Page 78 - 《中国药房》2024年6期

三味甘露是藏医临床常用于治疗肝脏疾病的药物。 1.3 实验动物
该方最初来源于《集贤十万颂》，由土木香 Inula hele‐ SPF 级 SD 雄性大鼠，体重（200±20）g，购自西安交
nium Linn. 、寒水石（水煮）和异叶青兰 Dracocephalum 通大学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK
heterophyllum Benth 组成。其中，土木香富含倍半萜内 （陕）2018-001。大鼠在青海大学药学系实验动物房喂
酯类，具有良好的抗炎活性，还有抗肿瘤、驱虫、镇痛、保 养，每天给予标准饲料，自由进食与饮水。本研究动物
[3]
肝及降糖等多重活性 。寒水石主要成分为碳酸钙，另 实验经青海大学医学院医学科学研究伦理委员会审查
含有少量镁、锰、铁和微量锌、铜等成分，在藏医药临床 批准（伦理号2023-029）。
上主要用于治疗消化不良引起的胃病和肝胆疾病 。异 2 方法
[4]
叶青兰富含黄酮、生物碱、萜类、挥发油等活性成分，具 2.1 分组、造模及给药
[5]
有显著的抗炎、抗氧化、保护心血管、护肝等药理作用 。 将60只SD大鼠随机选取10只作为正常组，余下大
近年来，许多藏医药专家将三味甘露用于酒精性肝损 鼠按 2 mL/kg 腹腔注射 50%CCl4-玉米油溶液诱导肝纤
伤、慢性肝炎、肝纤维化与肝硬化等肝病治疗之中，临床 维化模型，每周2次。造模给药第6周开始，除去造模死
[6]
效果显著 ，但是其作用机制尚不清楚。本研究以四氯 亡的5只大鼠，将剩余大鼠随机分为模型组、水飞蓟宾组
化碳（CCl4 ）诱导大鼠肝纤维化模型，考察三味甘露对肝 （阳性对照）和三味甘露低、中、高剂量组，每组9只，造模
纤维化大鼠的改善作用及机制，旨在为肝纤维化的治疗 同时给予药物治疗。水飞蓟宾组大鼠灌胃水飞蓟宾 50
提供参考。 mg/kg（溶剂为生理盐水，给药剂量参考相关文献 设
[7]
1 材料 置），三味甘露低、中、高剂量组大鼠分别灌胃 80、250、
1.1 主要仪器 800 mg/kg三味甘露（溶剂为生理盐水，低剂量为临床等
本研究所用主要仪器包括Infinite M200 Pro型酶标 效剂量，参考《新药临床前研究的剂量设计要点》和《药
仪（瑞士Tecan公司）；BE-9008型微孔板孵育振荡器（江 理实验方法学》及2022年青海省实验动物从业人员培训
苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；PA53型荧光显 的建议，以3.16倍递增并取整），正常组和模型组大鼠灌
微镜（麦克奥迪实业集团有限公司）等。 胃等体积生理盐水。所有大鼠每天给药1次，共4周。
1.2 主要药品与试剂 2.2 样本采集
三 味 甘 露（青 药 制 备 字 Z20200689001，批 号 记录各组大鼠实验期间的日常情况。第9周实验结
20220415）购自青海省藏医院药房；水飞蓟宾胶囊（国药 束时，每组随机选取6只大鼠（剩余大鼠用于后续组学测
准字 H20040299，批号 16041601，规格 35 mg）购自天津 序，另文发表），取材前1 d大鼠禁食不禁水，实验中使用
天士力圣特制药有限公司；CCl4 （批号20220422）购自天 20% 氨基甲酸乙酯溶液麻醉大鼠，称重后腹主动脉取
津 市 富 宇 精 细 化 工 有 限 公 司 ；玉 米 胚 芽 油（批 号 血，并分离肝脏、脾脏。血液静置1 h后，离心取上清液，
20220509）购自山东西王食品有限公司；氨基甲酸乙酯 待测。肝脏和脾脏在4 ℃预冷生理盐水中漂洗2～3遍，
（批号C15354509）购自上海麦克林生化科技股份有限公 滤纸吸干后称重。然后取各组大鼠肝脏左叶同一部位，
司；苏木素-伊红（HE）、Masson、Sirus Red 染色试剂盒 用 4% 多聚甲醛溶液固定，剩余组织以液氮速冻后置
（批号分别为 20220918、20220811、20220824）均购自北 于－80 ℃冰箱保存，待测。
京索莱宝科技有限公司；丙氨酸转氨酶（alanine tran- 2.3 脏器指数计算
saminase，ALT）、天 冬 氨 酸 转 氨 酶（aspartate transami‐ 根据肝脏、脾脏质量与大鼠体重，计算脏器指数。
nase，AST）酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（批号分 脏器指数＝脏器质量/体重×100%。
别 为 ER02ZJDX2075、ER00VHH29083）均 购 自 美 国 2.4 肝组织病理形态学观察
Elabscience 公司；透明质酸（hyaluronic acid，HA）、层粘 取固定在 4% 多聚甲醛溶液中的肝组织，制成病理
连蛋白（laminin，LN）、Ⅲ型前胶原（procollagen type Ⅲ， 切片后，分别进行 HE 染色、Masson 染色和 Sirus Red 染
PCⅢ）和Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ，COL-Ⅳ）ELISA 试 色，荧光显微镜下观察大鼠肝组织病理形态学变化。
剂 盒（批 号 分 别 为 20230309、20230309、20230721 和 2.5 肝功能、肝纤维化及炎症因子指标测定
20230721）均购自南京建成生物工程研究所；白细胞介 采用 ELISA 法检测。取“2.2”项下血清样品和速冻
素 6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子 α（tumor necro‐ 肝组织，按试剂盒说明书方法测定血清中AST、ALT、PC
sis factor-α，TNF-α）和 IL-1β ELISA 试剂盒（批号均为 Ⅲ、COL-Ⅳ、IL-6、IL-1β、TNF-α 含量和肝组织中 LN、
202307）均购自江苏酶标生物科技有限公司。 HA含量。

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