Page 24 - 《中国药房》2024年5期
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心肌纤维化（myocardial fibrosis，MF）是多种心血管             号分别为 MM-0041R1、MM-0080R1），兔通用型免疫组
          疾病发展至终末期的共同病理途径，以心肌顺应性下                             化试剂盒、DAB 显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有
          降、僵硬、收缩和舒张功能减退及电生理过程紊乱引发                            限公司，批号分别为SP-9001、ZLI-9018），兔抗大鼠腺苷
                                         [1]
          的心律失常和心力衰竭为临床特征 。西医治疗 MF 以                          脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）、腺苷激酶（adenosine
          强心、利尿、扩张血管及抑制神经内分泌药物为主 ，虽                           kinase，ADK）抗体和 TriQuick 总 RNA 提取试剂、cDNA
                                                     [2]
          能改善临床症状，但难以逆转 MF 进程。中医古籍虽无                          合成试剂盒、实时荧光定量 PCR 扩增试剂（武汉赛维尔
          MF的记载，但依据患者临床表现可将其归为“胸痹”“心                          生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 GB112099-100、
          悸”“喘证”范畴，慢性心脏疾病使血行不利成瘀，瘀血化生                         GB112419-100、R1100、G3330、G3320）。
          痰饮，痰瘀互结，日久易引发蕴毒，蚀肌伤肉，终至MF 。                         1.3 实验动物
                                                       [3]
              熊果苷是一种糖苷类化合物，化学名为对苯二酚葡                              本研究所用动物为健康SD大鼠，雌雄各半，8周龄，
          萄糖苷，存在于杜鹃花科植物熊果叶中，具有抑制黑色                            体重为180～200 g，购自郑州市惠济区华兴实验动物养
          素形成、抗氧化、抗炎、抑菌、镇咳、祛痰、抗肿瘤等药理                          殖场，动物生产许可证号为SCXK（豫）2019-0002。所有
              [4]
          作用 。有研究表明，熊果苷可以减轻炎症反应，对阵发                           大鼠分笼饲养，室温为20～22 ℃，相对湿度为55%～60%，
                                              [5]
          性心房颤动模型大鼠的心脏具有保护作用 。但是熊果                            正常光照，自由饮水采食。本研究获河南中医药大学实
                                                              验动物伦理委员会批准，编号为DWLL202201010。
          苷是否对 MF 具有改善作用尚不明确。基于此，本研究
                                                              2 方法
          首先采用网络药理学与分子对接方法预测熊果苷干预
                                                              2.1 网络药理学分析
          MF的潜在靶点，再以卡托普利为阳性对照药物，观察熊
                                                              2.1.1 熊果苷-MF共同靶点筛选
          果苷对 MF 模型大鼠心脏功能、病理变化及纤维化的影
          响，并验证熊果苷改善MF的潜在靶点，以期为挖掘MF                               通 过 PubChem 数 据 库（https：//pubchem. ncbi. nlm.
                                                              nih.gov/）搜索关键词“arbutin”获取熊果苷分子结构，导
          的潜在治疗药物奠定基础。
                                                              入 Swiss Target Prediction 数据库（https：//www.swisstar‐
          1 材料
                                                              getprediction.ch），得到熊果苷预测靶点；以“myocardial
          1.1 主要仪器
                                                              fibrosis”为 关 键 词 在 GeneCard 数 据 库（https：//www.
              本研究所用的主要仪器有 BSA124S-CW 型电子天
                                                              genecards.org/）、OMIM 数据库（https：//www.omim.org）、
          平（德国 Sartorius 公司），BL-420F 型生物信号采集系统
                                                              TTD数据库（https：//db.idrblab.org/ttd）中搜索靶点，合并
         （成都泰盟软件有限公司），SpectraMax iD3型酶标仪[美
                                                              去重后得 MF 相关靶点；再将熊果苷预测靶点与 MF 相
          谷分子仪器（上海）有限公司]，RM2235 型石蜡切片机
                                                              关靶点导入 Venny2.1 在线绘图工具（https：//bioinfogp.
         （德国 Leica 公司），L720R-3 型冷冻离心机（湘仪离心机
                                                              cnb.csic.es/tools/venny/），绘制 Venny 图并得到交集靶
          仪器有限公司），YD-6D 型组织包埋机、YD-A 型组织
                                                              点，即为熊果苷干预MF的潜在作用靶点。
          摊片机、YD-B 型组织烤片机（金华市科迪仪器设备有
                                                              2.1.2 熊果苷-MF靶点PPI网络构建与核心靶点筛选
          限公司），CX23 型光学显微镜（日本 Olympus 公司），
                                                                  将“2.1.1”项下交集靶点导入 String 数据库（https：//
          StepOne 型实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）。
                 TM
                                                              cn.string-db.org）进行蛋白质-蛋白质相互作用（protein-
          1.2 主要药品与试剂
                                                              protein  interaction，PPI）分 析 ，得 PPI 网 络 图 ；利 用
              本研究所用的主要药品与试剂有熊果苷对照品（上                          Cytoscape 3.9 软件对 PPI 网络进行拓扑学分析，以度
          海毕得医药科技股份有限公司，纯度 99.92%，批号                         （Degree）值大于平均值为标准筛选核心靶点。
          RNZ339），卡托普利片（常州制药厂有限公司，批号                          2.1.3 GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析
          20081513，规格 25 mg/片），盐酸异丙肾上腺素注射液                        将“2.1.1”项下交集靶点导入DAVID数据库（https：//
         （西南药业股份有限公司，批号210901，规格0.5 mg/mL），                   david.ncifcrf.gov），将物种设定为“Homo sapiens”，以
          羧甲基纤维素钠（CMC-Na）（国药集团化学试剂有限公                         P≤0.05为标准，进行基因本体（gene ontology，GO）功能
          司，批号 20160704），氨基甲酸乙酯（天津市光复科技发                      分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia
          展有限公司，批号 20210902），苏木素染色液、伊红染色                      of genes and genomes，KEGG）信号通路富集分析。
          液（福州飞净生物科技有限公司，批号分别为 190805、                        2.1.4 分子对接
          20211009），肌酸激酶（creatine kinase，CK）、乳酸脱氢酶                从TCMSP数据库（https：//tcmsp-e.com）中下载熊果
         （lactate dehydrogenase，LDH）、N 末端前脑钠肽前体（N-            苷的mol2结构文件；再从PDB数据库（https：//www.rcsb.
          terminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP）酶联免  org）中 下 载 核 心 靶 点 蛋 白 的 PDB 结 构 文 件 ，利 用
          疫吸附测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号分别为                          AutoDock Tools 1.5.7 软件将熊果苷与核心靶点进行分
          H491-1、H185、H334-1），Ⅰ型胶原蛋白（typeⅠ collagen，          子对接，若结合能＜－5 kJ/mol 说明 2 个分子间具有亲
          Col Ⅰ）、Col Ⅲ测定试剂盒（江苏酶免实业有限公司，批                      和力，且结合能数值越低表明2个分子间的结合越稳定。


          · 530 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 5                               中国药房  2024年第35卷第5期
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