧密;
闭,加入 HIF-1α、VEGF、GAPDH 一抗(稀释比例分别为
与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜组织结构松散,腹膜
1∶500、1∶500、1∶1 000),4 ℃孵育;加入二抗(稀释比例
间皮细胞脱落,腹膜层及间皮下基质增厚,大量成纤维
为 1∶2 000),室温孵育,再加入 ECL 共孵育,曝光显影。
样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积;与
使用 Image J 软件采集图像并分析条带灰度值,以目的
PD 组比较,APS-L 组、APS-H 组大鼠只有少部分腹膜间
蛋白与内参蛋白(GAPDH)的灰度值比值表示目的蛋白
皮细胞排列不整齐并有脱落,腹膜组织腹膜层及间皮
的表达水平。
下基质增厚减少,细胞浸润减少;与 APS-H 组比较,
2.7 统计学处理
APS-H+DMOG 组大鼠腹膜组织松散,间皮细胞脱落增
采用SPSS 20.0软件进行分析。实验数据以x±s表
多,腹膜层及间皮下基质增厚,细胞浸润增多。结果
示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采
见图1。
用LSD-t检验。检验水准α=0.05。
3.4 APS对大鼠腹膜组织纤维化的影响
3 结果
与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜厚度和胶原纤维
3.1 APS对大鼠腹膜UF和MTG的影响
沉积占比均显著增加(P<0.05);与 PD 组比较,APS-L
与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜 UF 显著降低,
组、APS-H组大鼠腹膜厚度和胶原纤维沉积占比均显著
MTG 显著升高(P<0.05);与 PD 组比较,APS-L 组、
减少(P<0.05),且 APS-H 组改善效果优于 APS-L 组
APS-H 组大鼠腹膜 UF 均显著升高,MTG 均显著降低
(P<0.05),且 APS-H 组改善效果优于 APS-L 组(P< (P<0.05);与 APS-H 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠腹
0.05);与 APS-H 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠腹膜 UF 膜厚度和胶原纤维沉积占比均显著增加(P<0.05)。结
显著降低,MTG显著升高(P<0.05)。结果见表1。 果见图2和表3。
3.2 APS对大鼠血清中Scr和BUN水平的影响 3.5 APS对大鼠腹膜组织微血管密度的影响
与 Control 组比较,PD 组大鼠血清中 Scr 和 BUN 水 与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜组织微血管密度
平均显著升高(P<0.05);与PD组比较,APS-L组、APS- 显著升高(P<0.05);与 PD 组比较,APS-L 组、APS-H 组
H组大鼠血清中Scr和BUN水平均显著降低(P<0.05), 大鼠腹膜组织微血管密度均显著降低(P<0.05),且
且 APS-H 组改善效果优于 APS-L 组(P<0.05);与 APS- APS-H 组改善效果优于 APS-L 组(P<0.05);与 APS-H
H 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠血清中 Scr 和 BUN 水 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠腹膜组织微血管密度显
平均显著升高(P<0.05)。结果见表2。 著升高(P<0.05)。结果见图3和表4。
· 714 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 6 中国药房 2024年第35卷第6期