Page 77 - 《中国药房》2024年3期

mechanism of which may be associated with the regulation of PI3K/Akt/NF-κB signaling pathway.
KEYWORDS Setaria italica； insomnia； neuroinflammation； PI3K/Akt/NF-κB signaling pathway

失眠，又称睡眠障碍，主要表现为入睡困难或者难 （批号分别为 17042603、21101405、21012903，纯度均≥
以维持睡眠状态，其不仅会影响人们学习记忆的正常功 98%）均购自成都普菲德生物技术有限公司；PCPA（批号
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能，还容易导致免疫功能紊乱，诱发并增加神经炎症 。 C13957194）购自上海麦克林生化科技有限公司；5-羟色
目前临床上常用苯二氮 类或非苯二氮 类化学药物 胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）、5- 羟 吲 哚 乙 酸（5-hy‐
治疗失眠，这类药物价格高、不良反应明显，长期使用易 droxyindoleacetic acid，5-HTAA）、脑源性神经营养因子
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产生药物依赖性 。因此，开发具有疗效明确和安全性 （brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、白细胞介素2
高的天然草本药物具有极大的现实意义。据报道，炎症 （interleukin-2，IL-2）、IL-6、B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lym‐
因子是失眠的重要发病机制之一，磷脂酰肌醇 3 激酶 phoma-2，Bcl-2）和 Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2-associated X
（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋 白 激 酶 B（protein protein，Bax）酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immuno‐
kinase B，Akt）信号通路是体内调节细胞存活、凋亡及炎症 sorbent assay，ELISA）试剂盒（批号均为 202210）均购自
的重要通路，其可通过调控核因子 κB 亚基 p65（nuclear 上海泛柯实业有限公司；兔源 NF-κB p65、磷酸化 NF-
factor-κB subunit p65，NF-κB p65）的表达，调节炎症因 κB p65（p-NF-κB p65）、PI3K、磷酸化 PI3K（p-PI3K）、
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子水平，实现神经保护作用，从而延缓失眠的发生 。 Akt、磷酸化 Akt（p-Akt）、β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗
秫米为禾本科植物粱Setaria italica （L.）Beauv.或粟 体（批 号 分 别 为 BS1253、AP0124、BS3678、AP0854、
Setaria italica （L.）Beauv. var. germanica（Mill.）Schrad.的 BS1810、BS4006、AP0060）均购自武汉爱博泰克生物科
黏性种子，味甘，性微寒，入肺、胃、大肠经，具有祛风除 技有限公司）；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔
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湿、和胃安神、解毒敛疮的功效 。秫米与半夏组成的半 IgG 二抗（批号 BA1054）购自武汉博士德生物工程有限
夏秫米汤被誉为治疗失眠的第一方，临床应用极为广 公司。
泛 。现代药理研究表明，方中半夏水提物对小鼠有镇 1.3 动物
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静催眠作用 ；而秫米作为一种天然草本药物，目前关于 本研究所用动物为 SPF 级雄性 ICR 小鼠，共 60 只，
其镇静安神作用的研究鲜有报道。基于此，本研究拟以 体重（20±2） g，由斯贝福（北京）生物技术有限公司提
对氯苯丙氨酸（para-chlorophenylalanine，PCPA）诱导失 供，动物生产许可证号为 SCXK（京）2019-0010，合格证
眠小鼠模型，通过观察小鼠行为学变化和测定生化指 号为 10011230101930023。动物购入后，先在洁净环境
标，围绕PI3K/Akt/NF-κB信号通路初步探究秫米提取物 中适应性饲养3 d，饲养环境温度为（23±1） ℃。饲养期
改善失眠的作用及可能机制，为秫米的进一步开发利用 间，给予普通饲料喂养，自由饮水，并保持垫料干燥、环
提供实证支持，也为中医药防治失眠提供实验依据。 境安静。本研究动物实验设计和实施方案通过了山西
1 材料 中 医 药 大 学 伦 理 委 员 会 审 核 和 批 准（编 号 为

1.1 主要仪器 AWE202304295）。
本研究所用仪器主要包括 HC-2518 型高速离心机 2 方法
（安徽中科中佳科学仪器有限公司），OFT-100型大小鼠开 2.1 药物制备
场活动实验系统（成都泰盟科技有限公司），Synergy HTX （1）秫米提取物细粉：称取秫米 50 g，加 10 倍量
型酶标仪（美国Bio-Tek公司），KZ-Ⅲ-F型研磨仪、SVE- （mL/g）蒸馏水浸泡 15 min 后，加热回流提取 30 min，过
2型垂直电泳仪（武汉赛维尔生物科技有限公司），DYY- 滤后加8倍量蒸馏水二次提取，合并上清液并浓缩至适
6C型电泳仪电源（北京六一生物科技有限公司）等。 宜浓度，冷冻干燥后收集细粉（得率45.3%），经紫外分光
1.2 主要药品与试剂 光度法 [7―9] 测得提取物中总皂苷、总多酚、总多糖含量分
秫米（批号 220508）购自山西省农业科学院高寒区 别为0.31%、0.08%、4.95%。将提取物干燥保存，备用。
作物研究所，经山西中医药大学中药与食品工程学院张 （2）PCPA 溶液配制：精密称定 PCPA 1.0 g，溶于 30
朔生教授鉴定为禾本科植物粱 S.italica（L.）Beauv. 或粟 mL生理盐水中，再加入20 μL 聚山梨酯80促溶，涡旋混
S.italica （L.） Beauv. var. germanica （Mill.） Schrad. 的黏 匀后得到PCPA混悬液。
性 种 子 。 地 西 泮 片（国 药 准 字 H10970219，批 号 （3）地西泮混悬液的制备：取地西泮1片，研成粉末，
20220701，每片含地西泮1.25 mg）购自济宁市安康制药 加入 12.5 mL 生理盐水，超声（功率 250 W，频 率 40
有限责任公司；对照品葡萄糖、人参皂苷 Rb1、没食子酸 kHz）15 min，配制成质量浓度为 0.1 mg/mL的混悬液。

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