Page 83 - 《中国药房》2024年6期
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腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）常用于终末期肾            Santa Cruz 公司；兔源层粘连蛋白（laminin，LN）单克隆
          病的治疗，全球有 11%～15% 的终末期肾病患者接受                        抗体（批号 LM-0821R）购自上海联迈生物工程有限公
                                                 [1]
          PD治疗，在中国接受PD的人群也在逐年增多 。PD的                         司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、血小板内皮细
          前提是腹膜功能具有完整性，但是随着 PD 治疗时间的                         胞黏附分子 1（又称 CD31）单克隆抗体和辣根过氧化物
          延长，非生理性透析液长期使用，使得患者腹膜通透性                           酶 标 记 的 山 羊 抗 兔 IgG（H&L）二 抗（批 号 分 别 为
          随之增加，腹膜超滤功能随之衰竭，最终导致PD治疗失                          ab181602、ab182981、ab6702）均购自英国Abcam公司。
          败。其中超滤功能衰竭是终末期肾病患者PD治疗失败                           1.3 实验动物
          的主要原因，而腹膜纤维化及腹膜血管新生在其发生过                               SPF级SD雄性大鼠65只，体重200～250 g，购自湖
                          [2]
          程中起着重要作用 。低氧诱导因子 1α（hypoxia-indu-                  北贝恩特生物科技有限公司，生产许可证号为 SCXK
          cible  factor-1α，HIF-1α）/血 管 内 皮 生 长 因 子（vascular    （鄂）2021-0027。大鼠饲养环境：温度22～24 ℃，相对湿

          endothelial growth factor，VEGF）信号通路参与器官组织          度50%～60%，正常光照，自由摄食饮水。本研究已获得
          纤维化及血管生成进程，抑制HIF-1α/VEGF信号通路可                      武汉华联科生物技术有限公司动物伦理委员会审批，伦
                                                       [3]
          以抑制肾小管上皮细胞凋亡，从而抑制肾脏纤维化 。                           理批件号为HLK-202203213。
          由此推测，HIF-1α/VEGF信号通路也可能参与腹膜纤维                      2 方法
          化进程。                                               2.1 分组、建模与给药
              黄芪多糖（Astragalus polysaccharide，APS）是黄芪             大鼠适应性喂养 1 周后，取 12 只作为正常对照组
          的主要活性成分，具有抗炎、抗氧化等作用，可以减轻大                         （Control组），其他53只进行造模处理：行5/6肾切除术，
                                                 [4]
          鼠肾组织的炎症反应，改善肾组织纤维化程度 ，但其具                          术后 1 周检测 Scr 和 BUN 水平显著高于正常大鼠后，在
          体机制尚不明确。有研究显示，APS 可通过抑制 HIF-                       大鼠右下腹靠近腹股沟中点处腹腔注射 1.5%PD 液 100
          1α、VEGF表达，减少肺小动脉胶原纤维沉积面积，改善                        mL/（kg·d），构建PD大鼠模型，以PD管冲洗通畅判定为
                                             [5]
          低氧诱导的肺动脉高压小鼠肺血管重构 。基于此，本                           PD 造模成功 。正常大鼠腹腔注射等体积生理盐水。
                                                                        [6]
          研究考察了APS对PD大鼠腹膜纤维化和血管生成的影                          造模期间，大鼠死亡5只。将48只造模成功的大鼠随机
          响，并基于 HIF-1α/VEGF 信号通路研究其作用机制，以                    分为模型组（PD 组）、70 mg/kg APS 组（APS-L 组）、140
          期为PD的治疗提供理论依据。                                     mg/kg APS 组（APS-H 组）、140  mg/kg APS+40  mg/kg
          1 材料                                               DMOG 组（APS-H+DMOG 组） ，每组 12 只。各给药
                                                                                       [7―8]
          1.1 主要仪器                                           组大鼠腹腔注射PD液同时灌胃相应剂量的APS及腹腔
              本研究所使用的主要仪器包括 TBA-2000FR 型全                    注射相应剂量的DMOG，Control组和PD组大鼠灌胃等
          自动生化分析仪（日本 Toshiba 公司）、BX51 型显微镜                   体积生理盐水。每天给药1次，连续4周。
         （日本Olympus公司）等。                                     2.2 腹膜功能检测
          1.2 主要药品与试剂                                            各组大鼠末次给药后，腹腔注射 4.25% 葡萄糖 PD
              APS对照品（批号R014309-100g，纯度70%）购自上                液25 mL，取0、4 h大鼠尾静脉血，测定血液中葡萄糖浓
          海易恩化学技术有限公司；HIF-1α激动剂二甲基乙二酰                        度。4 h后麻醉大鼠处死，抽吸腹腔液体计量，再打开腹
          氨基乙酸（DMOG，货号HY-15893，纯度99.77%）购自美                  腔，称量干净纱布质量，再用纱布收集腹腔内未抽净的
          国MCE公司；PD液（含2.5%葡萄糖）购自广州百特医疗                       液体计量。按下式计算大鼠腹膜超滤量（peritoneal ul‐
          用品有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（批号                          trafiltration，UF）和葡萄糖转运量（mass transfer of glu‐
          20200115）购自北京索莱宝科技有限公司；血清肌酐（se‐                    cose，MTG）：UG＝（纱布吸水后的质量－纱布的质

          rum creatinine，Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）   量）×1 mL/g+腹腔抽吸量－腹腔注射量；MTG＝（0 h葡
          试剂盒（批号分别为YS04392B、YS06475B）均购自上海                   萄糖浓度×PD 液注入体积）－（4 h 葡萄糖浓度×PD 液
          雅吉生物科技有限公司；Masson 试剂盒（批号 HR8326-                   注入体积） 。
                                                                      [9]
          EIM）购自北京百奥莱博科技有限公司；兔源 α-平滑肌                        2.3 血清中Scr和BUN水平检测
          肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）单克隆抗体                 取“2.2”项下麻醉处死前各组大鼠眼眶后静脉丛血，
         （批号19245）购自美国CST公司；兔源HIF-1α、VEGF单                   离心后取上清液，按试剂盒说明书方法操作，使用全自
          克隆抗体（批号分别为 sc-13515、sc-7269）均购自美国                  动生化分析仪检测血清中Scr和BUN水平。


          中国药房  2024年第35卷第6期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 6    · 713 ·
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