Page 38 - 《中国药房》2024年6期
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1 in liver tissue were detected. RESULTS Compared with the normal control group， the model group showed large areas of white
          nodular  lesions  in  the  liver，  obvious  inflammatory  cell  infiltration  and  collagen  fiber  deposition.  The  body  weight，  the  levels  of
          SOD  and  GSH-Px  in  liver  tissue，  the  protein  and  mRNA  expressions  of  Nrf2  and  HO-1  were  significantly  lowered  in  the  model
          group （P＜0.05）；  the  liver  coefficient，  the  percentage  of  Masson  staining  positive  area， ALT  and AST  levels  of  serum  and  liver
          tissue，  MDA  level  of  liver  tissue，  the  protein  and  mRNA  expressions  of  TGF-β1，  Smad2，  ERK1  and  Keap1  were  significantly
          increased （P＜0.05）.  Compared  with  the  model  group，  the  liver  lesions  of  rats  in  each  drug  group  were  improved，  and  the  above
          quantitative  indexes  were  generally  reversed （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Breviscapine  has  a  good  intervention  effect  on  HF  rats，
          which  may  be  related  to  inhibiting  TGF- β1/Smad2/ERK1  pathway  for  anti-fibrosis  and  regulating  Keap1/Nrf2/HO-1  pathway  to
          inhibit oxidative stress.
          KEYWORDS     breviscapine； hepatic fibrosis； oxidative stress； TGF-β1/Smad2/ERK1 pathway； Keap1/Nrf2/HO-1 pathway


                                                                                                        [13]
              肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是慢性肝病发展到               Keap1解离，进而抑制下游抗氧化酶HO-1的表达 。考
          肝硬化乃至肝癌的共同途径             [1―2] 。当肝损伤发生时，受           虑到灯盏花素的活血化瘀、抗氧化作用与中医“祛瘀解
          损的上皮细胞和纤维化组织可激活肝星状细胞（hepatic                        毒”治疗思路相符，且现代医学肝肾纤维化的病机特点
          stellate cells，HSCs），并使 HSCs 转化为肌成纤维细胞              与中医肝肾藏象理论基本一致，本研究拟以秋水仙碱为
         （myofibroblast，MFB）表型，合成大量肝细胞外基质（ex‐                 阳性对照药物 ，基于 TGF-β1/Smad2/ERK1 和 Keap1/
                                                                           [14]
          tracellular matrix，ECM），致使ECM合成与降解失衡，形              Nrf2/HO-1 通路初步探讨灯盏花素干预 HF 的作用及潜
                                [3]
          成瘢痕组织，最终引发HF 。HF的西医治疗以抗病毒、                          在机制，以期为抗HF活性成分的挖掘提供参考。
          调节免疫、保护肝脏、抗纤维化等为主，旨在消除或控制                           1 材料
          病因，减轻纤维化程度，但难以逆转HF的发展进程 。                           1.1 主要仪器
                                                     [4]
                                              [5]
              中医学将 HF 归为“积聚”“胁痛”范畴 ，湿、热、瘀、
                                                                  本研究所用主要仪器有 FlexA-200 型酶标仪（杭州
          毒为其主要致病因素，治疗当以疏肝健脾、化瘀通络、清                           奥盛仪器有限公司）、CX41 型光学显微镜（日本 Olym‐
                        [6]
          热化湿（毒）为主 。灯盏花素是从中药灯盏花中提取的                                           TM
                                                              pus公司）、StepOne  plus型实时荧光定量聚合酶链式反
          有效成分，具有祛风除湿、活血化瘀、通经活络及抗氧化
                                                              应（PCR）仪（美国ABI公司）、HY1508型石蜡切片机（金
          的作用，并能扩张血管，改善脑、心、肝微循环                  [7―8] 。本课
                                                              华惠友仪器设备有限公司）等。
          题组前期研究发现，灯盏花素可改善肾纤维化 。另有
                                                  [9]
                                                              1.2 主要药品与试剂
          研究指出，灯盏花素可通过调控转化生长因子 β1 （trans‐
                                                                  灯盏花素片（批号 20220732，每片含灯盏花素 20
          forming growth factor-β1，TGF-β1 ）/Smad 通路来减轻急
                                                              mg）购自云南生物谷药业股份有限公司；秋水仙碱片（批
          性心肌梗死大鼠的心室重构，提示TGF-β1可能是灯盏花
                               [10]
          素发挥药效的潜在靶点 。TGF-β1是目前学界公认的                          号 210715，每片含秋水仙碱 0.5 mg）购自西双版纳版纳
                                                              药业有限责任公司；四氯化碳（CCl4，批号 20210612）购
          致纤维化因子之一，可通过调控 Smad 依赖及非依赖的
                                                              自天津市富宇精细化工有限公司；羧甲基纤维素钠
          胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated protein
                                                             （CMC-Na，批号 20160704）购自国药集团化学试剂有限
          kinase，ERK）通路来协同调控ECM沉积，故抑制TGF-β1
                                                              公司；丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）试
          及其介导的相关通路则可延缓甚至逆转纤维化进程 。
                                                       [11]
                                                              剂盒（批号C009-1-1）、天冬氨酸转氨酶（aspartate amino‐
          Smad2 在 TGF-β1/Smad 通路中具有重要作用，抑制肝细
          胞内Smad2的活化，能有效降低TGF-β1的表达，延缓HF                      transferase，AST）试剂盒（批号C010-1-1）、超氧化物歧化
          的发生、发展；与此同时，ERK1 能通过磷酸化 Smad2 来                     酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒（批号A001-1-2）、
          促进纤维化进展，提示TGF-β1/Smad2通路与ERK1之间                     丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒（批号 A003-1-
          存在信号交互作用 。Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 1                        2）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-
                           [12]
         （Kelch-like epichlorohydrin-associated protein 1，Keap1）/  Px）试剂盒（批号A005-1-2）均购自南京建成生物工程研
          核转录因子红系2相关因子2（nuclear factor-erythroid 2-           究所；兔免疫组化试剂盒（批号 SP-9001），DAB 显色试
          related factor 2，Nrf2）/血红素加氧酶 1（heme oxygenase-     剂盒（批号ZLI-9018），兔抗大鼠TGF-β1、Smad2、ERK1、
          1，HO-1）通路是调控体内氧化应激的重要通路之一，可                         Keap1、Nrf2、HO-1抗体（批号分别为GB13028、GB11511、
          靶向多种抗氧化酶系，经转录活化后可清除过多的活性                            GB13003、GB11847、GB113808、GB11104），辣根过氧化
          氧（reactive oxygen species，ROS），进而减轻ROS引起的           物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 G1213-100UL），
          心肌细胞损伤，在心血管疾病的治疗中具有重要作                              TriQuick 总 RNA 提取试剂（批号 R1100），cDNA 合成试
            [13]
          用 。该通路中的Nrf2是抗氧化的关键调节因子，可调                          剂盒（批号 G3330），实时荧光定量 PCR 扩增试剂（批号
          节多种抗氧化剂的表达，当氧化应激发生时，Nrf2 会与                         G3320）均购自武汉赛维尔生物科技有限公司。


          · 672 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 6                               中国药房  2024年第35卷第6期
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