Page 84 - 《中国药房》2024年6期
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2.4 腹膜组织病理学观察                                       表1 各组大鼠腹膜 UF 和 MTG 的检测结果(x±s,n=
              每组取6只大鼠的腹膜组织,用4%多聚甲醛固定,                              12)
          制作石蜡切片。石蜡切片行 HE 染色,封片后使用显微                          组别                  UF/mL            MTG/(mmoL/kg)
                                                              Control组           16.35±1.85         11.23±1.20
          镜观察各组大鼠腹膜组织病理变化。石蜡切片行 Mas‐
                                                              PD组                5.16±0.74 a        20.56±2.13 a
          son 染色,封片后使用光学显微镜观察各组大鼠腹膜组                          APS-L组             8.74±0.93 b        17.38±1.82 b
          织纤维化变化;每个切片随机选择5个视野计算腹膜厚                            APS-H组             14.65±1.54 bc      12.24±1.25 bc
          度及胶原纤维沉积占比。                                         APS-H+DMOG组        10.67±1.16 d       16.54±1.71 d
          2.5 腹膜组织微血管密度及α-SMA、LN蛋白表达检测                           a:与Control组比较,P<0.05;b:与PD组比较,P<0.05;c:与APS-L
                                                              组比较,P<0.05;d:与APS-H组比较,P<0.05。
              取“2.4”项下石蜡切片,脱蜡复水后,加入 CD31、
                                                              表2 各组大鼠血清中Scr和BUN水平的检测结果(x±
          α-SMA、LN一抗(稀释比例分别为1∶50、1∶1 000、1∶500),
                                                                   s,n=12)
          4 ℃孵育;随后加入二抗(稀释比例为 1∶2 000),室温孵
                                                              组别                 Scr/(μmol/L)      BUN/(mmol/L)
          育,行DAB、苏木精染色,漂洗后,干燥封片,使用显微镜                         Control组           30.22±2.76         4.32±0.33
          观察并采集图片。显微镜下观察CD31的染色情况并计                           PD组                86.74±7.64 a       9.76±0.89 a
          数被染色的阳性微血管数,以5个视野阳性微血管数的                            APS-L组             62.17±5.51 b       7.34±0.63 b
                                                              APS-H组             38.52±3.12 bc      5.16±0.46 bc
          均值为微血管密度。使用 Image J 软件分析,以光密度
                                                              APS-H+DMOG组        55.31±4.83 d       6.45±0.57 d
          值表示α-SMA、LN蛋白的表达水平。
                                                                 a:与Control组比较,P<0.05;b:与PD组比较,P<0.05;c:与APS-L
          2.6 腹膜组织中HIF-11α/VEGF信号通路相关蛋白检测                     组比较,P<0.05;d:与APS-H组比较,P<0.05。
              取各组剩余6只大鼠的腹膜组织,研磨后离心,取上
                                                              3.3 APS对大鼠腹膜组织病理变化的影响
          清液,检测蛋白浓度,煮沸变性,电泳分离,转膜,封
                                                                  Control 组大鼠腹膜组织间皮细胞排列整齐、紧密;
          闭,加入 HIF-1α、VEGF、GAPDH 一抗(稀释比例分别为
                                                              与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜组织结构松散,腹膜
          1∶500、1∶500、1∶1 000),4 ℃孵育;加入二抗(稀释比例
                                                              间皮细胞脱落,腹膜层及间皮下基质增厚,大量成纤维
          为 1∶2 000),室温孵育,再加入 ECL 共孵育,曝光显影。
                                                              样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积;与
          使用 Image J 软件采集图像并分析条带灰度值,以目的
                                                              PD 组比较,APS-L 组、APS-H 组大鼠只有少部分腹膜间
          蛋白与内参蛋白(GAPDH)的灰度值比值表示目的蛋白
                                                              皮细胞排列不整齐并有脱落,腹膜组织腹膜层及间皮
          的表达水平。
                                                              下基质增厚减少,细胞浸润减少;与 APS-H 组比较,
          2.7 统计学处理
                                                              APS-H+DMOG 组大鼠腹膜组织松散,间皮细胞脱落增
              采用SPSS 20.0软件进行分析。实验数据以x±s表
                                                              多,腹膜层及间皮下基质增厚,细胞浸润增多。结果
          示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采
                                                              见图1。
          用LSD-t检验。检验水准α=0.05。
                                                              3.4 APS对大鼠腹膜组织纤维化的影响
          3 结果
                                                                  与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜厚度和胶原纤维
          3.1 APS对大鼠腹膜UF和MTG的影响
                                                              沉积占比均显著增加(P<0.05);与 PD 组比较,APS-L
              与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜 UF 显著降低,
                                                              组、APS-H组大鼠腹膜厚度和胶原纤维沉积占比均显著
          MTG 显著升高(P<0.05);与 PD 组比较,APS-L 组、
                                                              减少(P<0.05),且 APS-H 组改善效果优于 APS-L 组
          APS-H 组大鼠腹膜 UF 均显著升高,MTG 均显著降低
         (P<0.05),且 APS-H 组改善效果优于 APS-L 组(P<                 (P<0.05);与 APS-H 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠腹
          0.05);与 APS-H 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠腹膜 UF               膜厚度和胶原纤维沉积占比均显著增加(P<0.05)。结
          显著降低,MTG显著升高(P<0.05)。结果见表1。                         果见图2和表3。
          3.2 APS对大鼠血清中Scr和BUN水平的影响                           3.5 APS对大鼠腹膜组织微血管密度的影响
              与 Control 组比较,PD 组大鼠血清中 Scr 和 BUN 水                 与 Control 组比较,PD 组大鼠腹膜组织微血管密度
          平均显著升高(P<0.05);与PD组比较,APS-L组、APS-                   显著升高(P<0.05);与 PD 组比较,APS-L 组、APS-H 组
          H组大鼠血清中Scr和BUN水平均显著降低(P<0.05),                      大鼠腹膜组织微血管密度均显著降低(P<0.05),且
          且 APS-H 组改善效果优于 APS-L 组(P<0.05);与 APS-              APS-H 组改善效果优于 APS-L 组(P<0.05);与 APS-H
          H 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠血清中 Scr 和 BUN 水                 组比较,APS-H+DMOG 组大鼠腹膜组织微血管密度显
          平均显著升高(P<0.05)。结果见表2。                               著升高(P<0.05)。结果见图3和表4。


          · 714 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 6                               中国药房  2024年第35卷第6期
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